湯海燕 甘國興 李勁平 吳曉芳 謝保平 朱樹強

【摘要】 目的：研究疏肝健脾活血方對肝郁脾虛證功能性消化不良（functional dyspepsia，F(xiàn)D）大鼠血漿神經(jīng)降壓素（neurotensin，NT）、促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素（corticotropin releasinghormone，CRH）、生長抑素（Somatostatin，SS）的影響，探討其作用機制。方法：70只SPF級雌性SD大鼠按體質(zhì)量隨機抽取10只作為正常組，其余60只采用“慢性束縛+過度疲勞+飲食失節(jié)”復(fù)合因素法造模21 d，造模成功后，按體質(zhì)量隨機分為模型組、疏肝健脾活血方高劑量組、中劑量組、低劑量組、柴芍六君子湯組、多潘立酮組。分組后，正常組和模型組大鼠灌胃給予相應(yīng)體積純凈水，其他大鼠灌胃給予相應(yīng)藥物干預(yù)14 d。實驗結(jié)束后，ELISA法檢測血漿NT、CRH、SS含量。結(jié)果：與正常組比較，模型組大鼠血漿NT含量顯著下降（P<0.05）；血漿CRH含量明顯增加（P<0.05）；SS含量顯著下降（P<0.01）。給藥干預(yù)后，與模型組比較，多潘立酮組、柴芍六君子組、疏肝健脾活血方高劑量組、疏肝健脾活血方低劑量組大鼠血漿NT含量顯著增加（P<0.05），中劑量組大鼠血漿NT含量有增加的趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；多潘立酮組、疏肝健脾活血方高劑量組、疏肝健脾活血方中劑量組、疏肝健脾活血方低劑量組大鼠血漿CRH含量顯著下降（P<0.05）；多潘立酮組、柴芍六君子組、疏肝健脾活血方各劑量組大鼠血漿SS含量顯著增加（P<0.05或P<0.01）。結(jié)論：疏肝健脾活血方能夠調(diào)節(jié)肝郁脾虛型FD大鼠血漿NT、SS、CRH表達，這可能是其作用機制之一。

【關(guān)鍵詞】 中醫(yī)中藥； 功能性消化不良； 疏肝健脾活血方； 神經(jīng)降壓素； 促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素； 生長抑素

【Abstract】 Objective：To observe the effect of Shu Gan Jian Pi Huo Xue（SGJPHX） decoction on NT，CRH，SS in plasma of FD rats with liver depression and spleen deficiency.Method：70 SPF female rats were randomly divided into normal group（10 rats） and modeling group（60 rats） according to the body weight of rats.The modeling group rats were adopted by “chronic restraint stress + excess fatigue + improper” diet for 21 d to form the model.After modeling，the modeling group rats were randomly divided into model group，SGJPHX high dose group， medium dose group，low dose group，Chai Shao Liu Jun Zi （CSLJZ） decoction group and domperidone group.After group division，the SGJPHX high dose group，medium dose group and low dose group rats were given SGJPHX decoction，the CSLJZ group rats were given CSLJZ decoction，the domperidone group rats were given domperidone，and the model group and normal group were given pure water for 14 d.The NT，CRH，SS in plasma of FD Rats were detected by ELISA.Result：Compared with the normal group，the content of NT in model group was decreased and CRH was increased （P<0.05），the content of SS was decreased significantly（P<0.01）.After administration of the intervention.Compared with the model group，the content of NT in SGJPHX high dose group，SGJPHX low dose，Chai Shao Liu Jun Zi （CSLJZ） decoction group and domperidone group was significantly increased（P<0.05）. There was an increasing trend with the content of NT in SGJPHX medium dose group ，but the difference was not statistically significant（P>0.05）.The content of CRH in SGJPHX high dose group，medium dose group，low dose group and domperidone group were significantly reduced（P<0.05）.The content of SS in SGJPHX high dose group，medium dose group，low dose group，CSLJZ decoction group and domperidone group were significantly increased（P<0.05 or P<0.01）.Conclusion：SGJPHX decoction can regulate NT，CRH，SS in plasma of FD rats with liver depression and spleen deficiency，which may be one of its mechanism.

【Key words】 Traditional Chinese medicine； Functional dyspepsia； SGJPHX decoction； Neurotensin； Corticotropin releasinghormone； Somatostatin

First-authors address：Qingyuan Hospital of TCM，Qingyuan 511500，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.04.010

疏肝健脾活血方由柴胡、白芍、黨參、炒白術(shù)、茯苓、焦山楂、丹參、當歸等13味中藥組成，具有疏肝健脾，活血通絡(luò)的功效。前期研究發(fā)現(xiàn)其能夠增加肝郁脾虛證FD大鼠食欲、促進胃腸運動，但是其作用機制尚未明確。神經(jīng)降壓素（neurotensin，NT）是一種腦腸肽，由腸道N細胞分泌，能夠抑制胃腸運動，延緩胃排空[1-3]。促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素（corticotropin releasinghormone，CRH）是一種參與炎癥反應(yīng)和調(diào)節(jié)內(nèi)分泌的神經(jīng)肽，主要促進促腎上腺皮質(zhì)激素（adreno-cortico-tropichormone，ACTH）的分泌及釋放，從而調(diào)節(jié)胃腸功能抑制胃排空，促進結(jié)腸運動[4]。生長抑素（Somatostatin，SS）對胃腸動力起抑制作用[5]。本文通過研究疏肝健脾活血方對肝郁脾虛證功能性消化不良（functional dyspepsia，F(xiàn)D）大鼠血漿NT、CRH、SS的影響，探討其可能的作用機制。具體報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物與飼料 雌性SPF級大鼠70只，體重（200±20）g，購自湖南斯克萊景達實驗動物有限公司，動物許可證號：SCXK（湘）2013-0004，動物質(zhì)量合格證號：NO.43004700027203。普通標準飼料，購自湖南斯克萊景達實驗動物有限公司。大鼠飼養(yǎng)于中南大學動物學部，實驗動物設(shè)施許可證號：SYXK（湘）2015-0017。

1.1.2 藥物 疏肝健脾活血方及柴芍六君子湯中藥飲片購自長沙九芝堂藥業(yè)股份有限公司，由中南大學李勁平教授鑒定并制備，多潘立酮片（嗎丁啉，西安楊森制藥有限公司生產(chǎn)）。

1.1.3 儀器 JY3002型電子天平（上海精密科學儀器有限公司），Infinite 200 pro多功能酶標儀（Tecan Austria GmbH）

1.2 方法

1.2.1 造模 按體質(zhì)量隨機選取10只大鼠作為正常組，其余60只大鼠按照參考文獻[6]采用“慢性束縛+過度疲勞+飲食失節(jié)”的復(fù)合因素方法進行造模。造模過程中有12只大鼠死亡，共有48只大鼠造模成功。

1.2.2 分組 48只造模成功大鼠按體質(zhì)量隨機分為模型組、疏肝健脾活血方高劑量組、疏肝健脾活血方中劑量組、疏肝健脾活血方低劑量組、柴芍六君子湯組、多潘立酮組，每組8只，加上正常組共7組。

1.2.3 給藥方法 大鼠分組后開始灌胃給藥干預(yù)，各組大鼠給藥劑量按人鼠體表面積換算：疏肝健脾活血方高劑量為24.0 g/kg，中劑量為12.0 g/kg，低劑量為6.0 g/kg，柴芍六君子湯為8.0 g/kg，多潘立酮為2.57 mg/kg。模型組和正常組灌胃相應(yīng)體積純凈水，連續(xù)14 d。

1.2.4 取材 取材前1 d禁食不禁水。10%水合氯醛麻醉（0.35 mL/100 g），固定在綁鼠板上，采用EDTA-2Na抗凝管腹主動脈取血，每只大鼠取血2管，低溫離心機3 000 r/min離心20 min，將所得血漿分裝，-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.5 指標檢測 按試劑盒操作說明采用ELISA法檢測大鼠血漿NT、SS、CRH含量。

1.3 統(tǒng)計學處理 所有數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，計量資料用（x±s）表示，若方差齊，則選用單因素方差分析，若方差不齊，則采用非參數(shù)檢驗。P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

與正常組比較，模型組大鼠血漿NT含量顯著下降（P<0.05），血漿CRH含量明顯增加（P<0.05），SS含量非常顯著下降（P<0.01）。給藥干預(yù)后，與模型組比較，多潘立酮組、柴芍六君子組、疏肝健脾活血方高劑量組、疏肝健脾活血方低劑量組大鼠血漿NT含量顯著增加（P<0.05），疏肝健脾活血方中劑量組大鼠血漿NT含量有增加的趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。多潘立酮組、疏肝健脾活血方高劑量組、疏肝健脾活血方中劑量組、疏肝健脾活血方低劑量大鼠血漿CRH含量顯著下降（P<0.05）。多潘立酮組、柴芍六君子組、疏肝健脾活血方各劑量組大鼠血漿SS含量顯著增加（P<0.05或P<0.01）。見表1。

3 討論

FD是一種排除了器質(zhì)性、代謝性或系統(tǒng)性，伴有特異性上腹痛、餐后飽脹不適、早飽、上腹燒灼感、惡心、嘔吐、噯氣等癥狀，在6個月的時間內(nèi)至少發(fā)生1次/周的功能性胃腸病[7]。隨著生活習慣和工作環(huán)境的改變，功能性消化不良的發(fā)病率越來越高，嚴重影響患者的生活質(zhì)量。流行病學調(diào)查顯示，國內(nèi)普通人群中有消化不良癥狀者達到20%～30%，占消化門診的20%～40%[8]?，F(xiàn)代醫(yī)學認為功能性消化不良與胃腸動力障礙、內(nèi)臟高敏感性、腦腸軸功能異常、幽門螺桿菌感染、心理因素等有關(guān)。功能性消化不良屬于中醫(yī)“腹脹”“嘈雜”和“胃脘痛”等范疇，病位在胃，與肝、脾密切相關(guān)。中醫(yī)認為其病因病機多為本虛標實，脾虛運化乏力，肝氣疏泄失常，胃失和降所致，與痰、瘀、濕密切相關(guān)。疏肝健脾活血方由柴胡、白芍、黨參、炒白術(shù)、茯苓、焦山楂、丹參、當歸等13味中藥組成，具有疏肝健脾，活血通絡(luò)的功效，能夠增加肝郁脾虛證FD大鼠食欲、促進胃腸運動。

NT是一種腦腸肽，由腸道N細胞分泌，能夠抑制胃腸運動[9]，延緩胃排空。神經(jīng)降壓素主要通過以下三種途徑調(diào)節(jié)胃腸運動：（1）通過血液以內(nèi)分泌形式作用于胃腸道細胞相應(yīng)的受體；（2）以腸道肽能神經(jīng)遞質(zhì)形式調(diào)節(jié)胃腸功能；（3）由腦腸肽在中樞神經(jīng)系統(tǒng)水平高低的變化來影響胃腸功能。研究發(fā)現(xiàn)胃排空延緩的FD患者空腹和餐后血漿、胃及十二指腸黏膜的NT水平濃度顯著高于胃排空正常的FD患者和正常人，這說明NT在FD的胃動力障礙中發(fā)揮了重要的作用[10]。楊云等[11]研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)D大鼠下丘腦、胃竇及回腸組織中NT表達明顯增加，電針治療后NT表達顯著降低。CRH是一種參與炎癥反應(yīng)和調(diào)節(jié)內(nèi)分泌的神經(jīng)肽，CRH促進ACTH的分泌及釋放，從而調(diào)節(jié)胃腸功能抑制胃排空，促進結(jié)腸運動。有研究表明，肝郁脾虛證FD大鼠血清及下丘腦CRH含量顯著增加，隔藥餅灸能夠顯著降低模型鼠血清及下丘腦CRH含量[12-13]。FD患者經(jīng)治療后CRH濃度降低，促進胃排空，內(nèi)臟敏感性降低[14-15]。SS主要分布在下丘腦、胰腺、胃體和胃竇黏膜的D細胞內(nèi)，具有減弱胃腸運動、延遲胃排空、抑制膽囊收縮等作用。SS可以抑制CCK、MLT、GAS等胃腸激素的分泌及釋放，抑制唾液、胃液、腸液等消化液的分泌，還能夠抑制多種消化酶的合成與分泌[16]。實驗表明FD模型組胃竇及下丘腦SS表達均高于正常對照組[17]。羅曉琴等[18]研究發(fā)現(xiàn)FD模型大鼠血清SS含量顯著增加、胃排空延遲，電針治療后FD模型大鼠血清SS含量顯著降低、胃排空加快。蘇曉玉等[19]發(fā)現(xiàn)柴術(shù)消痞湯能夠降低功能性消化不良大鼠血漿SS含量，有效治療FD。鄒然等[20]發(fā)現(xiàn)電針能夠降低FD大鼠SS含量，促進胃排空。

本研究中FD模型大鼠血漿NT含量有下降的趨勢，CRH含量有增加的趨勢，SS含量顯著下降。本研究中NT、SS結(jié)果與文獻[4]報道不一致，其原因可能是所用模型大鼠性別、造模方法或檢測方法不同所致，今后將進一步研究分析。本研究結(jié)果表明，肝郁脾虛證FD模型大鼠NT、CRH、SS表達異常，疏肝健脾活血方能夠調(diào)節(jié)肝郁脾虛證FD模型大鼠NT、CRH、SS表達，這可能是其作用機制之一。

參考文獻

[1] Stolakis V，Kalafatakis K，Botis J，et al.The regulatory role of neurotensin on the hypothalamic-anterior pituitary axons：Emphasis on the control of thyroid-related functions[J].Neuropeptides，2010，44（1）：1-7.

[2] Bardella MT，F(xiàn)raquelli M，Peracchi M，et al.Gastric emptying and plasma neurotensin levels in untreated celiac patients[J].Scandinavian Journal of Gastroenterology，2000，35（3）：269-273.

[3]何美蓉，宋于剛，何春容.功能性消化不良患者胃排空障礙與神經(jīng)降壓素關(guān)系的研究[J].第三軍醫(yī)大學學報，2003，25（9）：799-801.

[4]毛蘭芳， 汪龍德， 張宏偉，等.功能性消化不良與腦腸肽的研究進展[J].世界華人消化雜志，2015，23（4）：570-576.

[5]周呂，柯美云.胃腸動力學[M].北京：科學出版社，1999：29-40.

[6]李艷彥，謝鳴，陳禹，等.一種運用復(fù)合病因造模法復(fù)制大鼠肝郁脾虛證模型的研究[J].中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學雜志，2006，12（6）：439-442.

[7] Drossman D A.The functional gastrointestinal disorders and the Rome Ⅲ process[J].Gastroenterology，2006，130（5）：1377-1390.

[8] Voiosu T A，Giurcan R，Voiosu A M，et al.Functional Dyspepsia Today[J].Mdica，2013，8（1）：68-74.

[9]朱建森，成志鋒，李雨澤，等.Ghrelin，CGRP，NT對胃腸作用的研究進展[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學進展，2014，14（16）：3191-3193.

[10] He M R，Song Y G，Zhi F C.Gastrointestinal hormone abnormalities and G and D cells in functional dyspepsia patients with gastric dysmotility[J].World J Gastroenterol，2005，11（3）：443-446.

[11]楊云，徐派的，辛玉，等.神經(jīng)降壓素介導(dǎo)的腦-腸軸在電針治療功能性消化不良大鼠中的作用[J].針刺研究，2016，41（1）：35-39.

[12]周魁明，王凌燕，肖靚宜，等.隔藥餅灸對功能性消化不良肝郁脾虛模型大鼠血清CRH、ACTH、CORT及胃排空率的影響[J].時珍國醫(yī)國藥，2015，（12）：3039-3042.

[13]肖靚宜，王凌燕，周魁明，等.隔藥餅灸對功能性消化不良肝郁脾虛模型大鼠HPA軸中樞相關(guān)受體及激素的影響[J].中華中醫(yī)藥雜志，2017（1）：238-241.

[14] B?hmelt A H，Nater U M，F(xiàn)ranke S，et al.Basal and stimulated hypothalamicpituitary-adrenal axis activity in patients with functional gastrointestinal disorders and healthy controls[J].Psychosom Med，2005， 67（2）：288-294.

[15] Kritas S K，Saggini A，Cerulli G，et al.Corticotropin-releasing hormone，microglia and mental disorders[J].Int J Immunopathol Pharmacol，2014，27（2）：163-167.

[16] Svensson E， Kim O，Parker D.Altered GABA and somatostatin modulation of proprioceptive feedback after spinal cord injury in lamprey[J].Neuroscience，2013，235（14）： 109-118.

[17] Ling J，Wei L，Zhang Y，et al.Effect of method of soothing liver and regulating qi on expression of gastrin and somatostatin in hypothalamus， castric antrum of functional dyspepsia rats[J]. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi，2010，35（22）：3069-3073.

[18]羅曉琴，楊云，張紅星.電針對功能性消化不良大鼠血清GAS和SS的影響[J].山西中醫(yī)，2016，32（4）：53-55.

[19]蘇曉玉，陳勇毅.柴術(shù)消痞湯對功能性消化不良大鼠GAS及SS的影響[J].浙江中醫(yī)雜志，2016，51（3）：223-224.

[20]鄒燃，徐蕓，楊云，等.電針對功能性消化不良大鼠胃腸動力及胃竇組織SS 的影響[J].湖北中醫(yī)藥大學學報，2016，18（6）：14-17.

（收稿日期：2017-10-18） （本文編輯：周亞杰）