饒大龐 虞海峰 王帥彬 孫來芳

[摘要] 目的 探討miRNA-149靶向IGFBP5抑制膀胱癌細(xì)胞侵襲的分子機(jī)制。 方法 采用雙螢光報(bào)告基因系統(tǒng)分別檢測miRNA-149對(duì)目的基因IGFBP5和PDGFRA的3'UTR的影響。在T24膀胱癌細(xì)胞中瞬時(shí)轉(zhuǎn)染miRNA-149模擬物（mimic）和陰性對(duì)照miRNA（mimic NC），并且在該細(xì)胞中分別轉(zhuǎn)染IGFBP5 過表達(dá)質(zhì)粒（H10495）、陰性對(duì)照（H155）和PDGFRA過表達(dá)質(zhì)粒（H10496），利用Transwell法檢測細(xì)胞的遷移和侵襲能力。 結(jié)果 miRNA-149顯著抑制IGFBP5的 3UTR 活性，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.0001）。Transwell實(shí)驗(yàn)顯示T24-H155-miRNA149-mimics組較T24-H155-mimic-NC對(duì)照組（control）侵襲能力降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.0001），而在T24-H10495-miRNA-149-mimics組較 T24-H155-miRNA-149-mimics組侵襲能力明顯增強(qiáng)（P<0.01）。另一方面，T24-H10496-miRNA-149-mimics組較 T24-H155-miRNA-149-mimics組侵襲能力無明顯變化（P>0.05）。 結(jié)論 該研究表明miRNA-149通過抑制其下游基因IGFBP5從而抑制膀胱癌侵襲，為臨床膀胱癌轉(zhuǎn)移的分子治療研究提供了新的靶點(diǎn)和理論依據(jù)。

[關(guān)鍵詞] miRNA-149;膀胱癌;IGFBP5;PDGFRA;侵襲

[中圖分類號(hào)] R737.9? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-9701（2018）35-0001-04

[Abstract] Objective To investigate the molecular mechanism of miRNA-149 targeting IGFBP5 to inhibit the invasion of bladder cancer cells. Methods The effect of miRNA-149 on the 3'UTR of the target genes IGFBP5 and PDGFRA was examined using a dual fluorescent reporter system. miRNA-149 mimics and negative control miRNAs（mimic NC） were transiently transfected into T24 bladder cancer cells， and IGFBP5 overexpression plasmid（H10495）， negative control （H155） and PDGFRA overexpression plasmid （H10496） were transfected into the cells， respectively. The migration and invasion ability of the cells were detected by Transwell method. Results miRNA-149 significantly inhibited the 3'UTR activity of IGFBP5 with a statistically significant difference（P<0.0001）. Transwell experiment showed that the T24-H155-miRNA149-mimics group had a lower invasive ability than the T24-H155-mimic-NC control group， and the difference was significant（P<0.0001）. While the invasive ability of the T24-H10495-miRNA-149-mimics group was significantly enhanced compared with that of the T24-H155-miRNA-149-mimics group（P<0.0001）. On the other hand， there was no significant change in the invasive ability of the T24-H10496-miRNA-149-mimics group compared with that of the T24-H155-miRNA-149-mimics group（P>0.05）. Conclusion This study demonstrates that miRNA-149 inhibits the invasion of bladder cancer through inhibiting its downstream gene IGFBP5， which provides a new target and theoretical basis for the molecular treatment of clinical bladder cancer metastasis.

[Key words] miRNA-149; Bladder cancer; IGFBP5; PDGFRA; Invasion

膀胱癌是世界范圍內(nèi)最常見的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤之一，具有較高的發(fā)病率和死亡率，給患者造成了極大威脅[1，2]。2017年估計(jì)有79 030例膀胱癌新發(fā)病例和16 870例膀胱癌死亡[3]。膀胱癌可分為兩類：非肌肉浸潤性膀胱癌和肌肉浸潤性膀胱癌。研究顯示，1/3的非肌肉浸潤性膀胱癌（NMIBC）患者可隨后進(jìn)展為肌肉浸潤性（MIBC）或轉(zhuǎn)移，并且約70%的患者進(jìn)行根治性膀胱切除術(shù)和淋巴結(jié)切除術(shù)后同樣發(fā)展為轉(zhuǎn)移性疾病，降低膀胱癌患者的預(yù)后水平[4-7]。因此，闡明膀胱癌轉(zhuǎn)移機(jī)制已成為改善膀胱癌患者預(yù)后的必然趨勢。

MicroRNA（miRNA）是真核生物內(nèi)源性的非編碼小單鏈RNA，長度約為19～24個(gè)核苷酸[8]。研究顯示miRNA通過降低mRNA的表達(dá)或者通過結(jié)合到目標(biāo)mRNA的3UTR位點(diǎn)來調(diào)節(jié)編碼蛋白的基因表達(dá)從而參與多種生命過程，包括細(xì)胞生長、增殖、分化和凋亡[9，10]。我們前期研究發(fā)現(xiàn)miRNA-149在膀胱癌中顯著降低，miRNA-149抑制膀胱癌細(xì)胞遷移和侵襲，且抑制其下游靶基因Insulin-like growth factor binding protein 5（IGFBP5）和platelet—derived growth factor receptor alpha（PDGFRA）蛋白的表達(dá)。本研究將在前期研究的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探究miRNA-149是否通過靶向IGFBP5和（或）PDGFRA抑制膀胱癌細(xì)胞的遷移和侵襲，為臨床膀胱癌的轉(zhuǎn)移防治提供了新的靶點(diǎn)和理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

人膀胱癌細(xì)胞株T24由本實(shí)驗(yàn)室保存，293T細(xì)胞株來源于中科院細(xì)胞庫。胎牛血清、DMEM/Ham's F-12（1：1 volume）培養(yǎng)基購于美國GIBCO公司，pMIR-REPORT Luciferase-IGFBP5 3UTR（Wt）（H10046）;pMIR-REPORT Luciferase-PDGFRA 3UTR（Wt）（H10047）;pLenti-CMV-MCS-3FLAG（H155）、pLenti-CMV-IGFBP5-3FLAG（H10495）、pLenti-CMV-PDGFRA-3FLAG（H10496）均購自上海和元生物技術(shù)有限公司;pRL-CMV（H321）購自美國Promega公司;lipofectamine 2000購自美國invitrogen公司;mimics NC、hsa-miRNA-149-5p mimics均購自上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司，Transwell和invision小室購自美國BD公司。

1.2 細(xì)胞株的培養(yǎng)、轉(zhuǎn)染和分組

實(shí)驗(yàn)用所有細(xì)胞株均使用含5%胎牛血清的DMEM/Hams F-12（1：1 volume）培養(yǎng)基，并置于37℃含體積分?jǐn)?shù)5%的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。將293T細(xì)胞按 70%的匯合度接種到96孔板，24 h后轉(zhuǎn)染螢光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒和 RNA，每個(gè)樣品設(shè)置6個(gè)復(fù)孔。并按照螢火蟲螢光素酶載體（Firefly）：海腎螢光素酶載體（Renilla）：轉(zhuǎn)染試劑=0.2 μg：0.004 μg：0.25 μL的比例，采用脂質(zhì)體LipofectamineTM 2000的說明書要求對(duì)細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。另一方面，使用慢病毒H155、H10495、H10496感染T24細(xì)胞，然后采用LipofectamineTM 2000 轉(zhuǎn)染試劑，將miRNA-149 mimic及其對(duì)照轉(zhuǎn)染至T24-H155，T24-H10495和T24-H10496細(xì)胞。

1.3 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)

將IGFBP5-3UTR（Wt）（H10046）;PDGFRA-3UTR（Wt）（H10047），雙熒光素酶報(bào)告載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)24 h。提前將儀器開機(jī)并預(yù)熱，此后步驟盡量冰上操作。將細(xì)胞移至室溫，棄掉培養(yǎng)基，用PBS洗滌細(xì)胞1次。加入Lysis Buffer（1x PLB）100 μL，在室溫輕緩晃動(dòng)培養(yǎng)板15 min，把裂解液轉(zhuǎn)移到檢測試管中。瞬間離心，吸取上清 20 μL加入檢測板。加入20 μL底物。測量 luciferase（firefly）。加入stop buffer與nenal底物混合物（50∶1）50 μL。立即再次測量，檢測結(jié)束后，進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

1.4 Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)

將轉(zhuǎn)染24 h后的膀胱癌T24細(xì)胞進(jìn)行消化，用無血清的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并取400 μL重懸液分別至普通小室和帶基質(zhì)膠的小室中，細(xì)胞數(shù)為104個(gè)，在下室中加入700 μL的完全培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)24 h后，將小室取出，放入新的24孔中，小室上下同時(shí)用3.7%的甲醛固定2 min，PBS洗2次，再用100%甲醇通透20 min，PBS洗2次后，用吉姆薩室溫避光染色15 min后，在顯微鏡下觀察細(xì)胞遷移和侵襲的數(shù)目，并拍照。

1.5 評(píng)價(jià)指標(biāo)

經(jīng)慢病毒轉(zhuǎn)染48 h后，采用熒光定量PCR檢測miRNA-149是否過表達(dá)水平，采用WB檢測PDGFRA和IGFBP5蛋白水平是否過表達(dá)。觀察Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)中，在顯微鏡下觀察細(xì)胞遷移和侵襲的數(shù)目，檢測PDGFRA和IGFBP5過表達(dá)后是否逆轉(zhuǎn)miRNA-149過表達(dá)抑制膀胱癌侵襲的作用。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用 SPSS18.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，利用t檢驗(yàn)方法檢測兩組之間的差異，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 miRNA-149對(duì)PDGFRA和IGFBP5的3UTR的影響

本研究使用TargetScan在線軟件預(yù)測miRNA-149的靶基因，發(fā)現(xiàn)PDGFRA和IGFBP5的3UTR區(qū)域分別包含一個(gè)保守的miRNA-149的靶位點(diǎn)，如封三圖1A、封三圖1B所示。接著通過雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)檢測 miRNA-149是否影響PDGFRA和IGFBP5的3UTR活性。結(jié)果顯示miRNA-149可抑制PDGFRA 和IGFBP5 3UTR活性，下調(diào)比例分別為 38.83%和30.51%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.0001）。

2.2 IGFBP5對(duì)miRNA-149抑制膀胱癌細(xì)胞侵襲的影響

為進(jìn)一步探究PDGFRA和IGFBP5對(duì)miRNA-149誘導(dǎo)的膀胱癌細(xì)胞侵襲抑制的影響，本研究單獨(dú)或聯(lián)合使用miRNA-149mimic和IGFBP5過表達(dá)載體轉(zhuǎn)染T24細(xì)胞。轉(zhuǎn)染后，T24-H155-miRNA-149-mimic組較 T24-H155-mimics-NC組侵襲能力降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）;而T24-H10495-miRNA-149-mimic組較T24-H155-miRNA-149-mimic組侵襲能力明顯增強(qiáng)（P<0.01）。IGFBP5過表達(dá)載體對(duì)miRNA-149抑制膀胱癌細(xì)胞侵襲產(chǎn)生逆轉(zhuǎn)作用。

2.3 PDGFRA對(duì)miRNA-149抑制膀胱癌細(xì)胞侵襲的影響

另一方面，本研究同樣單獨(dú)或聯(lián)合使用miRNA-149mimic和PDGFRA過表達(dá)載體轉(zhuǎn)染T24細(xì)胞。同樣的，轉(zhuǎn)染后，T24-H155-miRNA-149-mimic組較 T24-H155-mimics-NC組侵襲能力降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）;然而T24-H10496-miRNA-149-mimic組較T24-H155-miRNA-149-mimic組侵襲能力未發(fā)生明顯變化（P>0.05）。PDGFRA過表達(dá)載體對(duì)miRNA-149抑制膀胱癌細(xì)胞侵襲未產(chǎn)生逆轉(zhuǎn)作用。

3 討論

越來越多的研究表明，miRNA作為致癌基因或抑癌基因在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用[11-13]。miRNA在多種惡性腫瘤中異常表達(dá)，包括膀胱癌[14]。大量的功能性研究已表明膀胱癌中多種miRNA具有潛在的新的預(yù)后價(jià)值[15，16]。本研究前期miRNA-149在膀胱癌中表達(dá)降低，過表達(dá)miRNA-149可顯著抑制膀胱癌細(xì)胞侵襲，且miRNA-149下調(diào)其潛在的靶基因PDGFRA和IGFBP5蛋白水平的表達(dá)。以往研究表明，miRNA-149在不同類型的腫瘤（包括結(jié)腸癌、骨髓性白血病、肝細(xì)胞癌和腎細(xì)胞癌）進(jìn)展中發(fā)揮不同的功能[17-20]。miRNA-149異位表達(dá)可通過靶向肌動(dòng)調(diào)節(jié)蛋白PPM1F抑制肝細(xì)胞癌的轉(zhuǎn)移;miRNA-149可通過直接靶向FOXM1從而顯著抑制結(jié)腸癌細(xì)胞的遷移和侵襲[21，22]。因此本研究在前期研究的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步明確miRNA-149是否通過靶向PDGFRA和IGFBP5抑制膀胱癌細(xì)胞侵襲。我們的結(jié)果表明miRNA-149可顯著抑制PDGFRA和IGFBP5的3UTR活性，miRNA-149可能靶向作用于IGFBP5和PDGFRA。

血小板源性生長因子受體A（PDGFRA），是一種細(xì)胞表面酪氨酸激酶受體。與其他許多受體酪氨酸激酶（RTKs）一樣，PDGFRA通過表達(dá)升高或由于突變和染色體重排導(dǎo)致的活性增加從而參與各種腫瘤的進(jìn)展，如白血病、胃腸道間質(zhì)瘤（GISTs）、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤和肝細(xì)胞癌等[23-25]。研究顯示，PDGFRA在炎性乳腺癌中過度表達(dá)且具有獨(dú)特的活性，可能是IBC治療的理想靶點(diǎn)[26]?；罨腜DGFRA通過激活A(yù)KT通路刺激纖維原細(xì)胞增殖，并誘導(dǎo)心肌成纖維細(xì)胞激活，可作為心肌纖維化治療的潛在靶點(diǎn)[27]。此外，PDGFRA參與間充質(zhì)細(xì)胞增殖和雄性特異性中腎細(xì)胞遷移[28]。本研究在前期發(fā)現(xiàn)miRNA-149降低PDGFRA蛋白表達(dá)的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探究miRNA-149是否通過靶向作用于PDGFRA抑制膀胱癌細(xì)胞侵襲。結(jié)果顯示miRNA-149抑制PDGFRA 3UTR的活性，然而PDGFRA過表達(dá)未能逆轉(zhuǎn)miRNA-149抑制膀胱癌細(xì)胞侵襲的作用。因此miRNA-149抑制膀胱癌細(xì)胞侵襲可能與PDGFRA沒有相關(guān)作用。

另一方面，胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白5（IGFBP5）是IGFBPs同源蛋白家族之一，且在人類腫瘤和轉(zhuǎn)移組織中異常表達(dá)[29]。研究表明IGFBP5在腫瘤發(fā)生和發(fā)展過程中具有多種生物學(xué)功能，調(diào)控細(xì)胞的存活、生長、遷移和侵襲[29]。IGFBP5通過IGF依賴和不依賴的機(jī)制調(diào)節(jié)細(xì)胞功能，可抑制各種組織或環(huán)境下的腫瘤生長和轉(zhuǎn)移，也可促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移從而作為致癌基因發(fā)揮作用[30]。其中，IGFBP5在腫瘤中表達(dá)升高，被認(rèn)為具有促進(jìn)轉(zhuǎn)移的能力;外源性IGFBP5表達(dá)已被證實(shí)對(duì)神經(jīng)酰胺誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡具有保護(hù)作用;且IGFBP5的過表達(dá)被發(fā)現(xiàn)與乳腺癌患者預(yù)后不良有關(guān)[31-33]。而最近發(fā)表的一項(xiàng)研究表明IGFBP5在尿路上皮癌進(jìn)展中發(fā)揮重要作用并且IGFBP5過表達(dá)與腫瘤晚期、頻繁有絲分裂和較差的臨床預(yù)后緊密相關(guān)[34]。此外，IGFBP5不同的結(jié)構(gòu)域?qū)θ祟惒煌[瘤的致瘤性和轉(zhuǎn)移產(chǎn)生不同的影響[35]。然而未見IGFBP5在膀胱癌轉(zhuǎn)移中的報(bào)道。本研究在前期工作的基礎(chǔ)上進(jìn)一步探討了miRNA-149是否通過靶向作用于IGFBP5抑制膀胱癌細(xì)胞的侵襲。結(jié)果顯示miRNA-149抑制IGFBP5 3UTR的活性，并且IGFBP5過表達(dá)明顯逆轉(zhuǎn)miRNA-149抑制膀胱癌細(xì)胞侵襲的作用。因此該結(jié)果表明miRNA-149通過靶向作用于IGFBP5抑制膀胱癌細(xì)胞侵襲，為臨床膀胱癌轉(zhuǎn)移防治提供了新的靶點(diǎn)和理論依據(jù)。

綜上所述，miRNA-149通過靶向IGFBP5基因抑制膀胱癌細(xì)胞侵襲，具有重要的臨床意義。然而miRNA-149是否在體內(nèi)同樣通過該調(diào)控機(jī)制抑制膀胱癌轉(zhuǎn)移尚需進(jìn)一步的探究。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Isabel Heidegger，Gennadi Tulchiner，Georg Schfer，et al. Long term disease free survival with multimodal therapy in small cell bladder cancer[J].European Journal of Medical Research，2016，21（1）：40.

[2] Gao L，Li SH，Tian YX，et al. Role of downregulated miR-133a-3p expression in bladder cancer：A bioinformatics study[J].Oncotargets & Therapy，2017，10（6）：3667-3683.

[3] Jemal A，Siegel R，Xu J，et al.Cancer statistics，2010[J].A Cancer Journal for Clinicians，2010，60（5）：277-300.

[4] Babjuk M，Oosterlinck W，Sylvester R，et al. EAU guidelines on non-muscle-invasive urothelial carcinoma of the bladder[J].Eur Urol，2011，59（6）：997-1008.

[5] Kaufman DS，Shipley WU， Feldman AS. Bladder cancer[J].Lancet，2009，374（9685）：239-249.

[6] Witjes JA，Compérat E，Cowan NC，et al.EAU guidelines on muscle-invasive and metastatic bladder cancer：Summary of the 2013 guidelines[J].European Urology，2014， 65（4）：778-792.

[7] Zeng S，Yu X，Ma C，et al. Transcriptome sequencing identifies ANLN as a promising prognostic biomarker in bladder urothelial carcinoma[J].Scientific Reports， 2017， 7（1）：3151.

[8] Bartel DP.MicroRNAs：Genomics，biogenesis，mechanism，and function[J].Cell， 2004，116（2）：281-297.

[9] Huang Y，Li X，Tao G，et al.Comparing serum microRNA levels of acute herpes zoster patients with those of postherpetic neuralgia patients[J].Medicine，2017，96（8）：e5997.

[10] Wang C，Liao H，Cao Z. Role of osterix and micrornas in bone formation and tooth development[J].Medical Science Monitor International Medical Journal of Experimental & Clinical Research，2016，22（8）：2934-2942.

[11] Wang W，Shen F，Wang C，et al.MiR-1-3p inhibits the proliferation and invasion of bladder cancer cells by suppressing CCL2 expression[J].Tumour Biology the Journal of the International Society for Oncodevelopmental Biology & Medicine， 2017，39（6）：383.

[12] Lu S，Wang MS，Chen PJ，et al.MiRNA-186 inhibits prostate cancer cell proliferation and tumor growth by targeting YY1 and CDK6[J].Experimental & Therapeutic Medicine，2017，13（6）：3309-3314.

[13] Yan L，Wang Y，Liang J，et al.Mir-301b promotes the proliferation，mobility and epithelial-to-mesenchymal transition of bladder cancer cells by targeting EGR1[J].Biochemistry & Cell Biology，2017，95（5）.571-577.

[14] Armstrong DA，Green BB，Seigne JD，et al.MicroRNA molecular profiling from matched tumor and bio-fluids in bladder cancer[J].Molecular Cancer，2015，14（14）：194.

[15] Jiang X，Du L，Wang L，et al.Serum microRNA expression signatures identified from genome-wide microRNA profiling serve as novel noninvasive biomarkers for diagnosis and recurrence of bladder cancer[J]. International Journal of Cancer，2015，136（4）：854-862.

[16] Jia AY，Castillo-Martin M，Bonal DM，et al.MicroRNA-126 inhibits invasion in bladder cancer via regulation of ADAM9[J].Br J Cancer，2014，110（12）： 2945-2954.

[17] Tian P，Yan，L. Inhibition of microRNA-149-5p induces apoptosis of acute myeloid leukemia cell line THP-1 by targeting Fas ligand（FASLG）[J].Medical Science Monitor International Medical Journal of Experimental & Clinical Research， 2016，22（11）： 5116-5123.

[18] Lin L，Zhang YD，Chen ZY，et al. The clinicopathological significance of miR-149 and PARP-2 in hepatocellular carcinoma and their roles in chemo/radiotherapy[J].Tumor Biology，2016，37（9）：1-8.

[19] Zhang G，Liu X，Li Y，et al. EphB3-targeted regulation of miR-149 in the migration and invasion of human colonic carcinoma HCT116 and SW620 cells[J].Cancer Science，2017，108（3）：408-418.

[20] Jin L，Li Y，Liu J， et al.Tumor suppressor miR-149-5p is associated with cellular migration，proliferation and apoptosis in renal cell carcinoma[J]. Molecular Medicine Reports，2016，13（6）：5386-5392.

[21] Luo G，Chao YL，Tang B，et al.miR-149 represses metastasis of hepatocellular carcinoma by targeting actin-regulatory proteins PPM1F[J].Oncotarget，2015，6（35）：37808-37823.

[22] Xu K，Liu X，Mao X，et al. icroRNA-149 Suppresses colorectal cancer cell migration and invasion by directly targeting forkhead box transcription factor FOXM1[J].Cellular Physiology & Biochemistry，2015，35（2）：499-515.

[23] Oseini AM，Roberts LR.PDGFRalpha：A new therapeutic target in the treatment of hepatocellular carcinoma？[J].Expert Opin Ther Targets，2009，13（4）： 443-454.

[24] stman A，Heldin C. H.PDGF receptors as targets in tumor treatment[J].Advances in Cancer Research，2007，97（97）：247-274.

[25] Ozawa T，Brennan CW，Wang L，et al.PDGFRA gene rearrangements are frequent genetic events in PDGFRA-amplified glioblastomas[J].Genes & Development，2010，24（19）：2205-2218.

[26] Joglekar-Javadekar M，Van Laere S，Bourne M，et al.Characterization and targeting of platelet-derived growth factor receptor alpha （PDGFRA） in inflammatory breast cancer （IBC）[J].Neoplasia， 2017，19（7）：564-573.

[27] Wang L，Yue Y，Yang X，et al.Platelet derived growth factor alpha （PDGFRα） induces the activation of cardiac fibroblasts by Activating c-Kit[J]. Medical Science Monitor International Medical Journal of Experimental & Clinical Research，2017，23（8）：3808-3816.

[28] Smith CA，McClive PJ，Hudson Q，et al.Male-specific cell migration into the developing gonad is a conserved process involving PDGF signalling[J]. Developmental Biology，2005，284（2）：337-350.

[29] GüllüG，Karabulut S，Akkiprik M.Functional roles and clinical values of insulin-like growth factor-binding protein-5 in different types of cancers[J]. Chin J Cancer，2012， 31（6）：266-280.

[30] Mohan S，BaylinkD.J.IGF-binding proteins are multifunctional and act via IGF-dependent and -independent me-chanisms[J].Journal of Endocrinology，2002，175（1）：19-31.

[31] Mita K，Zhang Z，Ando Y，et al.Prognostic significance of insulin-like growth factor binding protein（IGFBP）-4 and IGFBP-5 expression in breast cancer[J]. Japanese Journal of Clinical Oncology，2007，37（8）：575-582.

[32] Akkiprik M，Hu L，Sahin A，et al.The subcellular localization of IGFBP5 affects its cell growth and migration functions in breast cancer[J].BMC Cancer，2009，9（1）：103-105.

[33] van 't Veer LJ，Dai H，van de Vijver MJ，et al.Gene expression profiling predicts clinical outcome of breast cancer[J].Nature，2002，415（6871）：530-536.

[34] Liang PI，Wang YH，Wu TF，et al.IGFBP-5 overexpression as a poor prognostic factor in patients with urothelial carcinomas of upper urinary tracts and urinary bladder[J].Journal of Clinical Pathology，2013，66（7）：573-582.

[35] Luther GA，Lamplot J，Chen X，et al.IGFBP5 domains exert distinct inhibitory effects on the tumorigenicity and metastasis of human osteosarcoma[J]. Cancer Letters，2013， 336（1）：222-230.

（收稿日期：2018-08-03）