★李文生 魏東 譚梅英（1.南海大瀝鹽步社區(qū)衛(wèi)生服務中心 廣東 佛山 5800；.廣東省第二中醫(yī)院 廣州 510095）

自然殺傷細胞（natural killer cell，NK）為CD3/CD16+56，該細胞介導對某些腫瘤和病毒感染細胞的細胞毒作用［1］，是先天免疫反應的關鍵因素，它通過殺死被病毒感染的細胞或產生細胞因子，與適應性免疫系統(tǒng)的細胞相互作用來防御病毒感染［2］。NK細胞占肝臟淋巴細胞總數(shù)的25%～50%，當肝臟受到病毒、酒精、化學藥物等多種致病因素損傷時，NK細胞即被激活并發(fā)揮其免疫活性作用［3］。所以，NK細胞在防御慢性肝炎病毒感染方面發(fā)揮著重要作用。在我國大約有9300人感染乙肝病毒，通過了解CHB感染過程中免疫細胞的變化特點，對于提供有效免疫調節(jié)治療策略具有重要意義。本次研究通過流式細胞儀檢測外周血中NK細胞的變化特征，以期分析免疫特征與丙氨酸氨基轉移酶（alanine transaminase，ALT）、乙型肝炎病毒定量（HBV-DNA）水平的關系。

1 一般資料

2016年5—2017年11月于南海大瀝鹽步社區(qū)衛(wèi)生服務中心乙肝病患人群進行流行病學調查后隨機采樣，共收集了64例乙肝患者，其中男33例，女31例；年齡22～59歲，平均（38.11±10.86）歲。入選標準為有慢性肝炎的癥狀或體征，血清HBsAg陽性或（和）血清HBVDNA陽性，持續(xù)時間半年以上。排除合并丙肝病毒、丁肝病毒、庚肝病毒、戊肝病毒、巨細胞病毒、EB病毒感染者。符合2015年慢性乙型肝炎防治指南的診斷標準［4］。按照肝功能情況將CHB患者分為32例肝功能異常組（丙氨酸轉氨酶＞2～5ULN）和32例肝功能正常組。另選30例健康體檢者作為對照組，其中男17例，女13例；年齡24～65歲，平均（31.65±8.43）歲。三組在年齡、性別組成方面比較，上無顯著性差別（P＞0.05）。

2 實驗方法

流式細胞儀：BD FACSCalibur，試劑：白細胞分化抗原CD3/CD16+56/CD45檢測試劑盒，流式細胞儀及試劑均為BD公司產品，由廣州金域檢驗中心檢測。

所有患者均在晨起空腹無菌方式靜脈血5mL，采集到無菌的K3 EDTA（乙二胺四乙酸）VACUTAINER采血管中。保存在室溫（20℃～25℃）下的抗凝血，并在抽取后6h內染色，染色后6h內進行檢測。檢測結果使用軟件 CellQuest采集并分析。結果表示為淋巴細胞群中陽性細胞百分比。

3 統(tǒng)計學分析

實驗數(shù)據(jù)結果以均數(shù)±標準差表示，計量資料采用單因素方差分析，用SPSS 19.0統(tǒng)計學軟件處理，組間比較方差分析，檢驗水準以P＜0.05判斷差異有無統(tǒng)計學意義。

4 結果

4.1 各組間CD3/CD16+56與ALT比較 在肝功能不同階段，肝功能正常組的CD3/CD16+56與對照組間比較，無顯著性差異，而與肝功能異常組比較，組間差異有顯著性，P＜0.05，說明肝功能異常時外周血CD3/CD16+56降低。見表1。

4.2 各組間CD3/CD16+56與HBV-DNA比較 在HBV-DNA相關性方面，肝功能正常組與肝功能異常組比較，HBV-DNA水平增高，具有顯著性差異，P＜0.05。見表 1。

表1 各組間外周血與ALT、HBV-DNA比較

5 討論

乙型肝炎病毒（HBV）感染是全球公共衛(wèi)生問題，我國有超過9 300萬人感染HBV，HBV病毒感染引起肝損傷主要是由宿主免疫反應導致。感染HBV在早期多數(shù)是隱性的，被感染者沒有任何臨床表現(xiàn)，在急性期時，病毒會被先天免疫反應系統(tǒng)發(fā)現(xiàn)并抑制，隨后出現(xiàn)強效而有力的適應性免疫反應，并伴有病毒的清除［5］。而在慢性乙型肝炎患者中，先天和適應性免疫反應都很弱，因此很少導致病毒清除，而呈現(xiàn)病毒的活躍性。

本研究結果表明，慢性乙型肝炎（CHB）肝功能正?；颊咄庵苎蠧D3/CD16+56細胞與肝功能異常組比較，CD3/CD16+56明顯升高，而HBVDNA水平明顯減少，說明當肝功能正常時CD3/CD16+56細胞數(shù)量可能趨向于參與外周血HBVDNA的清除，HBV-DNA水平明顯減少，而肝臟的CD3/CD16+56細胞數(shù)量趨向減少，從而導致肝臟中病毒可以躲避免疫識別、清除，獲得免疫逃逸能力，導致HBV的持續(xù)感染。

當慢性乙型肝炎患者出現(xiàn)肝功能異常時，本研究中肝功能異常組外周CD3/CD16+56細胞數(shù)量減少，而HBV-DNA水平增高，提示可能是過度活躍的病毒導致CD3/CD16+56細胞向肝臟內遷移，造成外周CD3/CD16+56暫時性的減少，肝臟內病毒被抑制清除，發(fā)生炎性及免疫性反應，在清除病毒的同時，也會造成肝損傷，故發(fā)生ALT上升。在王陸軍等［6］研究報道中，對于肝功能異常的CHB患者，肝內促炎癥亞群CD16+顯著增加，且與ALT呈正相關，部分證實了CD3/CD16+56細胞向肝臟內遷移的可能，并促進了CHB患者的肝臟內炎性損傷，說明CD3/CD16+56的變化參與了病毒的清除過程，這在慢性乙型肝炎的病毒清除機制中可能具有重要意義。另一項縱向研究顯示［7］，CHB患者在使用48周替比夫定抗病毒治療過程中，CD56NK細胞的數(shù)量和活性功能的恢復，使部分先天免疫應答功能得到增強，這將有助于HBV-DNA病毒的清除，從而實現(xiàn)對CHB患者的長期病毒控制。因此，機體CD3/CD16+56細胞水平的高低可影響CHB患者HBV的復制和肝功能損害的程度。

總之，本次通過研究CHB患者兩組不同肝功能水平時外周血CD3/CD16+56變化情況，結果顯示當肝功能異常時，外周血CD3/CD16+56細胞趨向低水平，患者的免疫狀況逐漸下降，乙肝病毒的活動逐漸增強，說明這可能是導致病毒持續(xù)感染的原因之一，因此，CD3/CD16+56水平對于判斷CHB患者免疫功能及預后具有非常重要作用，但本研究中關于肝臟內淋巴細胞變化趨勢及其炎癥因子表達狀況如何，由于未進一步對肝臟病理免疫分析，故無法評價肝臟內CD3/CD16+56及HBV-DNA相關變化。

參考文獻

［1］Fitzgerald-Bocarlsy P, Herberman R, Hercend T, et al.A definition of natural killer cells.Natural Killer Cells and Host Defense [M]. Basel: Karger, 1989:1.

［2］C Colomba, A Cascio, C Caruso, et al. Role of combination NK/KIRs in the natural history of viral infections [J]. Recenti Prog Med, 2017,108(7):333-337.

［3］Sun C, Sun HY, Xiao WH, et al. Natural killer cell dysfunction in hepatocellular carcinoma and NK cell-based immunotherapy [J]. Acta Pharmacol Sin, 2015, 36(10):1 191-1 199.

［4］中華醫(yī)學會肝病學分會，中華醫(yī)學會感染病學分會.慢性乙型肝炎防治指南（2015版）[J]. 中國肝臟病雜志, 2015, 3(7):1-18.

［5］Tseng TC, Huang LR.Immunopathogenesis of Hepatitis B Virus [J].Journal of Infectious Diseases, 2017, 216(8):765-770.

［6］王陸軍, 呂吉云,張紀元，等.促炎癥CD16+單核細胞增加與慢性乙型肝炎患者的肝損傷和纖維化程度關系[J]. 傳染病信息, 2011,24(4):211-214.

［7］Chen T, Zhu L, Shi A, et al. Functional restoration of CD56(bright)NK cells facilitates immune control via IL-15 and NKG2D in patients under antiviral treatment for chronic hepatitis B [J]. Hepatol Int, 2017,11(5):419-428.