阿力米古麗·烏米爾哈孜

（新疆塔城地區(qū)動物疾病控制與診斷中心，塔城 834700）

0 引言

布魯氏桿菌病是由布魯氏桿菌感染引起的一種急慢性人畜共患病。除感染羊和人類外，還可危害牛、豬等動物。該種致病菌對妊娠動物造成的危害嚴(yán)重，其他動物感染該種致病菌后不會表現(xiàn)出明顯的臨床癥狀，很難在較短時間內(nèi)作出診斷，很難及時對病情做出診斷，當(dāng)出現(xiàn)典型臨床癥狀后，表示病情已經(jīng)嚴(yán)重傳播流行。由于布魯氏桿菌病屬于國家二類動物傳染性疫病，同時也是一種人畜共患病，確診后，在做好患病羊撲殺處理同時，還應(yīng)做好羊群凈化處理。而在對患病羊進(jìn)行診斷和羊群凈化處理過程中，通常選擇使用虎紅平板凝集試驗和試管凝集試驗進(jìn)行針對性診斷，逐步凈化羊群，培育無病羊群。為進(jìn)一步探討上述2種實驗室檢測方法的準(zhǔn)確性，研究主要在3個規(guī)?；蝠B(yǎng)殖場分3個批次采集了3 000份新鮮血液，進(jìn)行血清學(xué)檢查，對比2種檢測方法的準(zhǔn)確率和靈敏度。

1 試驗材料與方法

1.1 材料選取

羊血清主要采自于新疆塔城地區(qū)3個規(guī)模化養(yǎng)殖場，共分3個批次進(jìn)行集中采集，共采集3 000份，將采集到的新鮮血液帶回實驗室，常規(guī)方法分離得到血清，-20 ℃低溫保存。研究選擇的虎紅平板凝集試驗抗原和陽性血清、試管凝集試驗抗原和陽性血清，均來自于青島易邦生物工程有限公司，生產(chǎn)批號分別為獸藥字（2011）150138017和（2011）150138011。

1.2 方法

首先，血液采集和血清制備。分3個批次在新疆塔城地區(qū)3個規(guī)?；B(yǎng)殖場采集羊的新鮮血液。采集時，先將羊保定，將靜脈表皮的羊毛消毒剔除后，采集靜脈新鮮血液。血液采樣后，用標(biāo)記筆在采血器上注明對應(yīng)的羊耳標(biāo)號，除去針頭后放置在保溫箱內(nèi)保存，及時送回實驗室進(jìn)行離心處理，得到上層血清，血清制備完成后，放置于-20 ℃的冰箱內(nèi)保存[1]；其次，虎紅平板凝集試驗?；⒓t平板凝集試驗操作應(yīng)嚴(yán)格按照中華人民共和國相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，使用標(biāo)記筆，在滅菌干凈的玻璃板上編號，用移液器吸取30 μL虎紅平板凝集抗原，然后分別吸取采集到的血清30 μL，與虎紅平板凝集抗原混合均勻，同時設(shè)置陽性對照組，如果待檢血清出現(xiàn)顆?；蛐鯛钗锬卸殛栃裕耆荒卸殛幮訹2]；再次，試管凝集試驗。試管凝集試驗操作也需要嚴(yán)格按照國家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，對試管標(biāo)記，向第1個標(biāo)記好的試管內(nèi)添加1.15 mL的稀釋液，剩余的試管中可添加0.5 mL的稀釋液，使用移液器，在第1個試管中加入待檢血清0.1 mL，用移液器連續(xù)吹打5～6次，混合均勻后，吸取0.25 mL混合液舍去，再吸取0.5 mL混合液，加入到第2個試管，按照上述方法混合均勻，再吸入第3個試管，混合液0.5 mL，依次稀釋到第4個試管。確保試管稀釋度分別為1∶12.5、1∶25、1∶50、1∶100，然后再向試管中添加20倍稀釋的抗原稀釋液，每個試管中添加0.5 mL，充分震蕩混合均勻，確保血清稀釋度控制在1∶25、1∶50、1∶100、1∶200。同時設(shè)置陰性對照組、陽性對照組、抗原對照組，并配制比濁管振搖均勻。將全部的試管放置在37 ℃保溫箱內(nèi)，持續(xù)培養(yǎng)24 h，取出試管后記錄檢查結(jié)果，以比濁管為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判定，對比上層液體的清亮程度?！?+”表示完全凝集，全部下沉，上層液體100%清澈；“3+”表示幾乎凝集，上層液體100%清澈；“2+”表示顯著凝集，上層液體50%清澈；“+”表示有沉淀，上層液體25%清澈；“-”表示無沉淀，液體均勻陰性[3]；最后，靈敏度對比試驗。為有效檢測上述2種方法的靈敏度，將虎紅平板凝集試驗和試管凝集試驗檢測為陽性的血清分別進(jìn)行虎紅平板凝集和試管凝集交叉試驗，驗證第1次檢測出陽性血清的2種方法的準(zhǔn)確度。

2 結(jié)果

2.1 虎紅平板凝集與試管凝集試驗檢測對比

通過使用虎紅平板凝集試驗和試管凝集試驗，對3 000份血清分別進(jìn)行檢測，其中第1個批次的513份羊血清中虎紅平板凝集試驗檢測出13份，試管凝集試驗共檢出陽性血清12份，檢出率分別為2.53%、2.34%。第2批1 269份羊血清中虎紅平板凝集試驗檢測出16份，試管凝集試驗共檢出陽性血清17份，檢出率分別為1.26%、1.34%。第3批1 218份羊血清中虎紅平板凝集試驗檢測出14份，試管凝集試驗共檢出陽性血清16份，檢出率分別為1.15%、1.31%，見表1。

表1 虎紅平板凝集試驗與虎紅平板凝集試驗檢測對比

2.2 虎紅平板凝集與試管凝集試驗靈敏度對比

將第1次檢測為陽性的血清分別進(jìn)行其他2種檢測方法再次檢測，檢測結(jié)果顯示，第1次虎紅平板凝集試驗檢測出來的50份陽性血清，試管凝集試驗檢測45份全部為陽性，有5份為陰性。試管凝集試驗檢測出來的45份陽性血清中經(jīng)虎紅平板凝集試驗檢測，45份全部呈陽性。由此可知2種檢測方法以試管凝集試驗檢測靈敏度和準(zhǔn)確度更高，虎紅平板凝集試驗檢測過程中可能存在假陽性。

3 結(jié)束語

羊布魯氏桿菌病檢測過中應(yīng)用較為常見的檢測方法主要為虎紅平板凝集試驗和試管凝集試驗2種。通過本次檢測結(jié)果可知，虎紅平板凝集試驗的檢出率高于試管凝集試驗，總體檢出率分別為1.67%和1.50%。為進(jìn)一步驗證2種檢測方法的靈敏度，將上述2種方法第1次檢測出來的陽性血清分別再進(jìn)行交叉檢測。檢測結(jié)果顯示，虎紅平板凝集試驗檢測出來的50份陽性血清中，有45份陽性，5份陰性。試管凝集試驗檢測出來的45份血清中應(yīng)用虎紅平板凝集試驗再次檢測，全部為陽性，由此可知虎紅平板凝集試驗檢測存在假陽性，其靈敏度相對于試管凝集試驗較低。但由于該種檢測方法具有較強的特異性，因此可以將其作為初步羊布魯氏桿菌陽性血清篩選檢測和流行病學(xué)調(diào)查，然后將篩選出來的陽性血清進(jìn)行試管凝集排除假陽血清，將2種方法有效結(jié)合，實現(xiàn)優(yōu)勢互補。

在今后羊布魯氏桿菌檢測時應(yīng)結(jié)合實際情況，選擇合適的檢測手段，將虎紅平板凝集試驗和試管凝集試驗有效結(jié)合，極大提高防控質(zhì)量，提高檢測準(zhǔn)確率，減少疾病傳播蔓延。