陳鵬，趙景嵐，魯瑞珍，董紹安，隋英忠(青島市中心醫(yī)院，山東青島266042)

肺癌是臨床常見的惡性腫瘤，在我國肺癌的發(fā)病率和病死率呈上升趨勢，嚴(yán)重威脅居民健康[1]。肺癌預(yù)后較差，患者5年生存率低于15%[2]。大部分患者確診時(shí)已屬晚期。雖然近年來靶向治療、免疫治療不斷發(fā)展，但總生存率仍未有明顯提高。Hippo通路是目前臨床研究的熱點(diǎn)，該通路與細(xì)胞增殖和凋亡關(guān)系密切[3]。轉(zhuǎn)錄共激活因子(TAZ)及Yes相關(guān)蛋白(YAP)均為Hippo通路的下游效應(yīng)分子。TAZ是Hippo通路的主要成員，同時(shí)也參與了細(xì)胞生長與凋亡。TAZ在肺癌組織中存在過表達(dá)現(xiàn)象[4]。YAP基因表達(dá)升高能夠促進(jìn)多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展[5]。TAP與YAP的表達(dá)變化是否與非小細(xì)胞肺癌有內(nèi)在聯(lián)系，目前尚無相關(guān)研究。本研究探討TAZ、YAP在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)變化及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集本院2014年10月～2015年10月?lián)衿谑中g(shù)的非小細(xì)胞肺癌標(biāo)本60例?；颊咝g(shù)前均未經(jīng)任何放化療和免疫治療，男38例、女22例、年齡46～77歲；依據(jù)WHO肺癌分類標(biāo)準(zhǔn)分為鱗癌19例、腺癌41例；TNM分期Ⅰ期28例、Ⅱ期17例、Ⅲ期13例、Ⅳ期2例。癌旁組織樣本取自距離腫瘤組織邊緣2 cm處的正常肺癌組織。標(biāo)本均經(jīng)常規(guī)HE染色并經(jīng)病理檢查證實(shí)診斷。

1.2 組織中TAZ、YAP蛋白表達(dá)檢測 采用免疫組化MaxVision法。參照試劑盒說明書進(jìn)行操作。標(biāo)本經(jīng)甲醛固定，石蠟包埋后切片。經(jīng)脫蠟，乙醇脫水，高壓抗原修復(fù)。室溫下冷卻，加PBS沖洗，沖洗后孵育加一抗，再次孵育過夜，PBS沖洗，加二抗后再次孵育。PBS沖洗，DAB顯色劑顯色，水洗后蘇木紫復(fù)染。用鹽酸酒精分化標(biāo)本，氨水返藍(lán)，常規(guī)乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片后于顯微鏡下觀察。TAZ抗體和YAP兔抗人單克隆抗體、即用型快捷免疫組化MaxVision試劑盒均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司，DAB顯色試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。采用半定量積分法進(jìn)行結(jié)果判定。根據(jù)顯色強(qiáng)度和染色細(xì)胞百分比進(jìn)行評分，無顯色計(jì)0分，弱染色(淡黃色)計(jì)1分，中染色(棕黃色)計(jì)2分，強(qiáng)染色(棕褐色)計(jì)3分；染色細(xì)胞百分比為0計(jì)0分，<10%計(jì)1分，10%～50%計(jì)2分，51%～80%計(jì)3分，>80%計(jì)4分。以上兩項(xiàng)分?jǐn)?shù)相乘<6為低表達(dá)、≥6為高表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性采用Spearman等級相關(guān)進(jìn)行分析；P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肺癌組織、癌旁組織中TAZ蛋白表達(dá)比較 肺癌組織中TAZ蛋白高表達(dá)43例(71.7%)，癌旁組織中TAZ蛋白高表達(dá)30例(50.0%)，二者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差異(P<0.05)。41例腺癌組織中TAZ蛋白高表達(dá)27例(65.9%)，19例鱗癌組織中TAZ蛋白高表達(dá)16例(84.2%)，二者比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。45例Ⅰ～Ⅱ期肺癌組織中TAZ蛋白高表達(dá)29例(64.4%)，15例Ⅲ～Ⅳ期肺癌組織中TAZ蛋白高表達(dá)14例(93.3%)，二者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2 肺癌組織、癌旁組織中YAP蛋白表達(dá)比較 肺癌組織中YAP蛋白高表達(dá)41例(68.3%)，癌旁組織中YAP蛋白高表達(dá)25例(41.7%)，二者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差異(P<0.05)。41例腺癌組織中YAP蛋白高表達(dá)25例(61.0%)，19例鱗癌組織中YAP蛋白高表達(dá)16例(84.2%)，二者比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。在45例Ⅰ～Ⅱ期肺癌組織中YAP蛋白高表達(dá)27例(60.0%)，15例Ⅲ～Ⅳ期肺癌組織中YAP蛋白高表達(dá)14例(93.3%)，二者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.3 非小細(xì)胞肺癌組織中TAZ與YAP蛋白表達(dá)的相關(guān)性 根據(jù)Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示，非小細(xì)胞肺癌組織中TAZ與YAP蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.526，P<0.05)。

3 討論

肺癌是臨床高發(fā)的惡性腫瘤，近年來，其在亞洲國家的發(fā)病率不斷增高[6]。對于肺癌早期診斷和早期治療十分重要。因此對腫瘤分子層面的研究，尤其是對評估腫瘤生物學(xué)行為的研究有重要意義。Hippo信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是一條重要的抑癌通路，有許多原癌基因和抑癌基因參與其中。Hippo信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖和凋亡與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。研究表明，TAZ、YAP與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移有密切聯(lián)系[7]。也有研究認(rèn)為，骨肉瘤的發(fā)生、發(fā)展及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移與TAZ、YAP有關(guān)[8]。TAZ、YAP是否也對肺癌有協(xié)同效應(yīng)，對于了解肺癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移有重要意義，有可能為肺癌的診斷和治療提供新思路。

TAZ是Hippo-TAZ通路的效應(yīng)分子。TAZ含有轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子結(jié)構(gòu)域，有兩個(gè)保守位點(diǎn)的色氨酸殘基模序，能夠與具有PPXY結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，發(fā)揮轉(zhuǎn)錄激活的作用。已經(jīng)證實(shí)在多種腫瘤組織中，TAZ是癌基因，TAZ表達(dá)失調(diào)控后，細(xì)胞便呈無限增殖狀態(tài)，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展[9]。肺癌組織中TAZ表達(dá)升高，沉默TAZ的表達(dá)，肺癌細(xì)胞增殖活性受到抑制[10]。有研究[11]表明，非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后不良與TAZ的高表達(dá)有關(guān)。本研究結(jié)果也表明，肺癌組織中TAZ蛋白表達(dá)較癌旁組織高，并且TAZ的高表達(dá)與腫瘤臨床分期有關(guān)，而臨床分期較晚患者預(yù)后差?？梢奣AZ參與了肺癌的發(fā)生發(fā)展。

TAZ是YAP的旁系同源物，約有50%的同源性，在拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)上十分相似。兩者的功能相似，高度依賴TEAD家族轉(zhuǎn)錄因子發(fā)揮轉(zhuǎn)錄活性[12]。人類YAP基因，位于染色體11q22上，相對分子質(zhì)量約65 kDa。YAP也是Hippo信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的重要信號蛋白，可以調(diào)控細(xì)胞分化和凋亡[13]。YAP主要促進(jìn)細(xì)胞生長，阻止細(xì)胞凋亡。當(dāng)YAP活化后，誘導(dǎo)生長因子及凋亡抑制因子過表達(dá)，導(dǎo)致細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化。有研究[14]表明，在前列腺癌、肝癌、結(jié)腸癌、卵巢癌等腫瘤組織中，YAP的表達(dá)較正常組織與癌旁組織高。本研究非小細(xì)胞肺癌組織中YAP蛋白表達(dá)較癌旁組織高。這與相關(guān)文獻(xiàn)[15]報(bào)道類似?？梢奩AP參與了肺癌的發(fā)生發(fā)展過程。并且YAP蛋白表達(dá)與腫瘤臨床分期有關(guān)，分期越晚，其蛋白表達(dá)越高。TAZ與YAP同屬Hippo通路下游的效應(yīng)分子，本研究結(jié)果顯示二者存在正相關(guān)關(guān)系。有研究認(rèn)為，在Hippo通路的上游，LATS1/2磷酸化受限，導(dǎo)致TAZ與YAP表達(dá)同時(shí)升高，從而抑制了細(xì)胞凋亡，促進(jìn)了細(xì)胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)化[16]。即因?yàn)樯嫌瘟姿峄木壒?，二者表達(dá)呈正相關(guān)。另外，在腦膠質(zhì)瘤的研究中得出，TAZ和YAP的高表達(dá)與腦膠質(zhì)瘤的臨床病理參數(shù)相關(guān)，并據(jù)此推測TAZ和YAP可能是同一個(gè)癌基因，或TAZ可促進(jìn)YAP的表達(dá)，二者存在協(xié)同關(guān)系。

綜上所述，TAZ與YAP在非小細(xì)胞肺癌發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。針對這一特點(diǎn)，尋找同時(shí)作用于兩者的相關(guān)藥物對患者進(jìn)行干預(yù)，有可能抑制腫瘤的惡性轉(zhuǎn)化。另外，本研究樣本少，還需通過大樣本量的研究得到更為精確的結(jié)論。

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