華裕農(nóng)業(yè)科技有限公司 河北蛋雞繁育工程技術(shù)研究中心 056000

ELISA檢測(cè)已成為種雞場(chǎng)評(píng)估雞群健康狀況的一種常用手段，主要用于垂直傳播性疾病感染水平、疫苗免疫后效果的評(píng)價(jià)，以及雛雞產(chǎn)品質(zhì)量的評(píng)估等。目前常用試劑為IDEXX產(chǎn)品，但在檢測(cè)過程中會(huì)對(duì)數(shù)據(jù)產(chǎn)生質(zhì)疑，故對(duì)此進(jìn)行簡(jiǎn)單的分析，也希望與同行進(jìn)行交流。

1 白血病檢測(cè)

簡(jiǎn)稱ALV，屬于腫瘤性疾病，可以垂直和水平傳播，ALV-Ag檢測(cè)采用雙抗體捕獲法檢測(cè)抗原，也就是我們常說的P27抗原檢測(cè)，為IDEXX家禽產(chǎn)品ELI檢測(cè)唯一的抗原檢測(cè)方法。樣本為蛋清、肛拭子等，該檢測(cè)陽性不能區(qū)分是否為內(nèi)源性白血病。血清檢測(cè)方面主要包括ALV-J亞型抗體及ALV-A/B亞型，目前通常日齡較大的雞群會(huì)有抗體陽性檢出，但ALV-Ag檢測(cè)多為陰性，表明雞群還在安全狀態(tài)。很多公司現(xiàn)在把血清學(xué)檢測(cè)作為一個(gè)參考，重點(diǎn)是把P27抗原結(jié)果和抗凝全血病原分離結(jié)果作為最終判定。目前常用的病原分離細(xì)胞為DF-1細(xì)胞，病原分離也是公認(rèn)的白血病檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。

2 網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥抗體檢測(cè)

簡(jiǎn)稱REV，與季節(jié)性有很大關(guān)系，和蚊蟲傳播相關(guān)。現(xiàn)在國內(nèi)報(bào)道會(huì)有抗體陽性檢出的結(jié)論，但抗體陽性率普遍較低，維持在3%以內(nèi)。驗(yàn)證是否存在野毒感染，也常用到病毒分離的方法，一般會(huì)用到DF-1細(xì)胞，樣品是抗凝全血，最終用PCR或免疫熒光手段進(jìn)行鑒定。陽性場(chǎng)區(qū)要加強(qiáng)種雞管理，注意病毒性疾病的發(fā)生，同時(shí)也要關(guān)注種雞下一代的抗體水平。

REV在大日齡雞中會(huì)有檢出，但雞群不會(huì)有臨床癥狀。目前普遍認(rèn)為10%以內(nèi)為安全范圍，但是小日齡陽性率較高可能會(huì)出現(xiàn)腫瘤疾病的發(fā)生，可以跟蹤檢測(cè)抗體陽性率及抗體滴度變化做動(dòng)態(tài)觀測(cè)。

3 滑液囊支原體抗體檢測(cè)

簡(jiǎn)稱MS，為眼下困擾種雞養(yǎng)殖的主要疾病之一。IDEXX公司認(rèn)為，無滅活苗免疫轉(zhuǎn)陽前6周為感染日齡，而且在MS滅活苗免疫后抗體滴度超過6000，就存在野毒感染?，F(xiàn)在普遍認(rèn)為抗體滴度高于6000，表明關(guān)節(jié)腔內(nèi)已經(jīng)感染，再用藥物防控效果不會(huì)很好。目前MS活苗在國內(nèi)已開始少量使用，因其主要是占位效應(yīng)，所以免疫時(shí)間很重要，應(yīng)盡早免疫，控制在20日齡以內(nèi)，而且免疫后不要使用MS防控藥物。評(píng)估辦法是免疫后陽性率很低，同時(shí)在不同日齡采集咽拭子進(jìn)行PCR檢測(cè)，并要區(qū)分是否為野毒感染，最終制定防控方案。

4 MG抗體檢測(cè)

目前MG的感染情況要低于MS，常用疫苗為F株、6/85和TS-11，如果想開展疾病凈化，就要按照毒株強(qiáng)弱進(jìn)行使用。目前MG的免疫也屬于占位效應(yīng)，產(chǎn)生體液抗體的能力較弱。普遍認(rèn)為6/85免疫后6周檢測(cè)均為陰性、TS-11免疫后6周陽性率在20%以內(nèi)，而且抗體滴度控制在2000以內(nèi)，做該免疫要做到免疫前雞群為陰性，免疫后2周不用藥物防控。如果免疫前轉(zhuǎn)陽，會(huì)對(duì)疫苗的效果產(chǎn)生影響?，F(xiàn)實(shí)中支原體的防控藥物常為泰樂菌素、土霉素和利高霉素等。

目前MG、MS免疫是同日齡免疫，TS-11與MSH株在咽喉在存在競(jìng)爭(zhēng)占位效應(yīng)，同時(shí)保證免疫前雞群為陰性狀態(tài)，可以在免疫前進(jìn)行藥物凈化。目前采集咽拭子進(jìn)行MS PCR檢測(cè)較為常用，但對(duì)于免疫活苗場(chǎng)區(qū)活苗和野毒區(qū)分仍是國內(nèi)檢測(cè)的難點(diǎn)。

5 CAV抗體檢測(cè)

CAV可感染早期雛雞，因此母源抗體很重要。IDEXX建議在16周齡開展檢測(cè)，無論免疫雞群或野毒感染均要達(dá)到100%抗體陽性。如果雛雞35日齡之內(nèi)沒有疾病發(fā)生，表明母源保護(hù)良好。如果出現(xiàn)免疫抑制、皮膚潰爛等現(xiàn)象，即表明可能存在感染。目前CAV抗體水平在各場(chǎng)的差異較大，有的能達(dá)到100%陽性，有的則很低，因此也要進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。

目前活疫苗免疫后抗體陽性率并不高，可能與細(xì)胞免疫有關(guān)，而且可以長(zhǎng)期處于較低陽性率水平，可能表示與免疫后感染壓力不大有關(guān)。尤其CAV檢測(cè)同場(chǎng)區(qū)個(gè)別大日齡批次陽性率高比較好，但是發(fā)現(xiàn)個(gè)別批次陽性率較低，此時(shí)可能與環(huán)境生物安全較好有關(guān)。此時(shí)可以在短時(shí)間內(nèi)降低標(biāo)準(zhǔn)或進(jìn)行免疫，提高陽性率，以降低下一代雛雞早期感染的風(fēng)險(xiǎn)。

6 REO抗體檢測(cè)

目前國內(nèi)的陽性率偏高，有人認(rèn)為可以將其作為場(chǎng)區(qū)生物安全是否良好的一個(gè)指標(biāo)。因其屬于環(huán)境中常在病毒，抗體滴度可能很高，但無臨床癥狀。個(gè)人認(rèn)為，目前評(píng)價(jià)場(chǎng)區(qū)REO情況的主要指標(biāo)為臨床表現(xiàn)，但要注意與MS進(jìn)行區(qū)分。

7 IBV抗體檢測(cè)

IBV屬于免疫項(xiàng)目，目前我們檢測(cè)到父母代0日齡母源抗體滴度基本在600～4000，離散度為40%左右，28日齡檢測(cè)陽性率在40%以內(nèi)，抗體值處于臨界值。56天抗體值在1000～4000，離散度在60%以內(nèi)，抗體陽性率接近100%。84天陽性率在4000～5000，陽性率為100%，離散度在40%左右。有人認(rèn)為，抗體滴度超過15000，雞群可能存在感染，因此要注意防控，尤其在雛雞階段。

IBV檢測(cè)由于疫苗種類較多，如果單純的疫苗免疫產(chǎn)生的抗體，離散度會(huì)很大，介于60%以上也屬于正常狀態(tài)，過低的離散度反而是病毒耐過后表現(xiàn)。同時(shí)指出父母代雛雞抗體滴度不能低于2000，商品代不能低于1500。

8 IBD抗體檢測(cè)

目前我們檢測(cè)到的父母代0日齡母源抗體滴度基本在4000～5000，陽性率接近100%，離散度在40%以內(nèi)。28日齡陽性率為40%～60%，處于母源抗體衰減階段。IBD對(duì)雛雞早期影響較大，目前抗體檢測(cè)整體良好。就IBV、IBD等免疫項(xiàng)目的研究，IDEXX建議進(jìn)行基準(zhǔn)線確立，因每個(gè)場(chǎng)區(qū)環(huán)境壓力不同，因此我們的數(shù)據(jù)不是絕對(duì)值。

AE現(xiàn)在有流行趨勢(shì)，大日齡雞無明顯病理變化，但是降蛋會(huì)很嚴(yán)重，雛雞感染會(huì)有一定的臨床表現(xiàn)。

綜上所述，種雞場(chǎng)ELISA評(píng)估涉及到很到方面，如疫苗種類、免疫途徑、雞群臨床表現(xiàn)等，因此數(shù)據(jù)分析設(shè)計(jì)的面很廣，如果能做到全面分析，對(duì)雞群的潛在風(fēng)險(xiǎn)就可以起到預(yù)警作用。