劉興旺， 麥康森， 劉付志國， 艾慶輝??

(1.教育部海水養(yǎng)殖重點實驗室(中國海洋大學(xué))，山東 青島266003；2. 鹽城恒興飼料有限公司，江蘇 鹽城 224111)

近年來，以植物蛋白源作為魚粉的替代物在肉食性魚類中使用已成為水產(chǎn)動物營養(yǎng)研究的熱點問題[1]。然而，氨基酸組成不平衡、適口性差、抗營養(yǎng)因子等因素限制了植物蛋白在肉食性魚類中的用量[2]。最近研究發(fā)現(xiàn)，植物蛋白中缺乏?；撬峥赡芤彩窍拗破湓谌馐承贼~類飼料中使用量的重要因素[3]。牛磺酸(Taurine)又稱牛膽堿、牛膽酸或牛膽素，是一種小分子β-含硫氨基酸。魚類合成牛磺酸的能力因種類而不同，也可能與魚的發(fā)育階段相關(guān)[4]。高植物蛋白條件下，飼料中補充?；撬峥纱龠M魚類生長、提高飼料轉(zhuǎn)化，改善海水魚“綠肝”等現(xiàn)象[5-7]。因此，?；撬嵩谝欢l件下是某些海水魚的必需營養(yǎng)素[8]。已有研究表明，大菱鲆仔稚魚的生長與餌料中牛磺酸含量正相關(guān)[9]。且在高植物蛋白水平條件下添加?；撬崮軌蚋纳拼罅怫?Scophthalmusmaximus)生長性能并調(diào)控?；撬徂D(zhuǎn)運載體mRNA的表達[10]。本研究的目的：在以魚粉或大豆?jié)饪s蛋白為主要蛋白源的情況下，比較飼料中添加不同含量牛磺酸對大菱鲆幼魚攝食、生長及脂肪代謝的影響，以期為?；撬嵩诖罅怫遗浜巷暳现械暮侠響?yīng)用提供更多理論支持。

1 材料與方法

1.1 實驗飼料

分別以魚粉(FM，粗蛋白74.3%)和大豆?jié)饪s蛋白(SPC，粗蛋白70.1%)作為蛋白源，配制8種等氮等能的飼料(分別標記為T1～T8)。T1～T4主要蛋白源為FM，T5～T8用57%的SPC替代相應(yīng)蛋白的FM，在2種蛋白源飼料中分別添加0%、0.5%、1.0%和2.0%的?；撬?。實驗飼料配方及化學(xué)成分見表1。所有原料經(jīng)粉碎過80目篩，按表1配方混合均勻，然后再加入魚油和大豆卵磷脂(先溶解于魚油中)，手工將油脂微小顆粒搓散，于V型立式混合機(上海天祥V-0.5型)中混合均勻，最后加入約30%蒸餾水形成硬團，全自動魚用餌料機(260，山東威海友誼機械廠)中將飼料擠壓成直徑3.0 mm的顆粒，在50℃恒溫下干燥12 h，干燥顆粒置-20℃冰箱備用。

表1 試驗飼料配方和化學(xué)成分(干重)分析Table 1 Formulation and proximate composition (dry weight) of eight experimental diets /%

1.魚粉購自七好生物科技有限公司(中國山東)，粗蛋白74.3%，粗脂肪7.3%；大豆?jié)饪s蛋白由山東東營萬得福植物蛋白生物科技有限公司提供，粗蛋白70.1%；粗脂肪0.8%。Fish meal, obtained from Qihao Bio-tech Company (Shandong, China), crude protein, 74.3% dry matter, crude lipid 7.3% dry matter；SPC supplied by Dong Ying Wonderful Vegetable Protein Science and Technology Co., Ltd. (Shandong, China), crude protein, 70.1% dry matter, crude lipid, 0.8% dry matter.

2.維生素預(yù)混料(mg或IU/kg飼料)：維生素A醋酸酯，16 000IU；維生素D3，2 500IU；維生素E醋酸酯，200mg；維生素K3(MSB)，5.1mg；維生素B1，24.5mg；核黃素，36mg；泛酸鈣，58.8mg；維生素B6，19.8mg；維生素B12，0.1mg；煙酸，198mg；葉酸，19.6mg；生物素，1.2mg；肌醇，784mg。Vitamin premix (mg or IU/kg diet): retinol acetate, 16 000IU; cholecalciferol, 2 500IU; alpha-tocopherol, 200 mg; vitamin K3, 5.1 mg; thiamin 24.5 mg; riboflavin, 36 mg; pantothenic acid, 58.8 mg; pyridoxine HCl, 19.8 mg; vitamin B12, 0.1 mg; niacin acid, 198 mg; folic acid, 19.6 mg; biotin, 1.20 mg; inositol, 784 mg.

3.礦物質(zhì)預(yù)混料(mg/kg飼料)：MgSO4·7H2O，1 200mg；CuSO4·5H2O，10mg；ZnSO4·H2O，50mg；FeSO4·H2O，80mg；MnSO4·H2O，45mg；CoCl(1%)，50mg；Na2SeO3(1%)，20mg；Ca(IO3)2(1%)，60mg；沸石粉，8 485mg。Mineral premix (mg/kg diet): MgSO4·7H2O，1 200mg；CuSO4·5H2O，10mg；ZnSO4·H2O，50mg；FeSO4·H2O，80mg；MnSO4·H2O，45mg；CoCl(1%)，50mg；Na2SeO3(1%)，20mg；Ca(IO3)2(1%)，60mg；Zoelite, 8 485mg.

4.?；撬幔汉庇腊布瘓F潛江永安藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)。Supplied by Hubei Qianjiang Pharmaceutical Co., Ltd.

1.2 養(yǎng)殖管理

大菱鲆幼魚購自膠南市大珠山鎮(zhèn)古鎮(zhèn)營村大菱鲆育苗場，為當(dāng)年孵化同批魚苗。養(yǎng)殖實驗在中國海洋大學(xué)鰲山衛(wèi)實驗基地進行。實驗開始前大菱鲆禁食24 h，選擇大小均勻((38.19±0.09)g)、體格健壯的幼魚隨機分配于24個養(yǎng)殖桶(每種飼料隨機投喂3組)，每桶18尾。每天早晚投餌2次(08：30，18：30)，達飽食水平，投喂結(jié)束后30min，吸出殘餌及糞便。實驗采用養(yǎng)殖桶(總體積400 L，水體體積300 L)均為玻璃纖維桶。養(yǎng)殖所用海水為沙濾水，采用循環(huán)流水系統(tǒng)，每桶進水量為1.0 L/min。實驗期間水溫控制為12.0～18.0°C，鹽度為28.5～32，溶氧維持在7mg/L左右。試驗共進行8周。

1.3 樣品收集及化學(xué)分析

養(yǎng)殖試驗結(jié)束后，停止喂食24 h，開始收集大菱鲆。分別稱量每桶魚體總重，記錄魚體個數(shù)，計算每桶大菱鲆平均體重。每桶取5～7尾魚用于體常規(guī)分析。此后，每桶隨機抽取6尾大菱鲆，分別測定其體重、體長、內(nèi)臟和肝臟重量，以計算肥滿度、臟體比和肝體比。同時以注射器自尾靜脈取血，離心后分離血清并于-75℃保存。

魚體和飼料常規(guī)成分分析均采用AOAC的方法[12]。水分的測定為105℃烘干恒重法(24 h)；粗蛋白的測定為凱氏定氮法，采用瑞典TECATOR公司1030型蛋白質(zhì)自動分析儀；粗脂肪的測定為索氏抽提法；粗灰分的測定為箱式電阻爐550℃灼燒法(16 h)?？偰懿捎醚鯊検綗崃坑?Parr 1281，美國)測定。甘油三酯和總膽固醇含量采用試劑盒測定(南京建成)。

1.4 計算與統(tǒng)計分析

大菱鲆特定生長率、攝食率、蛋白質(zhì)效率和飼料效率參照以下公式計算：

特定生長率(Specific growth rate, SGR, %/d)=100×[ln (終末體重)-ln (初始體重)]/實驗天數(shù);

成活率(Survival rate, SR, %)=100×實驗結(jié)束每桶魚尾數(shù)/實驗開始每桶魚尾數(shù);

攝食率(Feed intake, FI, %/d)=100×每尾魚攝食的飼料干物質(zhì)重/[(實驗結(jié)束時魚體重+實驗開始時魚體重)/2×養(yǎng)殖實驗天數(shù)];

飼料效率(Feed efficiency, FE)=(實驗結(jié)束時魚體重-實驗開始時魚體重)/每尾魚攝食的飼料干物質(zhì)重;

蛋白效率比(Protein efficiency ratio, PER)=(終末體重-初始體重)/蛋白攝入量;

肥滿度(Condition factor, CF, g/cm3)=100×實驗終體重(g)/(魚體長度)3(cm3);

肝指數(shù)(Hepatosomatic index, HSI, %)=100×肝臟重(g)/魚體重(g);

內(nèi)臟指數(shù)(Viscerosomatic index, VSI, %)=100×內(nèi)臟團重(g)/魚體重(g);

所有百分率在分析統(tǒng)計前均先經(jīng)Arcsine轉(zhuǎn)換。試驗結(jié)果采用單因素方差分析(ANOVA)與雙因素方差分析同時進行，當(dāng)單因素方差分析處理之間差異顯著(P< 0.05)時，用Tukey’s檢驗進行多重比較分析。所有統(tǒng)計分析均用SPSS 11.0軟件進行。

2 結(jié) 果

2.1 生長及飼料利用率

各處理組成活率在92.59%～98.15%之間，且差異不顯著(P>0.05)(見表2)。飼料中不同的蛋白源1.S.E.M. 標準誤Standard error of means。

表2 不同基礎(chǔ)蛋白源飼料中添加?；撬釋Υ罅怫覕z食和生長性能的影響Table 2 Growth performance of Turbot fed various protein sources-based diets with or without supplemental taurine

注：表中數(shù)據(jù)為平均值(n=3)，同一列右上角不同英文上標字母表示有顯著差異(P< 0.05)。

Note: Values are presented as means of triplication. Means in the same column with different superscripts are significantly different from each other (P< 0.05).

2.分別采用單因素方差分析或雙因素方差分析。One-way or two-way analysis of variance.

極顯著(P<0.001)得影響了大菱鲆的末重、FI、SGR、FE和PER。與魚粉組相比，SPC組末重、FI、SGR、FE和PER均顯著下降(P<0.001)。飼料中添加?；撬釋Υ罅怫夷┲睾虵I沒有顯著影響(P>0.05)，卻顯著影響了SGR、FE和PER。隨著飼料中?；撬岬奶砑樱段?種蛋白源飼料大菱鲆SGR、FE和PER均顯著升高(P<0.05)。飼料蛋白源和?；撬釋Υ罅怫疑L及飼料利用未發(fā)現(xiàn)有交互作用(P>0.05)。

2.2 魚體生化組成

不同蛋白源及?；撬崴綄Υ罅怫殷w組成的影響見表3。飼料蛋白源極顯著影響了大菱鲆魚體水分、粗蛋白及粗脂肪含量(P<0.001)，對灰分無顯著影響(P>0.05)。與魚粉組相比，SPC組魚體水分升高、粗蛋白和粗脂肪降低。而飼料中添加?；撬釋Υ罅怫音~體水分及粗蛋白含量有顯著影響，隨?；撬崽砑恿可撸~體水分有降低的趨勢，而粗蛋白有升高的趨勢(P<0.05)，但?；撬釋︳~體粗脂肪和灰分無顯著影響。不同蛋白源和?；撬釋Υ罅怫音~體組成的影響不存在交互作用(P>0.05)。

注：表中數(shù)據(jù)為平均值(n=3)，同一列右上角不同英文上標字母表示有顯著差異(P< 0.05)。

Note: Values are presented as means of triplication. Means in the same column with different superscripts are significantly different from each other (P<0.05).

1.S.E.M. 標準誤Standard error of means。

2.分別采用單因素方差分析或雙因素方差分析。One-way or two-way analysis of variance.

2.3 肥滿度、臟體比及血清生化指標

飼料中不同蛋白源和添加?；撬釋Υ罅怫曳蕽M度和內(nèi)臟指數(shù)無顯著影響(P>0.05)(見表4)。與魚粉組相比，SPC組大菱鲆肝體比顯著降低(P<0.05)。SPC組肝體比有隨著?；撬崽砑佣饾u升高的趨勢，但差異不顯著(P>0.05)。與魚粉組相比，SPC組大菱鲆血清總膽固醇含量顯著降低(P<0.001)，但飼料中添加?；撬崮茱@著提高SPC組血清總膽固醇水平(P<0.05)。SPC組大菱鲆與魚粉組相比血清甘油三酯含量(P<0.01)顯著降低，但隨飼料中牛磺酸的添加，2種蛋白源處理組大菱鲆血清甘油三酯含量均有升高的趨勢，但差異不顯著(P>0.05)。對血清甘油三酯含量來講，蛋白源與?；撬嶂g有一定的交互作用(P<0.05)。

3 討論

飼料中高水平植物蛋白源與魚粉相比顯著抑制了大菱鲆的攝食率、特定生長率、飼料效率及蛋白質(zhì)效率(P<0.05)(見表2)，該結(jié)果與之前的研究結(jié)果相似[13]。Deng等[14]在牙鲆(Paralichthysolivaceus)、Kissil等[15]在烏頰魚(Sparusaurata)上的研究也發(fā)現(xiàn)隨著飼料中大豆蛋白添加量升高，實驗魚生長率及飼料轉(zhuǎn)化率呈直線下降。Day等[16]的研究卻發(fā)現(xiàn)，飼料中SPC能夠替代25%的魚粉蛋白而對大菱鲆攝食、生長、FE和PER不造成顯著影響。該研究結(jié)果與前述研究的差異可能與其基礎(chǔ)飼料中較高的脂肪水平(22.7%)有關(guān)。在牙鲆上的研究顯示，高水平的植物蛋白替代魚粉會對魚類的脂肪代謝造成顯著影響[17]。因此，通過添加?；撬岣纳埔蛑参锏鞍滋娲~粉導(dǎo)致造成的脂肪代謝異常問題成為改善植物蛋白在魚類中應(yīng)用的一個重要手段[18]。

表4 不同基礎(chǔ)蛋白源飼料中添加?；撬釋ο嚓P(guān)生理指標的影響Table 4 Hematocrit and biometric indices of Turbot fed various protein sources-based diets with or without supplemental taurine

注：表中數(shù)據(jù)為平均值(n=3)，同一列右上角不同英文上標字母表示有顯著差異(P< 0.05)。

Note: Values are presented as means of triplication. Means in the same column with different superscripts are significantly different from each other (P< 0.05).

1.S.E.M. 標準誤Standard error of means。

2.分別采用單因素方差分析或雙因素方差分析。One-way or two-way analysis of variance.

本研究中，隨著飼料中牛磺酸梯度升高，大菱鲆特定生長率、飼料效率及蛋白質(zhì)效率顯著升高(P<0.05)。在牙鲆[4]、虹鱒(Oncorhynchusmykiss)[19]、歐洲鱸魚(Dicentrarchuslabrax)[20]和五條鰤(Seriolaquinqueradiata)[21]等魚類上的研究也得到類似結(jié)果。這一方面與牛磺酸調(diào)節(jié)消化酶活性促進對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收有關(guān)[10]，也與牛磺酸的添加節(jié)約了從其他含硫氨基酸向?；撬岬暮铣赊D(zhuǎn)化有關(guān)[22]。Wang等研究發(fā)現(xiàn)大菱鲆具有將蛋氨酸和胱氨酸轉(zhuǎn)化為?；撬岬哪芰?，但是這種能力不足以滿足大菱鲆快速生長的需要，需要在飼料中補充?；撬嵋源龠M魚類的生長[22]。齊國山曾研究發(fā)現(xiàn)初始體重6.3g的大菱鲆幼魚飼料中牛磺酸最適需求量為1.0%[23]。但在五條鰤上的研究發(fā)現(xiàn)，在蛋白源為SPC時實驗魚對?；撬岬男枨罅扛哂陲暳系鞍自礊轸~粉時[24]。這是大豆蛋白影響糞便中?；撬岷湍懼岬牧慷档汪~類血清中牛磺酸水平而造成的[19]。因此，植物蛋白對魚類?；撬嵝枨蟮挠绊懹袃煞矫妫阂环矫媸翘岣吲；撬岬呐判?，另一方面抑制牛磺酸的合成。大菱鲆在不同生長階段、不同基礎(chǔ)配方條件下?；撬嵝枨罅渴欠翊嬖谧兓?，值得進一步進行研究。

在本研究中，SPC組大菱鲆與魚粉組相比體組織粗蛋白和粗脂肪水平、肝體比及大菱鲆血清甘油三酯和膽固醇含量顯著降低(P<0.05)。該結(jié)果與在其他魚類上的研究結(jié)果相似[17]。很多研究發(fā)現(xiàn)，SPC會影響海水魚類的脂肪代謝,一方面是由于大豆蛋白中的非淀粉多糖能夠引起腸炎，導(dǎo)致魚對脂肪吸收下降，從而引起魚體脂肪含量下降[25];同時，植物蛋白源中其他非蛋白成分(如大豆低聚糖)具有降膽固醇的作用[17]。歐洲鱸魚上的研究發(fā)現(xiàn)，SPC會通過影響魚類肝臟中某些脂肪代謝相關(guān)酶而影響魚的脂肪代謝[26]。也有學(xué)者發(fā)現(xiàn)SPC不僅僅通過影響脂肪酶而影響魚類的脂肪代謝，也通過膽汁酸代謝途徑影響魚類的脂肪代謝[24，27]。因此，在SPC為基礎(chǔ)的飼料中可以通過添加?；撬岣纳颇懼岽x而改善魚類的脂肪代謝。本研究的結(jié)果顯示飼料中添加不同水平?；撬釙r，肝體比、血清甘油三酯和總膽固醇含量都有隨著?；撬崴缴叨叩内厔荩f明飼料中添加?；撬崮軌蛎黠@改善SPC造成的魚類脂肪代謝異常。最近的研究顯示，飼料中?；撬岬淖饔门c魚類的脂肪代謝密切相關(guān)[11]，因此值得進一步的研究。

4 結(jié)論

植物蛋白替代魚粉條件下補充?；撬崮軌虼龠M大菱鲆生長，并對植物蛋白導(dǎo)致的脂肪代謝異常有一定緩解作用。

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