萬俊鵬 崔義真 喻方圓

(南方現(xiàn)代林業(yè)協(xié)同創(chuàng)新中心，南京林業(yè)大學(xué)林學(xué)院，江蘇 南京 210037)

東京野茉莉 (Styraxtonkinensis) 又名越南安息香、白花樹，是安息香科安息香屬落葉喬木，適宜生長在熱帶和亞熱帶海拔100～1 000 m的低山丘陵區(qū)[1]。東京野茉莉主產(chǎn)越南東京灣，在我國云南、貴州、廣西、廣東、湖南、福建和江西等地有分布，是集藥用[2-3]、材用、觀賞于一身的樹種[4]。目前對于東京野茉莉的研究，主要集中于苗木繁育[5]、栽培與生產(chǎn)[6]、木材材性分析[7-8]、種子油提取及油脂分析[9-11]以及生理、生殖生物學(xué)特性[12]等方面，但對于東京野茉莉中安息香主要成分的時空分布鮮有研究。本研究通過對不同樹齡的東京野茉莉主要化學(xué)成分在樹體中的分布進(jìn)行測定和分析，為東京野茉莉樹體的綜合利用提參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)地概況及試驗(yàn)材料

試驗(yàn)地位于南京市六合區(qū)馬集鎮(zhèn)中華茉莉谷 (32°53′ N， 118°84′ E)，屬亞熱帶季風(fēng)性濕潤氣候，氣候溫和濕潤，四季分明，光照充足，降水豐富。年平均氣溫15.1 ℃，夏季最高氣溫36～38 ℃，冬季最低氣溫-8～10 ℃，土壤以黃棕壤為主。試樣采集地為不同年齡東京野茉莉人工林。

本試驗(yàn)的材料采取全挖法，在2、4、6、8、11 a不同年齡的林分中，分別選擇地徑 (或胸徑) 和冠幅中等的東京野茉莉植株，每年齡段挖取3株，共15株作為測定材料，挖取時盡量保持根系的完整性，將根、干、枝和葉分別研磨成粉，過50目篩。同時采集取樣植株的葉片，用干凈柔軟的濕布擦凈后，置于105 ℃的烘箱中殺青15～20 min，之后立即降低烘箱的溫度，維持在70～80 ℃，直至烘干為恒質(zhì)量，用粉碎機(jī)磨碎，過80～100目篩孔的篩子，混合均勻。對1、2、3、4、6、8、11 a的東京野茉莉葉片進(jìn)行可溶性蛋白、纖維素、游離氨基酸含量等指標(biāo)的測定。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1安息香主要成分含量測定

1) 總香脂酸含量測定。分別精確吸取對照品溶液0.25，0.5，0.75，1.0，1.25 mL，至25 mL容量瓶中，加碳酸氫鈉溶液 (1→20) 定容，搖勻。以碳酸氫鈉溶液 (1→20) 為空白對照，在223 nm處測定其吸光度。以吸光度 (A) 為縱坐標(biāo)，對照品濃度 (C) 為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為：A=66.750C+ 0.037 7，R=0.999 1。結(jié)果表明，苯甲酸在0.002～0.01 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

總香脂酸含量的測定采用紫外分光光度法[13]。取1.5 g安息香藥材粉末 (過50目篩)，加0.5 mol/L的乙醇制氫氧化鉀溶液25 mL，回流提取1.5 h。在水浴上除去乙醇，殘?jiān)訜崴?0 mL使之均勻散裂，放冷，加冷水150 mL及硫酸鎂溶液50 mL，攪勻，靜置10 min，過濾，以20 mL水洗滌濾渣，濾液加鹽酸調(diào)pH (pH < 3) 至酸性，置分液漏斗中，用乙醚分次振搖4次 (50、40、40、30 mL)，合并乙醚液，以碳酸氫鈉溶液分次用力振搖提取5次 (20、20、10、10、10 mL)，合并水層，置水浴上揮去乙醚至無乙醚味，取出冷卻至室溫。以5%碳酸氫鈉溶液定容，搖勻，備用；在223 nm波長下測定吸光度。每個處理重復(fù)3次。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算總香脂酸含量。

2) 總?cè)坪繙y定。精確吸取齊墩果酸對照品溶液0.2，0.25，0.30，0.35，0.40，0.45 mL，分別置10 mL容量瓶中，按比色條件正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)條件顯色反應(yīng)后，在550 nm波長處測定吸光度值，以吸光度 (Y) 為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度 (X) 為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=45.7X- 0.080 9，R=0.998 7。

總?cè)坪康臏y定采用香草醛-冰醋酸體系分光光度法[14]。將根、干、枝、葉研磨成粉 (過50目篩)，稱取樣品15 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，超聲提取15 min，過濾，吸取0.2 mL溶液置10 mL容量瓶中，加入0.3 mL香草醛-冰醋酸，0.8 mL高氯酸，在80 ℃的水浴中加熱15 min，取出，放至室溫。在550 nm波長測定吸光度。每個處理重復(fù)3次。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算總?cè)坪俊?/p>

1.2.2葉片營養(yǎng)成分含量測定

1) 蛋白質(zhì)含量測定。選用考馬斯亮藍(lán)G-250法測定蛋白質(zhì)含量。隨機(jī)稱取剪碎葉片0.5 g，用3 mL蒸餾水研磨勻漿，轉(zhuǎn)移到離心管中，用2 mL蒸餾水沖洗研缽，一并轉(zhuǎn)入離心管中，然后在6 000 r/min下離心20 min。取上清液1 mL，加5 mL考馬斯亮藍(lán)試劑，搖勻后放置2 min，于595 nm下測其吸光度。

2) 纖維素含量測定。測定方法參照硫酸法[15]。隨機(jī)稱取剪碎葉片0.4 g于燒杯，將燒杯置冰水浴中加60%硫酸60 mL，并消化處理30 min，將消化好的纖維素溶液轉(zhuǎn)入100 mL容量瓶，并用60%硫酸定容至刻度，搖勻后用布氏漏斗過濾于另一燒杯中。取過濾溶液5 mL放入100 mL容量瓶，在冷水浴中加蒸餾水稀釋至刻度，搖勻備用。取備用液2 mL于具塞試管中，加入0.5 mL 2%蒽酮試劑，并沿管壁加5 mL濃硫酸，塞上塞子，搖勻，靜置1 min，在620 nm波長下測吸光度。

3) 游離氨基酸含量測定。采用茚三酮比色法[16]，隨機(jī)稱取剪碎葉片0.3 g，于研缽加入5 mL 10%乙酸。研磨勻漿后，加蒸餾水稀釋至10 mL，過濾到三角瓶中，取上清液1 mL，加1 mL蒸餾水、3 mL水合茚三酮、0.1 mL 0.1%抗壞血酸，置沸水浴15 min，取出后用冰水快速冷卻并不時搖動，使加熱時形成的紅色被空氣逐漸氧化而褪去，呈現(xiàn)藍(lán)紫色時，用60%乙醇定容至20 mL，混勻后在570 nm波長下測其吸光度，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線查得含氮量。

1.3 數(shù)據(jù)處理

利用Excel 2013進(jìn)行數(shù)據(jù)整理，SPSS 18.0進(jìn)行單因素方差分析 (ANOVA)，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)誤并進(jìn)行多重比較。圖表繪制由SPSS 18.0軟件完成。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同樹齡東京野茉莉各器官總香脂酸的含量

不同樹齡東京野茉莉各器官總香脂酸在不同器官分布狀況不同，如圖1。2年生葉片 (4.13%)> 枝條 (3.07%)> 根部 (3.02%)> 樹干 (2.06%)；4年生葉片 (4.37%)> 根部 (3.48%)> 枝條 (2.26%)> 樹干 (1.85%)；6年生葉片 (4.65%)> 根部 (2.99%)> 枝條 (2.37%)> 樹干 (2.06%)；8年生葉片 (4.51%)> 根部 (2.71 %)> 枝條 (2.36%)> 樹干 (1.26%)；11年生葉片 (4.81%)> 根部 (3.06%)> 枝條 (2.24%)> 樹干 (2.15%)。

不同字母表示差異顯著。

圖1不同樹齡東京野茉莉各器官總香脂酸含量
Fig.1 The total balsamic acid content in different organs ofS.tonkinensisat different ages

從圖1可知，東京野茉莉總香脂酸含量基本上為葉片中最高，根部次之，枝條和樹干最少。這樣分布的原因可能是總香脂酸在葉片中合成，含量最多，根部儲存總香脂酸，含量次之，而樹干和枝條對于有機(jī)物只起到運(yùn)輸作用，含量較少。隨著樹齡的增長，東京野茉莉的葉片、根部和枝條總香脂酸含量呈現(xiàn)先上升后下降再上升的趨勢，樹干總香脂酸含量呈現(xiàn)先下降再上升再下降再上升的趨勢。方差分析結(jié)果表明，6年生葉片和8年生葉片總香脂酸含量的差異沒有達(dá)到顯著水平，其他不同樹齡東京野茉莉葉片、根部、枝條、樹干中總香脂酸含量差異達(dá)到顯著水平 (P< 0.05)。

2.2 不同樹齡東京野茉莉各器官總?cè)频暮?/h3>

不同樹齡東京野茉莉各器官總?cè)坪繙y定結(jié)果如圖2所示?？梢钥闯?，東京野茉莉總?cè)坪糠植己涂傁阒岷吭诟髌鞴僦械姆植家恢?，基本上葉片含量最高，根部次之，枝條和樹干最少，與楊萬霞[17]研究青錢柳藥用成分總?cè)圃诓煌鞴僦械姆植家?guī)律一致。

不同字母表示差異顯著。

圖2不同樹齡東京野茉莉各器官總?cè)坪?br/>Fig.2 The content of total triterpenes in different organs ofS.tonkinensisat different ages

另外，葉片、枝條、樹干、根部總?cè)坪侩S著樹齡的增加呈現(xiàn)先下降再上升再下降的變化趨勢。方差分析結(jié)果表明，不同樹齡東京野茉莉葉片、根部、枝干、樹干中總?cè)坪坎町惥_(dá)到顯著水平 (P< 0.05)。

2.3 東京野茉莉葉片營養(yǎng)成分的含量

由表1可知，干物質(zhì)含量從3年生葉片的38.809%增加到6年生葉片的44.416%，8年生葉片含量為37.342%，11年生葉片含量達(dá)到最大值為44.547%；粗蛋白在1年生葉片上含量達(dá)到8.179%，然后隨之降低，3年生葉片含量降為6.542%，4年生葉片含量上升為6.75%，8年生葉片含量降為4.371%，隨后增長到最高值11年生含量為9.076%；纖維素含量在2年生葉片中達(dá)到高峰，隨之下降至4年生葉片含量為13.309%，在6年生葉片中含量增長到16.546%，然后隨之降低；氨基酸含量在2年生葉片中為2.578%，然后隨葉齡增長氨基酸含量降低，在3年生葉片中含量降低為1.175%，隨之含量在8年生葉片中達(dá)到最大值為3.983%。

表1 不同樹齡葉片的營養(yǎng)成分Table 1 The nutritional content of different ages leaves

注：不同字母表示差異顯著。

干物質(zhì)、粗蛋白含量及氨基酸含量在不同樹齡葉片之間的差異不顯著，纖維素含量隨葉齡增長而降低，且纖維素含量在不同樹齡葉片之間差異顯著 (P< 0.05)。

3 結(jié)論與討論

本研究對不同樹齡東京野茉莉樹體中安息香主要化學(xué)成分的空間分布以及葉片內(nèi)主要營養(yǎng)成分的含量進(jìn)行了分析比較，揭示東京野茉莉樹體內(nèi)主要化學(xué)成分的分布規(guī)律，為東京野茉莉樹體的合理開發(fā)和利用提供參考。

分別采取相同年齡段的根、枝條、樹干和葉作為測定樣品，既能橫向比較相同年齡段樹體不同器官的安息香主要化學(xué)成分差異，也能縱向比較相同器官在不同年齡段的安息香主要化學(xué)成分的差異，以便對東京野茉莉樹體內(nèi)安息香成分的產(chǎn)生、運(yùn)輸、積累有一個更深入的了解，為將來從東京野茉莉樹體中提取安息香類物質(zhì)提供借鑒。

東京野茉莉藥用成分安息香是采用割脂方式收集樹干流出的樹脂，藥用部位一直是樹干。本研究表明，葉片中藥用成分的含量高于樹干，建議采集東京野茉莉葉片，對其加工利用，既可提高生產(chǎn)效益，也可使東京野茉莉的藥用價值得到充分的利用。但受試驗(yàn)材料采樣時間的限制，還需進(jìn)一步研究確定最佳采葉季節(jié)。

東京野茉莉中總?cè)坪咳~片中最高，根部次之，枝條和樹干最少，與楊萬霞[17]研究青錢柳藥用成分總?cè)圃诓煌鞴僦械姆植家?guī)律一致。不同樹齡東京野茉莉不同器官總?cè)坪坎町惥_(dá)到顯著水平，與王文娟[18]研究青海沙棘總?cè)坪颗c樹齡和部位的關(guān)系的結(jié)論一致。

東京野茉莉干物質(zhì)含量平均值為41.35%，粗蛋白含量為7.08%，纖維含量為15.86%，氨基酸含量為2.15%，與常見樹種泡桐 (Paulowniasieb)、刺槐 (Robiniapseudoacacia) 和楊樹 (Populussp.) 等相比是比較低的。據(jù)郭良[19]對常見樹種葉片進(jìn)行營養(yǎng)成分分析，泡桐葉干物質(zhì)含量為88.99%，粗蛋白含量為16.41%，粗纖維10.46%；刺槐葉干物質(zhì)量88.35%，粗蛋白17.78%，粗纖維11.33%，氨基酸含量為13.61%[19-20]；沙蘭楊 (Populuseuramericanacv. ‘Sacrau 79’) 葉干物質(zhì)含量為92.22%，粗蛋白含量11.29%，粗纖維含量14.27%，柳樹葉粗纖維含量19.3%，刺槐葉粗纖維含量為17.5%[21]。東京野茉莉樹葉除纖維素含量外，其他營養(yǎng)成分均小于常見樹種，說明飼用價值不高，但葉片中含有藥用成分，可以開發(fā)某些具有特殊價值的飼料。葉片中藥用成分的含量高于樹干，而葉片內(nèi)的營養(yǎng)物質(zhì)在不同年齡段也存在變化，但這種變化是否與安息香類物質(zhì)的產(chǎn)生有關(guān)系，尚不能確定，還需要更多的試驗(yàn)來驗(yàn)證和分析。

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