何彪 邱振華 黃燕金 蘇曉文

【摘要】 目的：探討異常凝血酶原（protein induced by vitamin K absence or antagonist-Ⅱ，PIVKA-Ⅱ）與高爾基體蛋白（Golgi glycoprotein，GP73）聯(lián)合檢測對(duì)診斷血清甲胎蛋白（alpha-fetoprotein，AFP）低濃度的原發(fā)性肝癌（primary hepatic carcinoma，PHC）的臨床價(jià)值。方法：選取本院2015年3月-2016年12月AFP低濃度PHC72例，其他肝病68例，同期體檢正常對(duì)照組110例，分別檢測PIVKA-Ⅱ（ELISA）和GP73（ELISA）、AFP（化學(xué)發(fā)光法）的血清濃度水平。結(jié)果：PIVKA-Ⅱ與GP73聯(lián)合檢測在AFP低濃度PHC的系列試驗(yàn)特異度高達(dá)100%，聯(lián)合試驗(yàn)敏感度達(dá)90.2%。結(jié)論：單獨(dú)檢測PIVKA-Ⅱ和GP73對(duì)AFP低濃度肝癌具有較高的診斷價(jià)值，PIVKA-Ⅱ與GP73聯(lián)合檢測可提高AFP低濃度肝癌診斷。

【關(guān)鍵詞】 肝癌； PIVKA-II； GP73； AFP

【Abstract】 Objective：To combined detection of PIVKA-Ⅱ and GP73 for the diagnosis of low concentration of AFP PHC clinical value.Method：72 cases of low concentration of AFP PHC，and other liver diseases of 58 cases were selected in our hospital from May 2015 to December 2016，110 cases of normal control group in the same physical examination，they were detected in PIVKA-Ⅱ（ELISA）and GP73 （ELISA），AFP（chemiluminescence）concentration level.Result：Combined detection of PIVKA-Ⅱ and GP73 had high diagnostic efficacy at low AFP concentration in PHC，and the specificity of the test was as high as 100%.Joint test sensitivity was 90.2%.Conclusion：The independent detection of PIVKA-Ⅱ and GP73 is high diagnostic value for low AFP PHC，and the combined detection of PIVKA-II and GP73 can improve the diagnostic value of low AFP PHC.

【Key words】 Liver cancer； PIVKA-Ⅱ； GP73； AFP

First-authors address：The Peoples Hospital of Gaozhou，Gaozhou 525200，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.04.028

原發(fā)性肝癌（primary hepatic carcinoma，PHC）是現(xiàn)今我國第4位的常見惡性腫瘤，嚴(yán)重威脅我國人民的生命和健康[1-2]。對(duì)肝癌高危人群的篩查，有助于早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷、早期治療，是提高肝癌療效的關(guān)鍵。臨床上把早期的診療作為延長PHC患者生存期和改善生活質(zhì)量的重要策略。血清甲胎蛋白（alpha-fetoprotein，AFP）是目前大多數(shù)醫(yī)院最常用的PHC腫瘤標(biāo)志物，但靈敏度和特異性都不能滿足臨床需要，約30%的肝癌患者AFP水平正常[3]。人異常凝血酶原（protein induced by vitamin K absence or antagonist-II，PIVKA-Ⅱ）是肝臟合成的異常脫羧基凝血酶原，最近研究表示它能通過誘導(dǎo)和刺激肝癌細(xì)胞的增殖和侵襲。多項(xiàng)研究數(shù)據(jù)表明高爾基體蛋白（Golgi glycoprotein，GP73）在肝癌患者中有高濃度的表達(dá)，具有較高的特異性。本研究擬通過對(duì)PIVKA-Ⅱ與GP73濃度水平回顧性的分析，以提高在AFP低濃度的PHC實(shí)驗(yàn)室診斷水平，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2015年3月-2016年12月的肝病患者140例，納入標(biāo)準(zhǔn)：嚴(yán)格按照《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范》（2017年版）進(jìn)行篩選。排除標(biāo)準(zhǔn)：其他惡性腫瘤患者；嚴(yán)重感染或腎功不全患者；代謝性疾病患者；孕婦或哺乳期患者。其中AFP低濃度PHC組72例，PHC組病例選擇經(jīng)過病理組織切片或細(xì)胞學(xué)確診；非肝癌的其他肝病組經(jīng)影像或病理組織學(xué)確診68例。本研究已獲倫理學(xué)委員會(huì)批準(zhǔn)和患者知情同意。選取同期體檢健康者110例為健康對(duì)照組。

1.2 方法 所有待檢者均要求在清晨空腹?fàn)顟B(tài)下抽靜脈血3～5 mL，血液在室溫下自然凝固后，3 500 r/min分離血清，-75 ℃保存待測。PIVKA-Ⅱ、AFP使用雅培ARCHTECT-I2000進(jìn)行檢測，使用相應(yīng)的配套試劑。采用ELISA方法進(jìn)行測定GP73的濃度，試劑購于中山金橋生物制品公司。以上所有檢測均嚴(yán)格按照相應(yīng)的說明書進(jìn)行操作。

1.3 觀察指標(biāo)與評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 觀察各組PIVKA-Ⅱ、GP73的陽性率、特異性及敏感度。聯(lián)合檢測包括系列試驗(yàn)（串聯(lián)試驗(yàn)）和平行試驗(yàn)（并聯(lián)試驗(yàn)），采用多種方法檢測時(shí)，系列實(shí)驗(yàn)是指必須幾個(gè)指標(biāo)均為陽性才能診斷為陽性。平行試驗(yàn)是幾個(gè)指標(biāo)中有一個(gè)陽性即診斷為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料采用（x±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用率（%）表示，比較采用 字2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組患者一般資料比較 三組患者的年齡、性別比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

2.2 各組PIVKA-Ⅱ和GP73陽性情況比較 PIVKA-Ⅱ和GP73在AFP低濃度PHC組、其他肝病組和健康對(duì)照組兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。其他肝病組和健康對(duì)照組中PIVKA-Ⅱ和GP73陽性情況比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表2。

2.3 PIVKA-Ⅱ、GP73單項(xiàng)或聯(lián)合檢測的診斷效能分析 對(duì)于AFP低濃度PHC診斷效能分析，PIVKA-Ⅱ的敏感度（76.5%）和特異性（95.2%）均高于GP73的敏感度（72.2%）和特異性（94.6%）。在72例AFP低濃度PHC患者中，系列實(shí)驗(yàn)的特異度（100%）、準(zhǔn)確度（87.6%）高于平行實(shí)驗(yàn)，但敏感度（57.1%）低于平行實(shí)驗(yàn)（90.2%）。見表3。

3 討論

PHC為我國常見的消化系統(tǒng)腫瘤，具有惡性程度高、病情進(jìn)展快，致死率較高的特點(diǎn)。我國每年因肝癌死亡的人數(shù)占全球的一半。肝癌癥中晚期一般會(huì)伴有肝內(nèi)外的轉(zhuǎn)移，手術(shù)切除術(shù)效果較差。目前PHC的診斷主要依靠影像檢查和病理活檢切片檢查，對(duì)早期的篩查診斷造成了一定的困難。因此，疾病早期的篩查和及早地診斷在臨床治療PHC上顯得尤為必須和重要。

血清腫瘤標(biāo)志物對(duì)檢測PHC有重要的意義。文獻(xiàn)[4]研究發(fā)現(xiàn)，在PHC的早期篩查中，腫瘤標(biāo)志物檢測比影像學(xué)或組織病理學(xué)提前4～6個(gè)月，目前臨床上檢測AFP是診斷PHC的常用方法。AFP起源于胚胎肝細(xì)胞，在肝細(xì)胞發(fā)生癌變后部分肝癌細(xì)胞會(huì)恢復(fù)產(chǎn)生這種蛋白的能力[5]。但AFP用于原發(fā)性肝癌的診斷也存在一些局限性，對(duì)于檢測瘤體小的肝癌和早期肝癌，陰性率較高[6-8]。有資料指出包括肝內(nèi)膽管癌、高分化和低分化的PHC或已液化壞死的PHC患者，AFP濃度水平均發(fā)生不增高的情況，對(duì)于AFP低濃度或陰性的PHC患者容易造成漏診[9-11]，因此尋求新的標(biāo)志物，對(duì)疾病的早期診斷和治療有著重大的臨床意義。

PIVKA-Ⅱ由肝臟合成，但沒有相應(yīng)的凝血酶活性，是一種特異性較強(qiáng)和敏感度較高的腫瘤標(biāo)志物[12-14]。對(duì)于肝癌組織中產(chǎn)生PIVKA-Ⅱ的機(jī)制有多種說法，其中比較流行的包括在肝癌細(xì)胞中γ-羧基凝血酶原轉(zhuǎn)錄后表達(dá)異常和過多的凝血酶原前體產(chǎn)生、維生素K代謝異常后導(dǎo)致Vit-K可用性下降等一系列機(jī)制，從而導(dǎo)致在肝癌組織中過表達(dá)等。研究表明，肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)種動(dòng)物肝臟實(shí)驗(yàn)?zāi)墚a(chǎn)生大量PIVKA-Ⅱ并分泌到肝細(xì)胞外，而且濃度水平和種植時(shí)間成正相關(guān)[15-16]。本試驗(yàn)72例AFP低濃度的PHC患者中的PIVKA-Ⅱ的陽性率遠(yuǎn)高于其他肝病組和健康對(duì)照組，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），PIVKA-Ⅱ在其他肝病組的陽性率也高于健康對(duì)照組（P<0.05）。GP73是肝細(xì)胞中的一組高爾基體Ⅱ型跨膜糖蛋白，在正常生理情況下位于體內(nèi)細(xì)胞的高爾基順面膜囊上，血清濃度極低，但在病理狀況下可游離出肝細(xì)胞的表面分泌到血液中[17-18]。國內(nèi)外的研究發(fā)現(xiàn)PHC患者中的GP73可有較高的表達(dá)，而且具有較好的組織特異性和敏感性[18-21]。本試驗(yàn)結(jié)果為AFP低濃度PHC患者中的GP73陽性率高于其他肝病組和健康對(duì)照組，比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。表明了GP73對(duì)診斷AFP低濃度的PHC患者具有較高的陽性率，這與文獻(xiàn)[22-23]研究結(jié)果一致。在臨床上可以通過檢測GP73從而互補(bǔ)了AFP低濃度的PHC的臨床檢測。

本研究通過單獨(dú)檢測AFP低濃度的PHC患者中PIVKA-Ⅱ或GP73，發(fā)現(xiàn)前者的敏感度、特異度均高于后者，表明PIVKA-Ⅱ在AFP低濃度的PHC的診斷中有較好的價(jià)值，但目前暫未檢索與此相應(yīng)的研究數(shù)據(jù)或文獻(xiàn)報(bào)道。在兩個(gè)病例組的聯(lián)合實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，PIVKA-Ⅱ和GP73的系列試驗(yàn)特異度和準(zhǔn)確度均高于平行實(shí)驗(yàn)，其系列試驗(yàn)特異度高達(dá)100%。平行實(shí)驗(yàn)的敏感度也相應(yīng)地提高到90.2%。單項(xiàng)的PIVKA-Ⅱ或GP73都有其自身的診斷價(jià)值的同時(shí)也存在相應(yīng)的局限性。通過PIVKA-Ⅱ和GP73的聯(lián)合檢測可進(jìn)一步提高AFP低濃度的PHC的敏感性和特異性，增高疾病的檢出率，為診治提供更好依據(jù)。

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（收稿日期：2017-10-27） （本文編輯：周亞杰）