吳靖，尚芙蓉

癲癇是神經系統(tǒng)的第二大頑癥，尤其是癲癇持續(xù)狀態(tài)，作為一種危及生命的急癥，具有很高發(fā)病率及死亡率。由于臨床研究困難和發(fā)病機制復雜，癲癇模型成為探討癲癇發(fā)生機制與篩選抗癲癇藥物必不可少的工具，而構建動物癲癇模型是最行之有效的方法之一[1]。目前匹魯卡品致癲大鼠模型已成為研究癲癇持續(xù)狀態(tài)常用的動物模型[2]，但國內應用匹魯卡品致癲大鼠模型行皮質腦電圖描記的實驗研究甚少。本實驗通過比較不同方法，選擇理想的癲癇持續(xù)狀態(tài)皮質腦電圖記錄方法。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組

清潔級健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠30只，體質量(210.0±30.0)g，由華中科技大學同濟醫(yī)學院實驗動物中心提供，許可證號：SCXK(鄂)2004-0007,12 h光亮/黑暗條件、22℃～25℃環(huán)境溫度，分籠喂養(yǎng)。隨機分為A、B、C 3組各10只。

1.2 主要試劑與材料

匹魯卡品購自美國FLUKA公司；氯化鋰購自武漢亦新生物技術有限公司；硫酸阿托品購自蕪湖康奇制藥有限公司；烏拉坦購自國藥集團化學試劑有限公司。采用RM6240生物信號采集處理系統(tǒng)（成都儀器廠生產）和江灣Ⅱ型立體定向儀（第二軍醫(yī)大學器材處生產）。

1.3 動物處理

大鼠癲癇發(fā)作癥狀采用Racine分級標準[3]：0級：無任何反應；Ⅰ級：面部陣攣,包括眨眼、動須、節(jié)奏性咀嚼等；Ⅱ級：Ⅰ級加節(jié)律性點頭；Ⅲ級：Ⅱ級加前肢肌陣攣，但無后肢直立位；Ⅳ級：Ⅲ級加后肢直立位；Ⅴ級：全面性強直-陣攣發(fā)作，并且失去體位控制。

A組大鼠經腹腔注射氯化鋰（0.125 g/kg），18～24 h后腹腔注射硫酸阿托品（1 mg/kg），30 min后腹腔注射匹魯卡品（100 mg/kg），若注射30 min后未誘發(fā)Ⅲ級以上癇性發(fā)作，可每30 min重復給予匹魯卡品（20 mg/kg致總量200 mg/kg）,Ⅳ～Ⅴ級發(fā)作持續(xù)1 h視為模型建立成功。確認模型成功后腹腔注射烏拉坦（1.25 g/kg），麻醉后大鼠固定于定位儀上記錄皮質腦電圖。

B組大鼠經腹腔注射氯化鋰（0.125 g/kg），18～24 h后腹腔注射硫酸阿托品（1 mg/kg），同時注射烏拉坦（1.25 g/kg），麻醉后大鼠固定于定位儀上記錄皮質腦電圖，30 min后腹腔注射匹魯卡品（100 mg/kg），若注射30 min后皮質腦電圖未見癇樣放電，每30 min重復給予匹魯卡品（20 mg/kg致總量200 mg/kg）。

C組大鼠經腹腔注射生理鹽水（0.125 g/kg），18～24 h后注射生理鹽水（1 mg/kg），同時注射烏拉坦（1.25 g/kg），麻醉后大鼠固定于定位儀上記錄皮質腦電圖，30 min后腹腔注射生理鹽水（100 mg/kg）。

1.4 大鼠皮質腦電圖描記

大鼠固定于立體定位儀后暴露顱骨，剝離骨膜。采集左右皮質腦電，3個皮質電極坐標如下：前囟向后6.3 mm，中線左右旁開4.3 mm，人字縫后2 mm正中。牙鉆鉆孔，插入電極，貼附硬腦膜。設定紙速 400 ms/div，靈敏度 500 μV/mm，濾波 100 Hz，時間常數0.02 s，記錄時間3 h。

1.5 主要觀察指標

3組大鼠皮質腦電圖癲癇樣放電出現率及死亡率。

1.6 統(tǒng)計學處理

采用SPSS15.0進行數據處理，計數資料以百分率表示，組間比較采用卡方檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

A組大鼠中4只腦電圖記錄到爆發(fā)性高波幅節(jié)律性棘波或棘慢波，6只記錄到持續(xù)性節(jié)律性棘波、棘慢波，其中1只存活＜3 h，未完成皮質腦電記錄，癇樣放電出現率100%（10/10），死亡率10%（1/10）。B組大鼠中2只記錄到爆發(fā)性高波幅節(jié)律性棘波或棘慢波，4只記錄到持續(xù)性節(jié)律性棘波、棘慢波，其余未見癇樣放電，其中4只存活＜3 h，未完成皮質腦電記錄，癇樣放電出現率60%（6/10），死亡率40%（4/10）。C組大鼠所有腦電圖以5～12 Hz腦電活動為主，波幅20～50 μV，無癇樣放電，均存活＞3 h，均完成皮質腦電記錄，癇樣放電出現率0%（0/10），死亡率0%（0/10）。

3組大鼠癲癇樣放電出現率比較，A組明顯高于B組（P＜0.05），A、B組都明顯高于C組（P＜0.01）；死亡率比較，B組明顯高于A組（P＜0.05），A、B組都明顯高于C組（P＜0.01）。

3 討論

癲癇尤其是癲癇持續(xù)狀態(tài)作為一組由大量神經元反復發(fā)作的異常放電導致的腦部疾病，通過建立動物模型來研究其發(fā)病機制和研發(fā)抗癲癇藥物有重要意義[4]。匹魯卡品致癲大鼠模型是一種同時激動乙酰膽堿和谷氨酸受體導致癲癇發(fā)作的動物模型，癲癇發(fā)作后可出現3個階段的行為和腦電圖變化：一是表現為邊緣性癲癇持續(xù)狀態(tài)的急性期，EEG表現為連續(xù)高波幅、高頻率的棘波、棘慢波發(fā)放；二是表現為行為與EEG均正常的靜止期，持續(xù)時間較短；三是表現自發(fā)性、反復性發(fā)作的慢性期，類似于復雜部分性發(fā)作的患者，每只動物發(fā)作2～3次/周[5]。因此，匹魯卡品致癲大鼠模型既是優(yōu)秀的慢性顳葉癲癇模型，又是理想的用于研究急性癲癇持續(xù)狀態(tài)的癲癇模型[6,7]。目前越來越多的實驗研究選擇匹魯卡品致癲模型對癲癇持續(xù)狀態(tài)的發(fā)病機制及治療方法進行研究。

皮質腦電圖癇樣放電的頻率快慢及波幅高低通常反映癲癇電活動的強弱程度，所以皮質腦電圖在神經系統(tǒng)疾病特別是癲癇的電生理研究中一直是最重要的手段之一[8]。目前癲癇大鼠模型皮質腦電圖的研究有很大進展，在正常活動狀態(tài)下大鼠皮質腦電圖為頻率7～10 Hz的正弦波，波幅在200～400 μV[9]。在癲癇持續(xù)狀態(tài)下大鼠皮質腦電圖呈成簇性發(fā)放的棘波、尖波節(jié)律，并且可見棘-慢及尖-慢復合波等多種形式的癲癇樣放電（波幅100～1000 μV），放電頻率以α、θ頻段為主，其中以θ波頻段所占比率最大[10]。然而腦電信號的檢測受環(huán)境影響很大，而且記錄皮質腦電圖時電極需穿過顱骨貼附大腦皮質，為了排除動物肢體抽搐的影響，需要對記錄腦電圖的大鼠予以良好的麻醉、固定。癲癇持續(xù)狀態(tài)時大鼠的呼吸有一定程度的抑制，同時受麻醉及腦部手術損傷的影響，匹魯卡品癲癇持續(xù)狀態(tài)模型成功率及存活率目前仍不十分理想[11,12]。

本實驗中，順序注射氯化鋰、阿托品、匹魯卡品，模型成功后注射烏拉坦麻醉、固定記錄皮質腦電圖組大鼠，癲癇樣放電率明顯高于注射氯化鋰、阿托品，烏拉坦麻醉、固定后注射匹魯卡品記錄腦電圖組大鼠；死亡率亦明顯降低。同時2組匹魯卡品注射大鼠癲癇樣放電率、死亡率與注射生理鹽水組大鼠均有顯著差異，排除了麻藥使用及電極放置、腦電信號描記的實驗誤差。不同皮質腦電圖記錄方法比較證實，注射氯化鋰、阿托品、匹魯卡品建立模型后烏拉坦麻醉大鼠記錄皮質腦電圖，癲癇樣放電出現率高，死亡率低，是一種比較滿意的記錄匹魯卡品致癲模型癲癇持續(xù)狀態(tài)皮質腦電圖的方法。