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色譜聯(lián)用質(zhì)譜結(jié)合主成分分析在食品鑒別中應(yīng)用

2018-02-25 17:49:42魏泉增肖付剛孫軍濤
許昌學(xué)院學(xué)報(bào) 2018年2期
關(guān)鍵詞:結(jié)果表明產(chǎn)地香氣

魏泉增,肖付剛,孫軍濤

(許昌學(xué)院 食品與生物工程學(xué)院,河南 許昌 461000)

現(xiàn)代食品成分鑒別大多采用色譜技術(shù)[1-3]和光譜技術(shù)[4,5],同時(shí)與人工嗅覺(jué)[6]、電子舌[7]、傳感器陣列[8]等技術(shù)聯(lián)用.色譜與質(zhì)譜技術(shù)聯(lián)用因其不需要人工解析圖譜中的單個(gè)化合物,只需通過(guò)數(shù)據(jù)比對(duì),所以成為常用的鑒定技術(shù)之一[9].但海量數(shù)據(jù)會(huì)給數(shù)據(jù)分析帶來(lái)困難.隨著計(jì)算機(jī)和統(tǒng)計(jì)分析技術(shù)的廣泛應(yīng)用,尤其是多變量統(tǒng)計(jì)分析的發(fā)展,使數(shù)據(jù)分析變得容易.結(jié)合化學(xué)計(jì)量方法,能提供樣品全部化合物的信息,實(shí)現(xiàn)食品樣品間差異的鑒別.

主成分分析(PCA)[7,10]、聚類(lèi)分析[1]、判別分析[7]和神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)[5,8,10]等多變量統(tǒng)計(jì)在分析食品差異鑒別中均有廣泛的應(yīng)用.例如,鑒定白酒等級(jí)[1,8,11-13]、不同區(qū)域濃香型白酒的標(biāo)記物[2]等.而PCA是由Peason提出,hotelling進(jìn)一步發(fā)展而成的方法.PCA將高維空間問(wèn)題轉(zhuǎn)化為低維空間問(wèn)題,使問(wèn)題變得簡(jiǎn)單直觀[14],且PCA分析軟件較多,例如,Xcalibur 2.0 software[15],PAST[16],Pirouette[17],Unscrambler v.9.7 (CAMO AS,Trondheim,Norway) software[18-21],Minitab[22],SPSS Statistics[23,24],SIMCA[25-27],Multivariate Statistical Package program (MVSP,Kovach Computing Service,Anglesey,Wales )[14],XLSTAT software[28],使得PCA的應(yīng)用更為廣泛.本文綜述了色譜聯(lián)用質(zhì)譜技術(shù)結(jié)合PCA在食品原料產(chǎn)地鑒別,品種鑒別,食品發(fā)酵過(guò)程中階段鑒定,分子雜交食品鑒定,食品摻假鑒定方面的應(yīng)用.

1 食品原料產(chǎn)地的鑒別

1.1 瓶裝水產(chǎn)地鑒別

食品原料產(chǎn)地鑒別對(duì)食品的加工與銷(xiāo)售影響重大.在某些食品銷(xiāo)售過(guò)程中,甚至把食品的產(chǎn)地作為一個(gè)賣(mài)點(diǎn).而食品原料產(chǎn)地如何分析鑒別,PCA是一個(gè)不錯(cuò)的選擇.引用水的水源地一直引人關(guān)注,Ikem[21]等人以三氯甲烷,一溴甲烷,一氯二溴甲烷,三溴甲烷為研究對(duì)象分析了不同水源地的瓶裝水和自來(lái)水,采用PCA分析,結(jié)果表明,不同來(lái)源地的自來(lái)水和不同品牌的瓶裝水區(qū)別很大,這為鑒別不同品牌瓶裝水和自來(lái)水水源地提供了依據(jù).

1.2 茶葉產(chǎn)地鑒別

茶葉產(chǎn)地的鑒別一般采用眼看、鼻問(wèn)、嘴嘗的方法,但這種方法的主觀因素較強(qiáng).Márquez等人采用同時(shí)蒸餾提取(SDE)-GC-MS聯(lián)用來(lái)分析18種不同產(chǎn)地巴拉圭茶葉香味成分.GC-MS結(jié)果表明,巴拉圭茶葉中主要成分為辛醛、6-甲基-5-庚烯-2-酮、2,4-二烯醛、3,5-辛二烯酮、橙花醇,β-大馬酮、α-紫羅酮、β-紫羅酮等.通過(guò)PCA分析,非主要成分的非類(lèi)異戊二烯(norisoprenoid)被鑒定為巴拉圭茶葉不同產(chǎn)地潛在的標(biāo)記物,它的含量可以用來(lái)區(qū)分不同產(chǎn)地的巴拉圭茶葉[29].

1.3 蔬菜水果產(chǎn)地的鑒別

Chun等采用HS-SPME-GC-MS聯(lián)用結(jié)合PCA來(lái)分析中國(guó)和韓國(guó)的荊芥的香味成分[14],結(jié)果表明,薄荷酮,2-羥基-2-異丙烯基-5-甲基環(huán)己酮,長(zhǎng)葉薄荷酮,長(zhǎng)葉薄荷酮氧化物,schizonal 等5種物質(zhì)可以作為標(biāo)記物,以用于區(qū)分中國(guó)和韓國(guó)的荊芥.以同樣的方法分析不同產(chǎn)地的楊梅,也得到了理想的效果.Cheng等人采集寧海、慈溪、仙居、上虞的楊梅,固相微萃取(SPME)濃縮香氣成分,結(jié)合GC-MS和GC-O鑒定楊梅香氣中的揮發(fā)性物質(zhì)成分及香氣,PCA結(jié)果表明,不同產(chǎn)地的楊梅香氣成分差異明顯[18].采用PCA分析楊梅香氣香味物質(zhì)隨時(shí)間[19]變化的差異,可以尋找到表征楊梅新鮮度的物質(zhì).楊靜等采用GC-MS分析重慶江津,四川金陽(yáng),四川洪雅,四川漢源,貴州頂壇,云南昆明,山東沂蒙山的青花椒香氣成分68種,PCA結(jié)果表明,沂蒙山和頂壇的青花椒香氣成分差異明顯[30],這為花椒產(chǎn)地的快速鑒定提供科學(xué)數(shù)據(jù).Hong-Sheng Tan等人采用HS-SPME-GC-MS技術(shù)鑒定不同產(chǎn)地當(dāng)歸的成分,采用PCA分析,結(jié)果表明,樣品被成功分為不同的組,庚烷,正丁醛,3-甲基丁醛,蒎烯,羅勒烯是最重要的差異性揮發(fā)物,這些揮發(fā)物可以區(qū)別頂級(jí)道地藥材和非道地藥材,可以作為當(dāng)歸潛在的標(biāo)記物[31].

2 食品原料品種的鑒別

2.1 食用油品種鑒別

在食品加工生產(chǎn)過(guò)程中,同一種食品原料的不同品種,對(duì)食品的口感甚至質(zhì)量都會(huì)產(chǎn)生影響.因此,食品原料品種鑒定的重要性明顯,色譜聯(lián)用質(zhì)譜結(jié)合PCA也是很好的選擇.采用GC-MS和LC-MS分析了Nigella屬中15個(gè)種的黑種草籽油(中東一種經(jīng)濟(jì)價(jià)值很高的保健品)次級(jí)代謝產(chǎn)物和揮發(fā)性成分,PCA分析不同品種黑種草籽油成分,結(jié)果表明,山柰酚-3-氧-β-D-吡喃葡萄糖-(1→2)-β-D-半乳糖-(1→2)β-D-吡喃葡萄糖可以作為潛在的分類(lèi)標(biāo)記.利用這個(gè)標(biāo)記物,把Nigella sativa 草籽油從Nigella屬中其他種的草籽油鑒別出來(lái)[25].采用氣相色譜分析不同品種花生中脂肪酸含量的差異,采用PCA分析,結(jié)果表明,正常含油量的花生,中等含油量花生,高含量的脂肪酸相對(duì)含量差異明顯,這為鑒定不同品種的花生油提供了依據(jù)[32].

2.2 榴蓮品種鑒別

Chin等人采用HS-SPME-GC-MS分析同一果園中3個(gè)品種成熟榴蓮的香味(主要來(lái)自于硫化物),PCA分析結(jié)果表明,2-甲基丁酸甲酯,丙基己酸酯,甲基辛酸酯,3-甲基-3-乙基丁酸甲酯,1-甲硫基丙烷在這3種品種中的含量有較大差異[22],以此鑒別出不同品種的榴蓮.采用N-甲基-N-(三甲基硅烷)三氟乙酰胺(MSTFA)衍生出不同品種椰棗的代謝產(chǎn)物,GC-MS分析衍生物,PCA分析結(jié)果表明,Khalas這個(gè)品種的椰棗與其他品種的椰棗成分差異明顯,蔗糖含量明顯高于其他品種的椰棗,但其他品種的椰棗中的果糖和葡萄含量偏高[26],這對(duì)鑒定Khalas椰棗提供了依據(jù).

2.3 茶葉品種鑒別

采用LCMS分析了綠茶,白茶和紅茶的成分差異,采用PCA分析表明,不同發(fā)酵程度的茶葉成分差異明顯,這為區(qū)分不同發(fā)酵程度的茶葉提供了借鑒[33].

2.4 面粉品種鑒別

面粉的來(lái)源廣泛,采用N-三甲硅基咪唑衍生糖類(lèi)化合物,GC-MS鑒定衍生物,采用PCA統(tǒng)計(jì)分析,分析7種品種的冬小麥,3個(gè)種佩斯?fàn)柼匦←湥?個(gè)類(lèi)型的莧屬(amaranth)谷物,9種品種的蕎麥面粉中單糖和雙糖的成分差異,結(jié)果表明,根據(jù)糖含量的不同,可以鑒定不同來(lái)源的面粉[16].

3 發(fā)酵食品發(fā)酵階段的鑒定

風(fēng)味物質(zhì)含量變化對(duì)發(fā)酵產(chǎn)品質(zhì)量影響很大,采用PCA分析不僅能分析不同發(fā)酵階段樣品中風(fēng)味物質(zhì)含量的差異,而且還可以推斷發(fā)酵終點(diǎn),這對(duì)發(fā)酵工業(yè)意義重大.

3.1 豆鼓發(fā)酵階段鑒定

豆鼓是一種傳統(tǒng)的發(fā)酵食品,它的生產(chǎn)階段主要依靠工人經(jīng)驗(yàn)的判斷,但是判斷結(jié)果往往受主觀因素的影響.采用GC-MS結(jié)合PCA分析豆鼓發(fā)酵過(guò)程中的香氣成分,結(jié)果表明,3-甲基丁醇、2-甲基丁酸乙酯、己酸乙酯、4-甲基吡嗪和2-甲基-丙酸乙酯在豆豉發(fā)酵過(guò)程中,其含量隨著發(fā)酵進(jìn)行逐漸增加,在發(fā)酵到15 d時(shí),風(fēng)味物質(zhì)含量達(dá)到最大[34].以此作為豆鼓發(fā)酵終點(diǎn)比人工經(jīng)驗(yàn)更可靠.

3.2 辣椒醬發(fā)酵階段鑒定

辣椒醬深受人們喜愛(ài),發(fā)酵的辣椒醬更有味道.為了得到更好的辣椒醬,發(fā)酵過(guò)程需不斷改變發(fā)酵條件,因此發(fā)酵階段的判斷尤為重要.采用GC-MS結(jié)合PCA分析辣椒發(fā)酵過(guò)程中22種主要的揮發(fā)性風(fēng)味物質(zhì)[35],結(jié)果表明,發(fā)酵第8天與第16天的風(fēng)味物質(zhì)變化不大,發(fā)酵第24天與發(fā)酵第32天的辣椒中的風(fēng)味物質(zhì)較其他階段的風(fēng)味物質(zhì)差異明顯.

3.3 清曲醬發(fā)酵階段鑒定

清曲醬是韓國(guó)傳統(tǒng)的大豆發(fā)酵食品,因其獨(dú)特的口感和香味,深受人們的喜愛(ài).Min Kyung Park 等人研究了清曲醬發(fā)酵過(guò)程中香味成分的變化,采用PCA分析,結(jié)果表明,不同發(fā)酵階段的香氣成分差異明顯.同時(shí),闡明了香氣成分與發(fā)酵時(shí)間的關(guān)系,大多數(shù)氨基酸在發(fā)酵早期含量下降,但在發(fā)酵末期含量又上升;而脂肪酸的含量在整個(gè)發(fā)酵階段一直增加,大多數(shù)有機(jī)酸的含量在一直下降,而氨基酸的含量在不同發(fā)酵時(shí)期差異明顯.這為過(guò)程質(zhì)量控制及發(fā)酵終點(diǎn)的判斷提供了依據(jù)[36].

3.4 香醋發(fā)酵階段的鑒定

采用HS-SPME-GC-MS比較分析摩德納(意大利北部城市)香醋(包括企業(yè)生產(chǎn)的香醋以及被宗教認(rèn)可的香醋)和傳統(tǒng)摩德納香醋(具有較高經(jīng)濟(jì)價(jià)值)成熟階段和老熟階段的香氣成分,PCA分析不同階段的香醋香氣成分含量的差異,發(fā)現(xiàn)3-甲基-1-丁醇和乙酸-3-甲基-1-丁酯可以區(qū)分成熟階段香醋和老熟階段香醋[23].

3.5 大豆醬發(fā)酵階段的鑒定

采用GC-MS結(jié)合PCA可以分析中國(guó)傳統(tǒng)食品大豆醬發(fā)酵過(guò)程中香氣成分的變化.香氣成分組成保持不變,但是香氣成分的含量在緩慢增加,是發(fā)酵早期階段;糠醛和3-甲硫基-丙醛的含量快速增加,濃郁醬香和焦香味形成,是發(fā)酵中期階段;異戊酸的積累改變了香味的風(fēng)格,發(fā)酵的后期階段,這個(gè)階段最終影響大豆醬的風(fēng)味[37].

4 分子雜交食品的鑒定

隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,從分子水平改造生物或通過(guò)雜交手段改造生物,以期獲得更好的品種.但人們對(duì)轉(zhuǎn)基因食品還是有些擔(dān)憂(yōu).生物是否經(jīng)過(guò)改造PCR是主要的檢測(cè)手段,但是當(dāng)特異性好的引物不易得到時(shí),采用色譜聯(lián)用質(zhì)譜結(jié)合PCA也是一種不錯(cuò)的檢測(cè)方法.

4.1 分子改造油桃的鑒定

采用HS-SPME-GC-MS分析了50個(gè)品種桃子和油桃的揮發(fā)性香氣成分[38],其中wutao是在分子水平種系優(yōu)化培養(yǎng)的桃子,其他49種桃子是中國(guó)本地野生、培育、外國(guó)引進(jìn)及中外雜交的桃子和油桃,采用PCA分析這些桃子和油桃的香味成分,結(jié)果表明,分子水平改造的wutao桃子的香味成分與其他49個(gè)品種桃子的香味有明顯區(qū)別.

4.2 雜交豬的鑒定

采用固相微萃取氣質(zhì)聯(lián)用分析了定遠(yuǎn)黑豬肉、皖南花豬肉、安慶六白豬肉(傳統(tǒng)地方豬肉樣品)、瘦肉型豬肉(引進(jìn)雜交品種)的香氣組成,瘦肉型豬肉香氣比較單一,而中國(guó)傳統(tǒng)豬肉樣品香氣豐富濃郁.以不同品種豬肉的香氣值為數(shù)據(jù)集,采用PCA分析,結(jié)果表明,瘦肉型豬肉香氣與中國(guó)傳統(tǒng)地方豬肉有著明顯差異[39].

4.3 雜交葡萄的鑒定

不同產(chǎn)地的釀酒葡萄以及雜交葡萄中花青素種類(lèi)和含量具有差異性,F(xiàn)raige等[15]分析了11種類(lèi)型的葡萄,包括10不同產(chǎn)地的釀酒葡萄和1種雜交葡萄,采用串聯(lián)四級(jí)桿鑒定了20種花青素,采用PCA分析來(lái)評(píng)估不同葡萄的差異,結(jié)果表明,雜交葡萄明顯不同于釀酒葡萄,利用花青素糖苷可以把雜交葡萄從釀酒葡萄中鑒別出來(lái).

5 食品鑒定

食品鑒定主要應(yīng)用在食品等級(jí)鑒定,食品參假鑒定等,PCA分析在這些方面也有廣泛的應(yīng)用.Cheng等[40]利用HS-SPME-MS技術(shù)結(jié)合PCA實(shí)現(xiàn)了八種不同白酒的產(chǎn)地鑒別,同時(shí)也實(shí)現(xiàn)了濃香型白酒的等級(jí)鑒別[41].GC-MS結(jié)合PCA分析綿羊,山羊和牛奶奶源的奶酪中蛋白質(zhì)水解成分的差異,成功找到以蛋白水解物作為標(biāo)記,可以用來(lái)區(qū)分不同來(lái)源的奶酪[42].液質(zhì)聯(lián)用分析官方認(rèn)可的兩種中國(guó)菊科草藥旋復(fù)花(Flos Inula)的根(I.britannica and Inula japonic)及相似品(Inula hupehensis,冒充土木香的根)的成分,定性和定量分析了15種化學(xué)成分.但采用PCA分析,不但能區(qū)分兩種官方認(rèn)可的土木香根,而且還可以區(qū)分土木香根與相似品之間的差異[43],這種差異可以應(yīng)用到食品摻假鑒定中.

6 展望

隨著色譜技術(shù)質(zhì)譜聯(lián)用的發(fā)展,海量的數(shù)據(jù)集采用PCA分析,使得多維數(shù)據(jù)得到降維,從而提取到更多有價(jià)值的信息.通過(guò)上述文獻(xiàn)的整理,總結(jié)出了PCA分析方法在食品鑒證、轉(zhuǎn)基因食品鑒別、不同發(fā)酵階段和食品原料的品種差異方面都能很好加以應(yīng)用.由于PCA是一種無(wú)監(jiān)督聚類(lèi)分析,不需要數(shù)據(jù)背景,所以在食品差異鑒別中的應(yīng)用前景非常廣闊.

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