吳慶昕

河南省息縣人民醫(yī)院中醫(yī)科(息縣464300)

祖國(guó)醫(yī)學(xué)稱“血不利則為水，血水本同源”，提示血和水在生理上相互化生且功用相近，病理上則“瘀水關(guān)聯(lián)”，強(qiáng)調(diào)對(duì)血瘀證治療關(guān)鍵是活血利水。水通道蛋白2(AQP2)廣泛存在于腎臟遠(yuǎn)端小管和集合管的主細(xì)胞頂膜中，其作用作用是參與尿濃縮和稀釋功能，和腎的“利尿”作用相近。丹參作為臨床上應(yīng)用最廣泛的中醫(yī)藥材，其具有“活血化瘀、曲瘀止痛、涼血養(yǎng)血，安神”等功效，現(xiàn)代藥理學(xué)證實(shí)，丹參具有降低血液黏度、抑制血小板聚集、抗血栓形成，同時(shí)能改善微循環(huán)和減少血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，能降低血管通透性，能減少組織水腫，同時(shí)能調(diào)節(jié)AQP2表達(dá)[1]。研究[2]指出，中醫(yī)活血利尿本質(zhì)是上調(diào)AQP2蛋白表達(dá)，促使局部肌肉和腎組織水吸收入紅細(xì)胞和血漿，通過(guò)代謝將水液消耗，降低AQP2蛋白表達(dá)，促使腎組織水通過(guò)尿液排出，實(shí)現(xiàn)消腫利尿，從而減輕組織血瘀和水腫病理狀態(tài)?；诖耍敬窝芯孔鋈缦聦?shí)驗(yàn)，以證實(shí)該結(jié)論，為臨床用藥提供有力依據(jù)。

材料與方法

1 材 料 收集30只大鼠，分成正常組、模型組和丹參組，每組均為10只，均為雄性，體重150～210g，平均(180±20)g；藥物均購(gòu)自復(fù)旦大學(xué)臨床實(shí)驗(yàn)室研究中心，丹參根據(jù)《中國(guó)藥點(diǎn)》提取稱丹參干燥成粉劑，給藥前用生理鹽水調(diào)成混懸液，將丹參調(diào)劑成1g/ml。

2 方 法 將30只大鼠分成三組，正常組不建立模型，每日常規(guī)喂養(yǎng)生理鹽水10 μl/g。模型組和丹參組則采用定量化打擊法進(jìn)行造模型，即將大鼠右后肢放置在打擊器上，砝碼為500 g，高度為58 cm，自由落下后打擊在后肢內(nèi)側(cè)中上部，成功標(biāo)志為單側(cè)肢體跛行，無(wú)皮膚破損，無(wú)出血，無(wú)骨折，模型組繼續(xù)生理鹽水10 μl/g灌胃，丹參組則用丹參混懸液1 g/kg灌胃，均連續(xù)治療1周。12周后處死，取局部肌肉和腎組織，部分標(biāo)本迅速放入在4%多聚甲醛中進(jìn)行固定，進(jìn)行免疫組化和病理學(xué)觀察，用腎組織勻漿Western Blot法檢測(cè)AQP2蛋白表達(dá)。觀察在腎組織AQP2蛋白表達(dá)情況。

結(jié) 果

1 各組尿量和AQP2濃度等指標(biāo)比較 尿量上以丹參組含量最高，和其他兩組比較差異顯著(P<0.05)，而在AQP2濃度、腎組織AQP2表達(dá)、Western blot表達(dá)上以模型組最高，和其他兩組比較差異顯著(P<0.05)，而正常組和丹參組在以上三個(gè)指標(biāo)上比較差異則不顯著(P>0.05)，見(jiàn)表1。

表1 各組尿量和AQP2濃度等指標(biāo)比較

2 三組病理組織學(xué)觀察 正常組肌纖維結(jié)構(gòu)清晰，腎小球正常，腎小管上皮細(xì)胞排列整齊。模型組局部肌纖維索損傷，周圍炎性細(xì)胞浸潤(rùn)顯著，腎小球不同程度擴(kuò)張，上皮細(xì)胞增生，毛細(xì)血管腫脹，腎小管擴(kuò)張變性，毛細(xì)血管充血顯著。丹參組肌纖維接近正常，腎小管-間質(zhì)變顯著改善，僅有少數(shù)毛細(xì)血管擴(kuò)張，但程度均較輕。

討 論

水通道蛋白是近20年發(fā)現(xiàn)的一種廣泛存在機(jī)體各器官組織內(nèi)，對(duì)水高度選擇性的細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，其主要分布在和液體吸收和分泌緊密相關(guān)的內(nèi)皮細(xì)胞和上皮細(xì)胞上，參與調(diào)節(jié)和水跨細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)的病理和生理過(guò)程[3-4]。目前對(duì)AQP在臨床上可分成13個(gè)亞型，AQP2主要分布在腎臟中，其主要是表達(dá)在遠(yuǎn)端小管和集合管主細(xì)胞頂膜中，其主要參與尿液稀釋濃縮。研究[5-6]稱，AQP2集合管中約有3%隨尿液排出體外，在不同生理或病理下，其排出量不同，故可將AQP2作為腎功能的一個(gè)重要檢測(cè)指標(biāo)。

結(jié)果顯示，AQP2濃度、腎組織AQP2表達(dá)、Western blot表達(dá)上以模型組最高，而在尿量上則以丹參組最高，這點(diǎn)和報(bào)道[7-8]結(jié)論是一致的，實(shí)驗(yàn)證明，糖尿病腎損傷模型組織AQP2表達(dá)增多，丹參則能顯著降低糖尿病大鼠腎組織中的AQP2蛋白表達(dá)，在腎臟AQP1高表達(dá)中近端小管和髓袢支細(xì)段上皮細(xì)胞頂膜和側(cè)膜，其主要參與水重吸收。當(dāng)AQP1表達(dá)下降則代表腎臟對(duì)水重吸收功能減弱，AQP2表達(dá)增加則表示其原尿重吸收能力增加，故兩者有協(xié)同作用，能促使尿量增加[9]。這也證實(shí)外傷后血瘀證大鼠在AQP2表達(dá)上增加顯著，故尿液較正常顯著增加。

丹參在臨床上能降低血管通透性，能減輕血管源性水腫，能增加腎血流，且有利尿、調(diào)節(jié)腎組織局部微循環(huán)等作用。研究[10-11]指出，丹參能上調(diào)急慢性肺損傷的微血管內(nèi)皮細(xì)胞AQP2蛋白的表達(dá)，能降低膽汁淤積性肝硬化大鼠肝硬化AQP2表達(dá)。報(bào)道稱，丹參能減輕血瘀證大鼠局部肌肉和腎組織血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，能調(diào)高血管內(nèi)皮細(xì)胞膜中的水通道蛋白表達(dá)，能減輕局部腎組織瘀腫，故丹參有很好“活血消腫”作用。結(jié)果顯示，丹參組在AQP2濃度、腎組織AQP2表達(dá)、Western blot表達(dá)上和正常組相近，而在尿量上則顯著高于正常組和模型組，且在病理組織學(xué)上也和正常組相近，這證實(shí)丹參能下調(diào)腎組織AQP2表達(dá)，能增加腎排出尿液功能[12-15]，推斷出AQP2能促使腎小管對(duì)原尿水重吸收有關(guān)，故丹參的活血功效其中主要和腎臟的利尿是一致的。

總之，丹參能降低腎臟遠(yuǎn)端小管和集合管主細(xì)胞的AQP2表達(dá)，能升高近端血管上皮細(xì)胞的AQP1表達(dá)，故其能減少腎對(duì)原尿的重吸收功能，增加尿量，同時(shí)能減少腎水腫。而當(dāng)體內(nèi)水液不足，則AQP2表達(dá)增加，尿量減少，因AQP2能隨尿液排出3%，故其能在一定程度上反映腎組織利尿和水腫疾病相關(guān)性[16-17]，故丹參的“活血利尿”功效可能和其調(diào)節(jié)腎小管AQP2水平緊密相關(guān)[18-19]。

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