莫菊玲 馮敏清 肇麗杰 胡路琴 劉小燕

(廣東省佛山市婦幼保健院 佛山 528200)

近年來，宮頸癌病因?qū)W領(lǐng)域的研究有了重大突破，明確了人乳頭狀瘤病毒(HPV)感染是引發(fā)婦女罹患宮頸癌的重要因素。HPV亞型、CIN級別與宮頸癌病變之間存在一定的關(guān)系，不同的HPV亞型對宮頸上皮細(xì)胞的感染能力不同，而且存在較大差異，其中HPV16和HPV18是引發(fā)宮頸癌及其癌前病變的發(fā)生率最高的病毒株。如何正確識別HPV的各種亞型，特別是各亞型感染與宮頸病變進(jìn)展的關(guān)系，是及早發(fā)現(xiàn)、及時干預(yù)宮頸癌前病變、預(yù)防宮頸癌的最有效和最經(jīng)濟(jì)的手段。本文應(yīng)用Cervista HPV檢測技術(shù)分析A9組高危型感染與CIN級別的關(guān)系，旨在闡明Cervista HPV檢測 A9組高危型HPV感染在宮頸癌前病變及宮頸癌篩查中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 資料來源

選擇2017年1月～2017年6月期間來我院婦科門診就診的細(xì)胞學(xué)檢查≥ASCUS的患者，行陰道鏡檢查，且在陰道鏡下定位活檢，對經(jīng)病理檢驗(yàn)確診為CIN的患者使用TCT檢測，用同一剩余樣本進(jìn)行Cervista HR-HPV檢測，共篩選出符合條件A9型組陽性患者208例，對上述患者進(jìn)行臨床分析?；颊吣挲g范圍20～65歲，平均年齡為(38.25±9.15)歲，其中CINⅠ為52例，CINⅡ?yàn)?8例，CINⅢ為75例，浸潤癌為3例。所有研究對象均有3年以上性生活史，無子宮切除和宮頸手術(shù)史。

1.2 方法

1.2.1TCT檢測

應(yīng)用新柏氏液基細(xì)胞學(xué)檢測(TCT)技術(shù)(Hologic公司，美國)檢測宮頸細(xì)胞，診斷結(jié)果根據(jù)國際癌癥協(xié)會(NCI)推薦的TBS(2001)診斷系統(tǒng)分類標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分類，所有標(biāo)本均由我院細(xì)胞病理科專業(yè)醫(yī)師進(jìn)行閱片并作出診斷。

1.2.2Cervista HPV檢測

標(biāo)本使用新柏氏液基細(xì)胞學(xué)檢測剩余樣本(Hologic公司)，所有Cervista HR-HPV檢測均按照儀器生產(chǎn)商提供的說明書中的檢測流程進(jìn)行。使用Genfind DNA提取試劑盒(Hologic公司)從患者剩余的TCT宮頸樣本中進(jìn)行DNA樣本提取，采用酶切信號放大技術(shù)來檢測DNA的14種高危型HPV病毒，檢測試劑中含有3組寡核苷酸探針混合物，分別為A5/A6組、A7組和A9組，3組探針共可檢測出14種HPV病毒，A5/A6型組可識別51、56、66亞型，A7型組可識別18、39、45、59、68亞型，A9型組可識別16、31、33、52、58亞型。

1.2.3陰道鏡檢查及宮頸活檢

由技術(shù)過硬、經(jīng)驗(yàn)豐富的宮頸?？崎T診醫(yī)生進(jìn)行陰道鏡檢查，在陰道鏡指導(dǎo)下在病變部位或疑似病變部位取活檢，如果陰道鏡效果不好，則繼續(xù)行宮頸管搔刮術(shù)，所有組織標(biāo)本均由本院有經(jīng)驗(yàn)的專業(yè)病理科醫(yī)生進(jìn)行閱片并作出診斷。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，計數(shù)資料以頻數(shù)和百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05代表差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

Cervista HPV A9型組陽性208例中年齡構(gòu)成比：<30歲67例，占比32.21%；30～39歲68例，占比32.69%；40～49歲65例，占比31.25%；≥50歲10例，占比4.81%。年齡差距差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。49歲以內(nèi)HPVA9型組感染率相近，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，而年齡大于50歲以上者HPV感染率明顯下降。由此提示HPV感染率與年齡相關(guān)，年齡不同，婦女體內(nèi)的雌激素水平、宮頸局部的免疫功能以及個人的性生活狀況均不相同，因此HPV病毒的感染幾率、清除速率與再次感染幾率都不盡相同。

Cervista HPV A9型組陽性208例中各級別CIN在不同年齡段的分布情況：208例標(biāo)本經(jīng)活檢病理確診CINⅠ為52例，CINⅡ?yàn)?8例,CINⅢ為75例，浸潤癌為3例，隨著年齡的增大，CINⅡ～Ⅲ及浸潤癌的發(fā)生率亦隨之增加，見表1。

表1 各級別CIN及浸潤癌發(fā)生率在不同年齡段的分布情況

3 討論

宮頸癌是婦科常見的、高發(fā)的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率高居女性惡性腫瘤發(fā)病率的第2名，全球每年因?qū)m頸癌致死的患者人數(shù)約有20余萬[1]。有數(shù)據(jù)顯示，2015年我國宮頸癌新發(fā)病人數(shù)為9.89萬，其中死亡人數(shù)為3.05萬[2]。而在發(fā)達(dá)國家宮頸癌的死亡率已經(jīng)退出前10位，這主要得益于發(fā)達(dá)國家持續(xù)推進(jìn)有組織的大規(guī)模宮頸癌篩查項(xiàng)目，且其宮頸癌篩查技術(shù)比較先進(jìn)的[3]。而在我國，宮頸癌則居于女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤發(fā)病率與死亡率之首，且近年來顯現(xiàn)出明顯的年輕化、低齡化趨勢。眾多流行病學(xué)、分子生物學(xué)與基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究已經(jīng)證實(shí)高危型HPV持續(xù)感染是誘導(dǎo)宮頸癌發(fā)生的根本原因。因而，宮頸癌也是目前人類所患癌癥中唯一能夠明確病因的，這項(xiàng)發(fā)現(xiàn)對于宮頸癌的防治具有非常重要的意義[4]。從女性宮頸感染高危型HPV開始到宮頸癌前病變直至最終發(fā)展成為宮頸癌是一個漫長、漸變、反復(fù)的過程，通常需要經(jīng)歷8～10年時間，有的甚至更長時間。而HPV病毒并非是一種不可逆的生殖道感染[5]，在這個漸變的過程中，及時發(fā)現(xiàn)高危因素，及早明確診斷、正確治療癌前病變，是阻止其發(fā)展為浸潤癌、降低宮頸癌發(fā)生率和死亡率的重中之重。由于HPV DNA 檢測具有高度的靈敏性和可靠性，因而可更加有效地排除低風(fēng)險女性，近年來已被一些國家作為初篩手段納入國家宮頸癌篩查體系中[6]。隨著對HPV結(jié)構(gòu)、性質(zhì)及感染機(jī)制等基礎(chǔ)研究的不斷深入，各種更加簡便、高效的HPV檢測方法不斷涌現(xiàn)。由于年輕女性是HPV感染的高危人群，因此，中國優(yōu)生科學(xué)協(xié)會陰道鏡和宮頸病理學(xué)分會(CSCCP)建議以高危HPV檢測作為初篩用于30歲以上女性[7]。本文采用的DNA酶切放大技術(shù)檢測高危型HPV是2009年獲得美國國家食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)批準(zhǔn)的，Cervista HPV 檢測系統(tǒng)是全新一代可區(qū)分不同高危型組、且擁有內(nèi)部質(zhì)控技術(shù)的高危型HPV檢測方法，該方法基于DNA酶切放大技術(shù)(即invader技術(shù))，一種用于檢測特定核苷酸序列的信號放大技術(shù)定性檢測14種HPV-DNA高危亞型，檢測試劑中含有3組寡核苷酸探針混合物，分別為A5/A6組、A7組和A9組，3組探針共可檢測出14種HPV病毒，A5/A6型組可識別51、56、66亞型，A7型組可識別18、39、45、59、68亞型，A9型組可識別16、31、33、52、58亞型。陳慧萍等[8]的研究顯示A9型組高危型HPV感染占所有感染人群的45.00%，并且A9型組HPV感染患者在CIN中的陽性率隨著病變程度的增加呈上升趨勢，本文分析結(jié)果亦顯示A9型組高危HPV感染發(fā)生宮頸病變(CIN2+或CIN3+)患者明顯高于CIN1, 差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。一項(xiàng)多中心臨床研究表明：Cervista HPV 檢測A9組對CIN2+十分靈敏且陰性預(yù)測值十分準(zhǔn)確，分別達(dá)到87.97%和78.3%，可見其在宮頸癌篩查中意義重大。目前，HPV16和HPV18是引發(fā)宮頸癌及其癌前病變的發(fā)生率最高的病毒株，70%左右的宮頸癌發(fā)生都與HPV16、18型感染有關(guān)[9]。但由于種族和基因的差異，對于中國人來說HPV16,31,33亞型是與CIN2+的關(guān)系最為密切病毒。上海的一項(xiàng)大樣本研究[10]顯示，高危型HPV感染在CINⅡ、CINⅢ以及宮頸鱗癌中的發(fā)生率分別為74.9%、70.2%和83.3%，最常見的高危型HPV型是16、58和52型。廣州金域診斷中心[11]以HPV分型檢測共51345例(其中廣東占55%)，結(jié)果亦顯示最常見的高危型HPV感染依次為52、16、58亞型，50歲以上組則是以致病性最強(qiáng)的16亞型為最常見。本文10例高危型HPVA9型組感染中，全部為CIN2+，2例為浸潤癌，與其結(jié)果相符。而A9組正好可識別16、31、33、52、58亞型。因此，臨床中若以高危HPV作為初篩，如檢出A9型組高危HPV陽性，應(yīng)引起重視，做更進(jìn)一步的隨訪和檢查，包括TCT分流檢測或陰道鏡檢查，以便及早發(fā)現(xiàn)高級別宮頸病變，并給于積極治療，可提高發(fā)現(xiàn)宮頸癌并有效降低死亡率。