張孝清

摘要：選取4日齡無特定病原雞分析雞馬立克氏病毒感染對雞腦部神經(jīng)系統(tǒng)損傷的影響，根據(jù)不同毒力特征（814、rMS、WC1203、Ms5、BS）MDV-1毒株感染，對不同接毒時間（接毒后1、3、5、7、10、14、21、28 d）動態(tài)檢測病毒載量變化情況進行有效記錄，對不同毒株感染后雞腦部組織病理學檢查結(jié)果進行分析。結(jié)果表明，不同毒力MDV-1毒株在無特定病原雞腦部存在不同的復(fù)制規(guī)律，其中強毒自身的復(fù)制能力明顯高于弱毒，而特超強病毒株早期復(fù)制速度最快;感染早期，強毒對無特定病原雞腦組織神經(jīng)系統(tǒng)損傷程度更高，與弱毒相比存在明顯差異;感染21 d，強毒所造成的腦部損傷明顯更強。說明不同毒株對無特定病原雞所產(chǎn)生的腦神經(jīng)系統(tǒng)損傷程度不同，毒株毒性越強損傷越重。

關(guān)鍵詞：雞馬立克氏病;病毒感染;神經(jīng)系統(tǒng)

中圖分類號：S858.31? ? ? ? 文獻標識碼：A? ? ? ? 文章編號：1007-273X（2018）11-0006-02

雞馬立克氏病屬于雞常見疾病，主要由雞馬立克氏病毒血清1型（MDV-1）引發(fā)，可對神經(jīng)系統(tǒng)造成嚴重損傷，也會導(dǎo)致免疫抑制，屬于接觸性傳染性疾病，對雞飼養(yǎng)造成明顯影響[1，2]。神經(jīng)系統(tǒng)癥狀在馬立克氏病毒感染的雞群中不僅發(fā)病早，同時雞只淘汰率較高。為進一步掌握雞馬立克氏病毒感染情況，試驗對不同毒力MDV-1感染對神經(jīng)系統(tǒng)損傷程度進行詳細分析，并研究其結(jié)果，現(xiàn)做詳細報道。

1? 材料與方法

1.1? 材料

雞：無特定病原雞，購自國內(nèi)某獸醫(yī)研究所實驗中心;病毒株：MDV-1毒株，購自世界生物資源中心（ATCC），由本實驗室進行保存。

試劑、儀器：分子生物水、DNA提取試劑盒、PBS。

FQ-PCR引物：①檢測基因為MDV-1特異基因Meq;②內(nèi)參基因為雞的管家基因Ovo。

1.2? 方法

取180羽無特定病原4日齡雞，隨機分組，每組30羽，采用負壓隔離器對其進行飼養(yǎng)。6組雞分別采用腹腔接種方法，以1 000 PFU/羽劑量將814、rMS、WC1203、Ms5、BS病毒株注射給6組試驗雞，病毒接種后，對其不同時間段腦部情況進行分析。

1.3? 組織病理檢查

對上述不同組別雞腦部組織進行收集，然后進行病理切片檢查。采用10%福爾馬林對神經(jīng)組織進行有效固定，固定24 h后采用乙醇進行脫水處理，并采用二甲苯、無水乙醇的混合液石蠟包埋。制備石蠟切片，做好染色處理，觀察病理變化。

1.4? 觀察指標

對不同毒力MDV-1毒株在無特定病原雞腦部復(fù)制規(guī)律進行分析和對比，分析不同毒力對無特定病原雞腦組織神經(jīng)系統(tǒng)損傷程度，做好詳細記錄。

1.5? 統(tǒng)計數(shù)據(jù)分析

試驗結(jié)果用Spss20.0軟件分析，結(jié)果用（x±s）表示，用t檢驗，P<0.05差異有統(tǒng)計學意義。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 病毒復(fù)制規(guī)律分析

雙重熒光定量檢測方法證實，在不同時段下，不同毒力MDV-1毒株在無特定病原雞腦部，存在不同的復(fù)制規(guī)律;強毒復(fù)制能力明顯高于弱毒（P<0.05），而特超強病毒株早期復(fù)制速度最快。觀察結(jié)果表明，①感染后5 d，可在BS株感染的雞腦組織中發(fā)現(xiàn)病毒，感染7 d后均能檢測出病毒，說明BS株增殖能力最強，與毒力等級呈正比關(guān)系;②感染10 d至最后，強毒載量一直高于弱毒（P<0.05），說明感染中晚期，毒力與病毒復(fù)制能力呈正相關(guān);③感染10 d及21 d兩個節(jié)點上，無論是強毒，還是弱毒，均出現(xiàn)2個復(fù)制高峰期。強毒感染17 d時，病毒載量呈現(xiàn)最低表現(xiàn)，弱毒感染14 d時最低，說明兩種毒性在試驗雞腦部潛伏期不同。④接種病毒10 d后，不同弱毒株與其他三種強毒株在病毒載量上已經(jīng)不存在明顯差異性（P>0.05），說明感染中后期強毒之間的復(fù)制能力變化與毒力無明顯關(guān)聯(lián)（圖1）。

2.2? 腦神經(jīng)組織病理學變化

感染早期，強毒對無特定病原雞腦組織神經(jīng)系統(tǒng)損傷程度更高，與弱毒相比存在明顯差異（P<0.05）。研究結(jié)果證實，感染5 d時，雖然能夠在BS株感染后的腦組織中檢測出馬立克氏病毒，但是病理切片顯示，感染5 d后，無論是強毒還是弱毒，受到感染的腦組織切片均會發(fā)生一定病理改變。強毒感染后，試驗雞腦組織多為局部膠質(zhì)細胞浸潤，弱毒感染后，試驗雞腦組織膠質(zhì)細胞浸潤比較有限，說明強毒對腦組織損傷程度更加嚴重。感染21 d，強毒所造成的腦部損傷明顯更強，但是弱毒載量出現(xiàn)第2個高峰值，2種毒力對試驗雞腦部病理損傷程度有明顯的差別。

3? 小結(jié)與討論

研究發(fā)現(xiàn)，雞馬立克氏病毒感染毒力不斷強化，我國雞馬立克氏病毒感染毒力變化情況與世界公認狀況基本相符[3]。通過多年觀察發(fā)現(xiàn)，我國雞馬立克氏病新分離出來的病毒株，在致病特征上出現(xiàn)一定改變，其中BS是我國分離出來的病毒株，毒力比較高，超過一般強毒及超強毒。

結(jié)合MDV-1致病性，可將感染分為4種病原型，即溫和型（mMDV）、強毒型（vMDV）、超強毒型（vvMDV）和特超強毒型（vv+MDV）。不同毒力毒株感染后，雞產(chǎn)生的致病特征也不盡相同[4]。

很多研究文獻認為[5，6]，雞馬立克氏病毒血清1型的毒力越強，在病毒感染前期，其在雞體內(nèi)復(fù)制速度越快，同時也會顯著增加病毒載量。通過研究復(fù)制動力學，基本上證實了這個規(guī)律，即致病性與病毒復(fù)制能力呈正相關(guān)。

本研究結(jié)果顯示，不同毒力 MDV-1 毒株在無特定病原雞腦部，存在不同的復(fù)制規(guī)律，其中強毒自身的復(fù)制能力明顯高于弱毒，而特超強病毒株早期復(fù)制速度最快;感染早期，強毒對無特定病原雞腦組織神經(jīng)系統(tǒng)損傷程度更高，與弱毒相比存在明顯差異;感染21 d，強毒所造成的腦部損傷明顯更強。不同毒株對無特定病原雞所產(chǎn)生的腦神經(jīng)系統(tǒng)損傷程度不同，毒株毒性越強損傷越重。

參考文獻：

[1] 陳洋宙.雞馬立克氏病病毒Meq蛋白特異性單克隆抗體研制及其初步應(yīng)用[D].揚州：揚州大學，2018.

[2] 付? 麗，王海秋.雞馬立克氏病的診斷及綜合防治分析[J].吉林畜牧獸醫(yī)，2017，38（11）：42.

[3] 朱? 婷.雞馬立克氏病病毒分離株AH1410的致病性與基因序列分析[D].江蘇揚州：揚州大學，2018.

[4] 周忠文，蘇? 帥，崔? 寧，等.整合REVLTR的自然重組馬立克氏病毒GX0101的全基因組序列分析[J].中國獸藥雜志，2017，51（10）：1-10.

[5] 王夢云，周宏達，韋美甜，等.馬立克氏病毒UL36蛋白的表達及其去泛素化酶活性分析[J].畜牧與獸醫(yī)，2017，49（5）：77-82.

[6] 王守文.內(nèi)臟型雞馬立克氏病繼發(fā)大腸桿菌病例報告[J].山東畜牧獸醫(yī)，2017，38（3）：78-79.