王文文,張炳亮,董發(fā)明,馬 霞,張國祖,黃一帆

(1.河南科技大學(xué)動物科技學(xué)院,河南 洛陽 471023;2.河南省康星藥業(yè)股份有限公司,河南 鄭州 451464;3.河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院,河南 鄭州 450011;4.福建農(nóng)林大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院,福建 福州 350002)

雞腎腫癥是對雞的腎腫大、腎結(jié)石、腎炎、腎病、內(nèi)臟痛風(fēng)、尿酸鹽沉積、酸中毒等的統(tǒng)稱,也叫腎臟腫大綜合征,是現(xiàn)代養(yǎng)雞業(yè)中雞死亡的主要疾病之一,不同日齡的雞群均可發(fā)生,死亡率10% ～30%[1],當(dāng)其他疾病伴隨著腎腫癥發(fā)生時,其死亡率將會增加1倍以上[2],嚴(yán)重危害養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。

商陸也叫當(dāng)陸、章柳、白昌、夜呼、馬尾,是商陸科植物商陸(Phytolacca acinosaRoxb.)或垂序商陸(Phytolacca americanaL.)的干燥根。味辛,性平,有毒,歸肺、脾、腎、大腸經(jīng),主治水腫、疝氣腫大、腹脹、疏通五臟,消除各種水腫,外用解毒散結(jié)[3-4]。中藥具有天然無公害、毒副作用小、不易產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)勢。本試驗分別采用水煎法、水提醇沉法、減壓干燥法、滲漉法4種提取方法制備商陸提取物,旨在研究不同提取物對人工誘發(fā)的雞腎腫癥的治療效果,篩選治療效果最佳的商陸提取方法,為研制開發(fā)治療雞腎腫癥效果更好的藥物提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要儀器 PF-300型全自動生化分析儀,購自深圳市普康電子有限公司;JY系列多功能電子天平,購自上海衡平儀器儀表廠;酶聯(lián)免疫檢測儀,購自賽默飛世爾(上海)儀器有限公司。

1.2 試驗藥物 商陸試驗用藥由河南省康星藥業(yè)股份有限公司中獸藥新制劑實驗室制備,通過水煎法、水提醇沉法(醇沉終濃度90%)、減壓干燥法、滲漉法(90%乙醇滲漉)4種提取方法制備得4種商陸提取物,濃度均為每1 mL相當(dāng)于原生藥1 g。高效液相色譜法測得商陸皂苷甲(Esculentoside A,EsA)的含量依次為 0.73 mg/mL、0.98 mg/mL、0.68 mg/mL、1.72 mg/mL;消腫解毒散,購自河北征宇制藥有限公司;作為本試驗的對照藥;磺胺甲基異惡唑(SMZ)原粉,購自鄭州天順公司,作為本試驗造模用藥。

1.3 檢測試劑 腎組織NO檢測試劑盒由R&D System Inc.,Minneapolis,USA.生產(chǎn),實驗操作嚴(yán)格按照說明書,UA、Cr標(biāo)準(zhǔn)品由廣州科方生物技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)。

1.4 動物模型建立 1日齡AA肉雞正常飼喂到第10日齡,采用SMZ 0.8 g/kg體重拌料給藥,連續(xù)給SMZ 7 d,雞只出現(xiàn)精神沉郁、采食和飲水量明顯下降、糞便稀薄及個別雞只出現(xiàn)死亡時開始給各商陸提取物。

1.5 試驗動物與分組 420只AA肉雞隨機(jī)分成7組,分別為商陸水煎組、商陸醇沉組、商陸減壓干燥組、商陸滲漉組、消腫解毒散組、陽性對照組、空白對照組,每組60只,每組均分為3個重復(fù)。1～4組為造模用藥治療組,在飲水中按每千克體重分別添加0.5 mL水煎商陸提取物、醇沉商陸提取物、減壓干燥商陸提取物、滲漉商陸提取物,連續(xù)給藥5 d,第5組按照說明書在飼料中添加消腫解毒散為用藥對照組,第6組造模不用藥為陽性對照組,第7組不造模不用藥為空白對照組。具體分組與處理見表1。

表1 分組與處理

1.6 測定指標(biāo) 每日觀察并記錄各組采食、飲水、精神、糞便、死亡等情況。在給藥前及給藥結(jié)束、停藥第5天,對存活雞只分別稱重,統(tǒng)計增重情況。在給藥前、用藥結(jié)束及停藥5 d每組隨機(jī)抽取6只雞翅靜脈采血制備血清,生化分析儀測定血清UA和Cr的含量。在給藥前、用藥結(jié)束及停藥5 d每組隨機(jī)抽取6只雞翅靜脈采血制備血清,酶聯(lián)免疫試劑盒檢測血清中腎組織NO的含量。在給藥前、給藥結(jié)束后及停藥第5天每組隨機(jī)抽取6只雞剖檢,取腎臟去掉脂肪和系膜稱重測定腎指數(shù)變化,腎指數(shù)=腎重(g)/活體重(kg)。

1.7 療效評價標(biāo)準(zhǔn) 痊愈:雞精神活潑,采食飲水完全正常。顯效:雞存活,但精神、飲水及采食等未完全恢復(fù)正常。無效:雞死亡,剖檢出現(xiàn)腎臟腫大、花斑腎及尿酸鹽沉積等癥狀。有效率=(痊愈數(shù)+顯效數(shù)/樣本數(shù))×100%。

1.8 統(tǒng)計學(xué)分析 用SPSS 19.0軟件對試驗數(shù)據(jù)進(jìn)行Duncan′s多重分析,比較各組差異的顯著性;試驗數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 各組臨床癥狀 在造模后用藥前,各模型組雞精神沉郁、拉稀、飲水和采食量下降;各用藥組在用藥第2天,采食和精神明顯轉(zhuǎn)好,在用藥的第4天,各用藥組的雞采食量和精神狀況進(jìn)一步恢復(fù),拉稀癥狀也逐漸好轉(zhuǎn);用藥結(jié)束時,各用藥組采食量和飲水基本正常,陽性對照組的飲水采食量仍顯著低于各用藥組和空白對照組,各用藥組中商陸滲漉組雞只精神、采食狀況恢復(fù)最好。

2.2 各用藥組體重變化 在給藥前,各模型組間雞只體重差異不顯著,但顯著低于空白對照組(P<0.05);在用藥結(jié)束后,商陸各用藥組和獸藥對照組體重均顯著低于空白對照組,但高于陽性對照組(P<0.05);停藥第5天,各用藥組的體重均高于陽性對照組,商陸滲漉組體重高于其他各用藥組,但仍低于空白對照組(P<0.05)。結(jié)果見表2。

表2 用藥前后體重變化

2.3 各組總體療效 各商陸用藥組和獸藥對照組的死亡率均顯著低于陽性對照組(P<0.05);各商陸用藥組和獸藥對照組的治愈率和有效率均顯著高于陽性對照組,但低于空白對照組(P<0.05)。結(jié)果見表3。

表3 各組的總體療效

2.4 血清中UA的含量變化 在給藥前,各模型組血清中UA的含量顯著高于空白對照組(P<0.05);在給藥結(jié)束后,各商陸用藥組和獸藥對照組血清中UA的含量高于空白對照組,但顯著低于陽性對照組(P<0.05);停藥5 d時,各商陸用藥組和獸藥對照組血清中UA的含量顯著低于陽性對照組(P<0.05),商陸滲漉組血清中UA的含量高于空白對照組但差異不顯著(P>0.05)。結(jié)果見表4。

表4 各組血清UA的含量 (μmol/L)

2.5 血清中Cr的含量變化 在給藥前,模型組血清中Cr的含量高于空白對照組(P<0.05);給藥結(jié)束后各用藥組的Cr含量低于陽性對照組,但仍高于空白對照組(P<0.05);停藥第5天時,商陸滲漉組Cr的含量顯著低于其他各用藥組和陽性對照組(P<0.05),和空白對照組相比差異不顯著(P>0.05)。 結(jié)果見表 5。

表5 各組血清中Cr的含量 (μmol/L)

2.6 腎組織NO的含量變化 在給藥前,各模型組腎組織NO的含量顯著高于空白對照組(P<0.05);給藥結(jié)束后,商陸各用藥組及獸藥對照組的腎組織NO含量仍高于空白對照組但顯著低于陽性對照組(P<0.05),停藥第5天,商陸滲漉組腎組織NO的含量高于空白對照組但差異不顯著(P>0.05)。 結(jié)果見表6。

表6 各組中腎組織NO的含量

2.7 各組腎臟指數(shù)變化 在給藥前,各模型組的腎臟指數(shù)均高于空白對照組(P<0.05);給藥結(jié)束后商陸各用藥組和獸藥對照組的腎臟指數(shù)均低于陽性對照組(P<0.05);停藥第5天時,商陸各用藥組和獸藥對照組與空白對照組相比差異不顯著(P>0.05),但均低于陽性對照組(P<0.05)。結(jié)果見表7。

表7 各組腎臟指數(shù)變化

3 討論

試驗結(jié)果顯示,不同方法提取得到的商陸提取物均可改善腎腫、腎損傷模型雞的體重、精神、采食、拉稀等臨床癥狀,各用藥組的治愈率和有效率均高于陽性對照組,說明商陸提取物對該藥物性引起的雞腎腫癥具有較好的治療效果,其中商陸滲漉提取物的治愈率和有效率高于其他各用藥組,效果最佳。

UA和Cr是反映腎功能的重要指標(biāo)[5],UA是動物體內(nèi)主要代謝產(chǎn)物,當(dāng)體內(nèi)UA過高,易引起腎功能衰退,常見于急慢性腎炎、腎損傷、痛風(fēng)等,Cr是肌肉在體內(nèi)代謝的產(chǎn)物,Cr主要由腎小球濾過排除體外,血清Cr的濃度變化主要由腎小球濾過率來決定,Cr濃度升高則表明,腎小球濾過能力下降,Cr過高意味著腎臟受損。有學(xué)者研究表明,臟器指數(shù)的升高表明該臟器受損,可作為判定病變的指標(biāo)之一[6]。本研究結(jié)果顯示,商陸提取物能顯著降低血清中UA和Cr的含量及腎指數(shù),尤其是商陸滲漉提取物對UA、Cr和腎指數(shù)的下調(diào)水平高于其他各用藥組,表明商陸提取物可能通過下調(diào)血清中UA、Cr的濃度達(dá)到治療雞腎腫的療效。

NO對腎臟組織具有保護(hù)和損傷的雙重作用,NO低水平持續(xù)合成,可起到抗炎、抑制腎小球系膜細(xì)胞增生的作用,但大量合成NO則會導(dǎo)致組織急性損傷,引發(fā)炎癥。本試驗結(jié)果顯示,模型組雞只腎組織NO的含量顯著升高,商陸能降低人工引起的腎損傷雞只腎組織NO的水平,其中商陸滲漉提取物能顯著降低腎組織NO含量,和空白對照組相比略高于空白對照組但差異不顯著(P>0.05)。龐軍[7-8]等研究發(fā)現(xiàn),商陸粗提物能降低阿霉素所致腎損傷大鼠的NO的濃度,起到保護(hù)腎臟的作用,和本研究結(jié)果一致。

文獻(xiàn)記載EsA是從中國商陸的塊根中提取的一種三萜皂苷類化合物,并有學(xué)者發(fā)現(xiàn)EsA對系膜增生性腎小球腎炎具有降低尿蛋白,改善腎小球血液循環(huán),保護(hù)腎臟的作用[9-10]。

本實驗室前期研究發(fā)現(xiàn),滲漉法提取的EsA是4種提取方法中含量最高的(1.72 mg/mL),在治療中的效果也尤為突出,EsA可是商陸中能起到通腎利尿、抗炎作用的有效成分之一,其作用機(jī)理有待進(jìn)一步研究。

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