袁佳妮，李 瑤，楊 倩，周暄宣，謝艷華，張藝芳，王四旺Δ

1.空軍軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院天然藥物學(xué)教研室(西安 710032)， 2.陜西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院(咸陽 712000)，3.陜西新藥技術(shù)開發(fā)中心(西安 710061)

主題詞 中藥制劑 蟾酥 綜述

蟾酥(Bufonis Venenum)為蟾蜍科動物中華大蟾蜍(Bufo bufo gargarizans Cantor)或黑框蟾蜍(Bufo melanostictus Schneider)的耳后腺及表皮腺體的分泌物，呈白色乳狀液體或淺黃色漿液，具有解毒消腫、止痛、開竅醒神的功效，是一種應(yīng)用歷史悠久的傳統(tǒng)中藥材[1]。蟾酥的主要有效成分為蟾毒二烯內(nèi)酯類化合物，包括蟾毒靈、蟾毒它靈、華蟾毒它靈和遠華蟾毒精等，大量研究表明其具有廣譜抗腫瘤作用。但是，蟾酥細胞毒性較強，在抑制腫瘤細胞增殖的同時，對正常細胞也有一定殺傷作用，限制其臨床應(yīng)用。此外，蟾酥中的蟾毒配基能與Na+/K+-ATP酶的磷酸化中間物(酶-P)競爭性結(jié)合，使酶-P不再與K+結(jié)合，使得Na+/K+-ATP酶不能發(fā)揮正常作用。因此，蟾酥心臟毒性強，這對其藥用制劑的安全性提出更高的要求。

臨床上蟾酥類制劑主要以丹劑和丸劑為主，包括救心丸、六神丸、華蟾素、六靈解毒丸、生力雄丸、麝香保心丸、蟾酥注射液、肖金丹和梅花點舌丹等。目前蟾酥類制劑在臨床上主治瘡瘍腫毒、乳癰、瘰疬，頑癬、鵝掌風(fēng)，牙痛、風(fēng)濕痹痛，療效確切[2]。其抗腫瘤療效顯著，但也能殺傷正常細胞，且治療窗狹窄，治療劑量與中毒劑量接近[3]。因此，開發(fā)制備新型蟾酥制劑，增強療效、降低毒性，在增加其臨床用藥安全性的同時，能夠進一步開發(fā)其新適應(yīng)癥。本文以“蟾酥”、“蟾毒靈”、“制劑”、“Chansu”、“bufalin”和“preparation”為關(guān)鍵詞，在PubMed、Medline、中國知網(wǎng)等數(shù)據(jù)庫中檢索1991年至2017年期間相關(guān)文獻，對蟾酥類化合物制劑學(xué)方面的研究進行綜述。共檢索出相關(guān)文獻297篇，其中有效文獻126篇。現(xiàn)對蟾酥制劑制備工藝、新劑型、藥效學(xué)和藥代動力學(xué)等方面的研究內(nèi)容及進展進行綜述，為新蟾酥制劑的開發(fā)及應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1 蟾酥類傳統(tǒng)中藥制劑的研究現(xiàn)狀及發(fā)展局限性

蟾蜍及蟾酥的臨床應(yīng)用源遠流長，《本草綱目》曾記載蟾酥“治發(fā)背疔瘡，一切惡腫”。在17、18世紀，西歐各國還未將洋地黃引進臨床前，民間就用蟾皮干燥粉膜治療浮腫。近年來，隨著對蟾酥化學(xué)成分及結(jié)構(gòu)、藥理作用及機制原理等方面研究的進展深入，蟾酥的劑型研發(fā)也在不斷推進、改良。

配伍、組方不同，成藥藥效和毒性也不同。目前，蟾酥以湯劑、丸劑、膏劑、注射劑等多種劑型入藥，其中湯劑應(yīng)用最早，丸劑在臨床應(yīng)用最廣泛。2010版《中國藥典》規(guī)定“取蟾酥，搗碎，加白酒浸漬，時常攪動至呈稠膏狀，干燥，粉碎”以炮制蟾酥粉，“多入丸散用，外用適量”。中藥蟾酥及以它為主藥的“六神丸”馳名中外，具有清涼解毒、消炎止痛的功效，臨床用于爛喉丹痧，咽喉腫痛，喉風(fēng)喉癰，單雙乳蛾，小兒熱癤、癰瘍疔癤，乳癰發(fā)背，無名腫毒。其他含有蟾酥的成藥如六靈解毒丸和華蟾素臨床亦用于清熱解毒、消腫止痛。此外，臨床還將蟾酥用于治療心力衰竭、心肌梗塞、風(fēng)蟲牙痛，進行表面麻醉等。例如，救心丸具有益氣活血，強心止痛的功效，用于氣虛血瘀型冠心病、心絞痛，陳舊型心肌梗塞、心功能不全等引起的心痛、胸悶、心悸、眩暈等癥狀。另外，孫楚江等將蟾酥散用于治療骨結(jié)核，陳約翰等將蟾酥制劑用于口腔表面麻醉以進行口腔手術(shù)。文獻報道，對上呼吸道感染患者給予5%葡萄糖注射液加入蟾酥注射液20 ml靜點(60滴/min)，患者出現(xiàn)過敏癥狀，側(cè)肢疼痛、頭暈、全身疼痛、寒戰(zhàn)、呼吸急促。另有研究表明，華蟾素在機體內(nèi)引起超敏反應(yīng)，刺激神經(jīng)末梢的痛覺感受器，滴注時靜脈血管收縮痙攣，長期刺激時可導(dǎo)致靜脈非特異性炎癥。

目前，世界范圍內(nèi)對中醫(yī)藥治病的關(guān)注越來越多，與此同時，人們對于中醫(yī)藥應(yīng)用的安全性、有效性以及作用機制的明確性提出更高要求。蟾酥類傳統(tǒng)中藥制劑抗炎、強心和抗腫瘤等作用功效在長期的臨床應(yīng)用和國內(nèi)外學(xué)者的實驗研究中已得到了證實[4]。但是，由于中藥制劑處方復(fù)雜、成分多、藥物間相互作用機制不明，在醫(yī)藥發(fā)展和應(yīng)用越來越嚴謹?shù)慕裉欤@在很大程度上限制了蟾酥國際范圍內(nèi)更廣泛的應(yīng)用。因此，為了更進一步的開發(fā)應(yīng)用蟾酥，制備并優(yōu)選成分相對較少，功效主治與作用機制相對更為明確的蟾酥類新型制劑成為新的開發(fā)方向[5]。

2 蟾酥類新型制劑的研究進展及應(yīng)用開拓性

目前，新型遞藥系統(tǒng)的研究成為新熱點，且發(fā)展迅速，微乳劑、微囊劑、微球劑等劑型的研發(fā)增加了藥物的延展性和溶解度，減少毒副反應(yīng)。不少文獻報道，將蟾酥類化合物包封于不同的遞藥系統(tǒng)中，通過不同的轉(zhuǎn)運機制將藥物轉(zhuǎn)運至靶部位，具體介紹如下。

2.1 蟾酥類脂質(zhì)體制劑 脂質(zhì)體是由磷脂雙分子層構(gòu)成的具有水相內(nèi)核的脂質(zhì)微囊。蟾毒靈是蟾酥主要有效成分。梁偉等發(fā)現(xiàn)，蟾毒靈脂質(zhì)體抗癌作用比蟾毒靈單體給藥時更強，毒副作用更低。同時，蟾毒靈能夠影響極性磷脂頭的運動取向，引起脂質(zhì)雙層晶相變化，穩(wěn)定磷脂雙分子層結(jié)構(gòu)，且具有劑量依賴性。但經(jīng)超聲處理后，部分蟾毒靈脂質(zhì)體轉(zhuǎn)變?yōu)槟z束或微泡，且隨著超聲時間延長，膠束及微泡的比例增多。因此，蟾毒靈對于磷脂雙分子層是一把雙刃劍，在制備處方及方法的選擇上更需慎重。Li Y等[6]制備的anti-CD40-BFL能夠增強蟾毒靈抗黑色素瘤作用，減少全身毒副作用，是化學(xué)療法與免疫療法聯(lián)合應(yīng)用于抗腫瘤研究的良好體現(xiàn)。Li F等利用薄膜分散、超聲和凍干等技術(shù)，以類脂E-80和膽固醇為膜材，以海藻糖為凍干保護劑，制得脂質(zhì)體中蟾毒靈包封率為86.5%，華蟾酥毒基包封率為90.0%，酯蟾毒配基包封率為92.1%，且在2-8℃低溫條件下，可穩(wěn)定儲藏 6個月。Yuan J 等[7]制備PEG修飾的蟾毒靈長循環(huán)脂質(zhì)體，改善水溶性，增強了它對U251神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞的殺傷作用，延長消除半衰期，達到了長循環(huán)的目的。

2.2 蟾酥類納米粒制劑 制備蟾毒靈白蛋白納米粒和bufalin-mPEG-PLGA-PLL-cRGD 納米粒，將它們應(yīng)用于治療結(jié)直腸癌和肝癌等實體瘤，結(jié)果表明將蟾毒靈包裹入納米粒后，能夠增強對腫瘤的治療效果、腫瘤靶向性和降低藥物毒副作用。由于蟾毒靈具有明顯的心臟毒性，利用納米粒遞藥進行在體原位移植瘤實驗。在對SCID小鼠注射MDA-MB-231細胞產(chǎn)生原發(fā)性腫瘤6 d后，對造模成功的SCID小鼠給予空白納米粒或蟾毒靈納米粒治療。實驗發(fā)現(xiàn)，空白納米粒處理的SCID小鼠腫瘤侵襲性生長，蟾毒靈納米粒處理的SCID小鼠腫瘤生長被明顯抑制，由此證明蟾毒靈納米粒能夠抑制腫瘤生長[8]。張慧卿等以牛血清白蛋白為載體，去溶劑法制備蟾毒靈白蛋白納米粒，利用LC-MS法比較了單體和納米粒大鼠體內(nèi)藥代動力學(xué)特征差異，證實納米粒裝載后再給藥，能夠有效延長蟾毒靈血中留存時間，達到緩釋作用。Tian X 等[9]制備蟾毒靈殼聚糖納米粒(Bu-BCS-NPs)并將其應(yīng)用于乳腺癌治療。Bu-BCS-NPs改善了蟾毒靈的水溶性，并表現(xiàn)出良好的體外緩釋作用，較好地被MCF-7乳腺癌細胞攝入。且與蟾毒靈單體相比，Bu-BCS-NPs對MCF-7細胞具有更強的細胞毒性和促細胞凋亡作用。Hu Q等[10]制備的蟾毒靈聚醚酰亞胺納米粒粒徑均一穩(wěn)定，裸鼠活體成像實驗發(fā)現(xiàn)，與蟾毒靈單體相比，蟾毒靈聚醚酰亞胺納米粒抑制結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移，對結(jié)腸癌有更顯著的抑制作用，延長裸鼠生存時間。

2.3 蟾酥類納米乳 納米乳 (nanoemulsion)是由水、油、表面活性劑和助表面活性劑等自發(fā)形成，粒徑為1-100 nm的熱力學(xué)穩(wěn)定、各向同性，透明或半透明的均相分散體系。目前授權(quán)的關(guān)于蟾酥類納米乳的專利有“一種蟾酥總內(nèi)酯納米乳及其制備方法”和“祛斑納米乳霜”。前者屬于獸藥領(lǐng)域，制得蟾酥總內(nèi)酯納米乳，具有黏度低、穩(wěn)定性好、分散性強、吸收迅速、靶向釋藥等特點，使蟾毒靈更好黏附于細菌表面，滲透進入細菌內(nèi)部，從而干擾細菌代謝，發(fā)揮良好的抑菌作用。后者以蟾酥二氧化鈦治療蝴蝶斑曬斑，屬于納米中藥美容化妝品，納米乳霜制劑滲透性強，改善面部微循環(huán)，清除皮膚內(nèi)細菌，以達到祛斑效果。董巖與梁鑫等制備并研究了華蟾素乳劑對實體腫瘤的療效及其可能的作用機制。采用高壓乳勻法制備華蟾素注射乳劑，粒徑為(87.7±16.1)nm，zeta電位為-23.7 mV，滲透壓偏高滲。運用Lewis肺癌小鼠模型，觀察得華蟾素乳劑能夠抑制腫瘤生長，抑瘤率高達32.7%；提高荷瘤小鼠的生存質(zhì)量，改善免疫功能。

2.4 蟾毒靈微球 微球(microsphere)是指藥物溶解或分散于高分子材料中形成的微小球狀實體，一般制備成混懸劑供注射或口服用，微球粒徑范圍一般為1-500 μm。陳秀秀等[11]制備蟾酥總內(nèi)酯聚乳酸微球并評價其緩釋性能和臨床藥效。以75%乙醇及二氯甲烷提取蟾酥粉,獲得蟾酥總內(nèi)酯；采用乳化-溶劑揮發(fā)法，以聚乳酸(PLA)為包材輔料，制備蟾酥總內(nèi)酯PLA微球。掃描電鏡觀察其形態(tài)結(jié)構(gòu)，發(fā)現(xiàn)微球呈完整的圓球型。大鼠皮下注射后，蟾毒靈從PLA微球中釋放出來入血。蟾酥總內(nèi)酯中的主要有效成分，蟾毒靈的達峰時間(Tmax)、消除半衰期(t1/2)和平均滯留時間(MRT)均顯著提高，分別是蟾酥總內(nèi)酯溶液劑的4.0、18.5、2.5倍,而血漿峰濃度只有溶液劑的23.9%，表明PLA微球具有明顯的藥物緩釋作用。此外，蟾酥總內(nèi)酯PLA微球與泰樂菌素及氟苯尼考聯(lián)用治療臨床豬喘氣病具有良好的協(xié)同作用。曲功霖等[12]以氟尿嘧啶注射液為陽性對照，研究蟾酥脂質(zhì)微球注射液對荷人肝癌HepG2、人食管癌EC9706、人結(jié)腸癌HCT-8和人胃癌BGC803瘤株四種荷瘤裸鼠腫瘤生長的影響。實驗結(jié)果表明，蟾酥脂質(zhì)微球注射液具有確切的抑制HepG2、EC9706、HCT-8和BGC803細胞增殖的作用，作用效果以抑制HepG2和EC9706瘤株生長作用為最佳。華蟾酥精有較好的抗肝癌作用。也有研究員用乳化聚合法制備華蟾素精明膠微球，根據(jù)血管解剖學(xué)結(jié)構(gòu)設(shè)計微球粒徑，通過正交試驗確定最佳制備工藝，選擇性地栓塞肝竇前動脈，使其肝竇末梢動脈栓塞。同時體外實驗表明，載藥明膠微球在栓塞的同時，可在肝內(nèi)將包載的華蟾素精緩慢釋放，使肝竇局部高藥物濃度，以此提高療效、降低其心臟毒性。

由于脂質(zhì)微球是熱力學(xué)不穩(wěn)定體系，高溫滅菌會加速其不穩(wěn)定性，因此維持微球滅菌前后的物理化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定具有重要意義。王濤等研究蟾酥脂質(zhì)微球(BU-LM)的處方工藝并考察制劑的滅菌穩(wěn)定性，實驗結(jié)果表明粒子界面荷電性、空間位阻作用、pH和滅菌方式是影響蟾酥脂質(zhì)微球注射液的物理化學(xué)穩(wěn)定性的重要因素[13]。

3 結(jié) 語

綜上所述，國內(nèi)外研究報道了目前蟾酥類制劑臨床常用的劑型及其藥理作用、毒副反應(yīng)等。近年來，研究還發(fā)現(xiàn)蟾酥具有廣譜抗腫瘤、抗菌作用。蟾酥新成分的提取與分離純化，能夠促進飼養(yǎng)蟾蜍、制備藥用蟾酥等產(chǎn)業(yè)的興起；新藥理作用及其機制原理的發(fā)現(xiàn)，能夠促進其臨床新適應(yīng)癥的開發(fā)；制劑工藝的優(yōu)化可降低蟾酥毒性、提高療效。目前蟾酥類制劑主要為丹劑和丸劑，蟾酥納米類新型制劑的研究仍處于實驗室階段，未能進入臨床試驗階段，發(fā)展仍較為滯后，且蟾酥類制劑對心臟、呼吸和神經(jīng)系統(tǒng)的毒副作用較強，市售蟾酥藥劑主要應(yīng)用于抗炎消腫。但是，抗腫瘤藥物的應(yīng)用限制較多，市售蟾酥藥劑于此方面的研究較少。制備一種適宜的蟾酥類制劑，保持或提高原有療效的前提下降低或消除其毒性，將更能保障其有效性和安全性，開發(fā)新適應(yīng)癥。隨著蟾酥類化合物的藥物化學(xué)、藥理學(xué)和藥劑學(xué)等研究的深入，蟾酥來源的蟾蜍科動物的需求量將不斷增加。因此，蟾蜍人工飼養(yǎng)培育技術(shù)發(fā)展，科學(xué)合理可持續(xù)地利用中藥資源至關(guān)重要。