(瀘州市食品藥品檢驗所,四川 瀘州 646000)
真菌在生長過程中會產(chǎn)生一定的毒素,其種類多樣、危害性強,對農(nóng)作物造成嚴(yán)重的污染,危害人體健康,具體有致癌作用、導(dǎo)致人的畸形、內(nèi)臟損傷、造成生殖系統(tǒng)紊亂、抑制免疫機制,并且具有導(dǎo)致遺傳性傷害。因此食品中真菌毒素的檢測具有重要價值,是保證人們飲食健康的基礎(chǔ)。
黃曲霉毒素是黃曲霉與寄生曲霉在生長過程中產(chǎn)生的毒素,不同紫外線強度下產(chǎn)生的黃曲霉毒素也會有一定的不同,其中AFB1的毒性與致癌性最強,是多種癌癥的主要誘因。對這一類毒性與污染情況各國都有自身的限量標(biāo)準(zhǔn),通過實地普查,我國的長江與江南地帶的污染情況較嚴(yán)重,因此需要加強重視[1]。
赭曲霉毒素由青霉菌與曲霉菌生長過程中產(chǎn)生的毒素,包含了A、B、C、D共4種,其中A類赭曲霉毒素的毒性最強,對于腎臟的傷害最大,并且對于神經(jīng)系統(tǒng)、肝臟均有一定損害。且赭曲霉毒素對胎兒的損害極大,會造成胎兒發(fā)育畸形和流產(chǎn),且赭曲霉毒素在全球范圍內(nèi)的污染狀況較為嚴(yán)重,在我國的抽樣調(diào)查中也展現(xiàn)出令人擔(dān)憂的結(jié)果。
單端孢霉烯族毒素可能的來源較多,成分復(fù)雜,雪腐鐮刀菌、禾谷鐮刀菌、梨孢鐮刀菌、擬枝孢鐮刀菌等都會產(chǎn)生單端孢霉烯族毒素,其包含了200多種化合物,如T-2毒素、腐鐮刀菌烯醇等,會導(dǎo)致人類的食管癌、克山病與骨節(jié)過分增大問題。單端孢霉烯族毒素對于谷物的污染極為廣泛,且污染率極高,雖然污染程度低,但損害較大,我國小麥與玉米等作物的單端孢霉烯族毒素有明確的限定標(biāo)準(zhǔn),均為1 000 μg/kg。
玉米赤霉烯酮是禾谷鐮刀菌、三線鐮刀菌等在生長過程中產(chǎn)生的毒素,其毒性具有一定的潛伏性,對于人與其他動物而言,其作用類似雌性激素,雖然效力僅為雌激素的1/10,但對于生殖系統(tǒng)的發(fā)育危害極大;對于農(nóng)作物而言,玉米赤霉烯酮會對農(nóng)作物的產(chǎn)量帶來極大的不利影響,我國原本小麥、玉米等作物的玉米赤霉烯酮限定標(biāo)準(zhǔn)為1 000 μg/kg,但經(jīng)過各省糧食污染程度調(diào)查判斷之后,因其污染范圍廣、且其毒性較強,將小麥、玉米及其加工作物的玉米赤霉烯酮限量保準(zhǔn)定為60 μg/kg。
伏馬毒素是串珠鐮刀菌、輪狀鐮孢菌等真菌生長過程中產(chǎn)生的毒素,其主要分類有B1與B2兩種。伏馬毒素會對神經(jīng)造成一定影響,損害馬腦蛋白;也會對人的腎臟產(chǎn)生損害,引發(fā)臟器病變,且有一定的致癌性。伏馬菌素的污染主要影響玉米作物。目前,國際上只有部分組織與國家對伏馬菌素的含量標(biāo)準(zhǔn)作出了限定,我國尚未對于伏馬毒素提出明確的限定標(biāo)準(zhǔn)。
生物鑒定法是傳統(tǒng)的真菌毒素鑒定方法,對真菌毒素只做定性的分析,缺乏具體含量的判斷,因此對于樣本的純度要求不高,且靈敏性不足,現(xiàn)在一般作為化學(xué)分析法的輔助方法。
作為常規(guī)的鑒定分析方法,化學(xué)分析法利用薄層層析技術(shù),在20世紀(jì)被許多國家廣泛運用,可準(zhǔn)確鑒定一些會發(fā)生熒光的毒素。近年來,這一分析方法已經(jīng)被淘汰,多利用更加高效的手段進行真菌毒素檢測。
儀器的分析主要分為2種。①氣相色譜法,主要對熱穩(wěn)定性差、易揮發(fā)的真菌樣本進行分析鑒定,分子中一般缺少發(fā)光基因與熒光基因,可避免對最終色譜造成干擾。氣相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用分析,對于黃曲霉毒素、單端孢霉烯族毒素等真菌毒素的測定結(jié)果均較為準(zhǔn)確[2]。②在氣相色譜分析方法基礎(chǔ)上發(fā)展而來的液相色譜,其效率更高,檢測結(jié)果較為權(quán)威,對于多種真菌毒素的鑒定結(jié)果均具有準(zhǔn)確性。質(zhì)譜配合液相色譜分析法聯(lián)用,可提高檢測分析的效率與準(zhǔn)確性。色譜與質(zhì)譜聯(lián)用是目前常用的檢測方法,極大地提高了檢測的效率。
免疫分析法是近年來發(fā)展較快的一項技術(shù),其主要原理是抗體抗原的特異性反應(yīng),其操作簡單、靈敏度高,可快速得到分析結(jié)果,對于真菌毒素做出準(zhǔn)確的定量與定性的檢測分析,并且可以實現(xiàn)較大批量的真菌毒素鑒定操作,提高了檢測效率。目前出現(xiàn)的免疫分析法有放射免疫分析法、酶聯(lián)免疫分析法、熒光免疫分析法,以及利用微型芯片技術(shù)發(fā)展而來的免疫芯片技術(shù)等[3]。
除了以上的檢測分析方法之外,技術(shù)的發(fā)展還帶來了新的分析技術(shù),如分子印跡技術(shù)和生物芯片分析法等技術(shù)。
分子印跡技術(shù)可以制備可以和真菌毒素的特異性相結(jié)合的分子印跡聚合物,并且可以運用于固相萃取柱中代替免疫親和柱,通過高效的分子印跡技術(shù)可以有效追蹤真菌毒素的存在軌跡,準(zhǔn)確性得到了極大地提高,有較好的發(fā)展前景。目前已經(jīng)制備了一定的分子印跡聚合物,可以用于赭曲霉素A-MIP、玉米赤霉烯酮-MIP、黃曲霉素-MIP的追蹤。
生物芯片分析法是信息技術(shù)與生物醫(yī)藥技術(shù)相結(jié)合的產(chǎn)物,是生命科學(xué)領(lǐng)域的一項高新技術(shù)產(chǎn)物,可實現(xiàn)大批量、高通量的檢測特性,并且可以實現(xiàn)多種真菌毒素的平行檢測。目前生物芯片技術(shù)已經(jīng)開始用于實際運用。
我國政府對居民的生活水平與幸福感極其重視,食品安全問題在居民生活中占據(jù)了極為重要的地位,直接與人們的身體健康和生命安全相關(guān)。而真菌毒素對于食品安全的危害極大,不但會影響當(dāng)代人的生命安全,并且可以對下一代的發(fā)展也會造成深遠(yuǎn)的影響。因此技術(shù)人員十分重視真菌毒素的檢測分析,一方面要提高對于食品中真菌毒素含量的檢測準(zhǔn)確度,降低食品中的毒素含量。另一方面需要不斷降低檢測難度,提高普及性,將更加高效準(zhǔn)確的真菌毒素檢測方法普及到基層組織,幫助國家食品安全體系的完善與發(fā)展。