馮宇杰，俞霖潔，王晨茜，吳航俊

（浙江省化工研究院有限公司，浙江 杭州 310023）

0 前言

二噻農(nóng)，又稱二氰蒽醌，是德國Merck公司于20世紀(jì)60年代開發(fā)的殺菌劑品種，可防治多種真菌性病害，特別是對(duì)炭疽病效果顯著。肟菌酯，又名肟草酯，是甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑，對(duì)真菌綱病害如白粉病、銹病、潁枯病、稻瘟病等均有良好的活性[1]。目前，有關(guān)二噻農(nóng)的檢測方法主要有高效液相色譜法和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[2-3]，有關(guān)肟菌酯的檢測方法主要有高效液相色譜法、氣相色譜法和超高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜法[4-6]，關(guān)于二噻農(nóng)和肟菌酯復(fù)配制劑的分析方法未見報(bào)道。

本文采用Inertsil ODS-3色譜柱和二極管陣列檢測器，建立了二噻農(nóng)和肟菌酯同柱分離測定的高效液相色譜方法。該方法操作簡便、快速準(zhǔn)確，可作為企業(yè)產(chǎn)品質(zhì)量控制和質(zhì)檢機(jī)構(gòu)質(zhì)量檢測的參考方法。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

Dionex U3000高效液相色譜儀：具二極管陣列檢測器、自動(dòng)進(jìn)樣器和Chromeleon 7.0色譜處理工作站； 色譜柱：Inertsil ODS-35 μm， 4.6×250 mm不銹鋼柱；乙腈：色譜純，臨海市浙東特種試劑有限公司；水：二次蒸餾水；二噻農(nóng)標(biāo)樣：99.0%，德國 Dr.Ehrenstorfer；肟菌酯標(biāo)樣：99.0%，國家農(nóng)藥質(zhì)檢中心 （定值）；400 g/L二噻農(nóng)·肟菌酯懸浮劑：由某企業(yè)提供。

1.2 溶液配制

標(biāo)準(zhǔn)溶液：分別稱取二噻農(nóng)、肟菌酯標(biāo)樣約0.018 g（準(zhǔn)確至0.0002 g），置于50 mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻。

樣品溶液：稱取約0.1 g（準(zhǔn)確至0.0002 g）400 g/L二噻農(nóng)·肟菌酯懸浮劑樣品，置于50 mL容量瓶中，先用約3 mL水將樣品分散，再用乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜過濾后待用。

1.3 色譜條件

流動(dòng)相：φ（乙腈+水）=70+30；進(jìn)樣量：5 μL；流速：1.0 mL/min；柱溫：35 ℃；檢測波長：254 nm。

1.4 測定步驟

1.4.1 測定

在上述操作條件下，待儀器穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)準(zhǔn)溶液。計(jì)算各針相對(duì)響應(yīng)值，待相鄰兩針的相對(duì)響應(yīng)值小于1.5%時(shí)，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測定。

1.4.2 計(jì)算

將測得的2針試樣溶液以及試樣溶液前后2針標(biāo)樣溶液中二噻農(nóng)（或肟菌酯）的峰面積分別進(jìn)行平均。試樣中二噻農(nóng)（或肟菌酯）的質(zhì)量分?jǐn)?shù)X/%按下式計(jì)算：

式中：A1——2針標(biāo)樣溶液中二噻農(nóng)（或肟菌酯）峰面積的平均值；

A2——2針試樣溶液中二噻農(nóng)（或肟菌酯）峰面積的平均值；

m1——標(biāo)樣的質(zhì)量，g；

m2——試樣的質(zhì)量，g；

p——標(biāo)樣中二噻農(nóng)（或肟菌酯）的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

2 結(jié)果和討論

2.1 色譜條件的選擇

通過Dionex U3000液相色譜儀配置的二極管陣列檢測器的光譜數(shù)據(jù)采集功能，獲得的二噻農(nóng)與肟菌酯紫外吸收譜圖見圖1。從圖1可知，二噻農(nóng)在200 nm和236 nm處均有較大吸收，肟菌酯在190 nm、253 nm處有較大吸收。經(jīng)過實(shí)驗(yàn)比對(duì)，選擇254 nm作為最佳檢測波長，在此波長下峰形良好，二噻農(nóng)和肟菌酯紫外吸收比例合適，無雜質(zhì)干擾。

圖1 二噻農(nóng)（a）和肟菌酯（b）的紫外吸收光譜圖

根據(jù)二噻農(nóng)與肟菌酯的性質(zhì)，選擇乙腈溶解樣品，以不同比例的乙腈和水，對(duì)其進(jìn)行有效分離。當(dāng)φ （乙腈+水）=70+30，流速為1.0 mL/min時(shí)，兩組分能得到很好的分離，峰形尖銳，對(duì)稱，基線平穩(wěn)，保留時(shí)間適中，分別為二噻農(nóng)約6.3 min，肟菌酯約11.5 min，見圖2。

圖2 肟菌酯（a）和二噻農(nóng)（b）的標(biāo)樣溶液液相色譜圖

2.2 方法線性關(guān)系

分別稱取二噻農(nóng)和肟菌酯標(biāo)準(zhǔn)品0.15 g（準(zhǔn)確至0.0002 g），置于50 mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻。用移液管分別準(zhǔn)確移取2.0 mL、4.0 mL、6.0 mL、8.0 mL、10.0 mL 上述溶液于5個(gè)50 mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻。按照1.3色譜操作條件，分別進(jìn)樣進(jìn)行測定。以二噻農(nóng)（肟菌酯）質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，二噻農(nóng)（肟菌酯）峰面積為縱坐標(biāo)，繪制線性相關(guān)曲線（見圖3）。計(jì)算得二噻農(nóng)線性回歸方程為y=215.62x-0.6477（R2=1.0000），肟菌酯線性回歸方程為y=146.2x-0.029（R2=1.0000）。

圖3 二噻農(nóng)（a）和肟菌酯（b）的線性關(guān)系圖

2.3 方法準(zhǔn)確度

取400 g/L二噻農(nóng)·肟菌酯懸浮劑樣品，準(zhǔn)確測定其中二噻農(nóng)與肟菌酯質(zhì)量分?jǐn)?shù)。再稱取5份樣品，分別準(zhǔn)確加入一定量的標(biāo)樣，根據(jù)稱取樣品量和加入標(biāo)樣量計(jì)算出二噻農(nóng)和肟菌酯的理論含量。按照1.3色譜操作條件，進(jìn)樣分析，獲得二噻農(nóng)和的肟菌酯實(shí)測含量。測得二噻農(nóng)回收率在98.9%～100.3%之間，平均回收率為99.5%，肟菌酯回收率在99.1%～100.6%之間，平均回收率為99.8%，結(jié)果見表1。

表1 方法準(zhǔn)確度

2.4 方法精密度

在上述方法下對(duì)同一批次400 g/L二噻農(nóng)·肟菌酯懸浮劑樣品重復(fù)測定6次，分別獲得二噻農(nóng)和肟菌酯的標(biāo)準(zhǔn)偏差和變異系數(shù)，結(jié)果見表2。

3 結(jié)論

建立了一種可同時(shí)對(duì)400 g/L肟菌酯·二噻農(nóng)懸浮劑中兩個(gè)有效成分進(jìn)行定量檢測的高效液相色譜方法。試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法具有線性關(guān)系良好、定量準(zhǔn)確、操作簡便、分析速度快等特點(diǎn)，能滿足產(chǎn)品的質(zhì)量分析要求。

表2 方法精密度

參考文獻(xiàn)：

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