浙江省5例輸入性瘧疾誤診病例的病原學(xué)診斷分析

姚立農(nóng)，張玲玲，阮衛(wèi)，等

摘要：目的：瘧疾是全球重要的公共衛(wèi)生問(wèn)題之一，每年可引起2億多人的感染病例和60～80萬(wàn)人的死亡病例。卵形瘧原蟲(chóng)是瘧疾的致病蟲(chóng)種之一，主要分布在西非和太平洋西部的某些島嶼，其致病和臨床癥狀與間日瘧相似，且同樣存在可引起復(fù)發(fā)肝期裂殖子。在形態(tài)學(xué)上，間日瘧原蟲(chóng)和卵形瘧原蟲(chóng)也較為相近，僅依靠顯微鏡檢查對(duì)兩者進(jìn)行區(qū)分仍存在一定的困難，常常導(dǎo)致錯(cuò)判或誤診。本文結(jié)合顯微鏡檢查、瘧疾快速診斷試紙條（RDT）和巢式PCR檢測(cè)方法，對(duì)浙江省2011—2012年發(fā)現(xiàn)的5例輸入性瘧疾誤診病例進(jìn)行病原學(xué)診斷和鑒定。方法：收集浙江省5例前期誤診為輸入性間日瘧患者的流行病學(xué)資料和血樣。應(yīng)用抗凝血樣制作厚、薄血涂片，自然干燥、甲醇固定、吉姆薩染色后進(jìn)行顯微鏡形態(tài)學(xué)檢查；應(yīng)用RDT檢測(cè)試劑對(duì)血樣進(jìn)行瘧原蟲(chóng)抗原檢測(cè)；應(yīng)用巢氏PCR方法（采用瘧原蟲(chóng)屬特異性引物和4種種特異性引物）進(jìn)行瘧原蟲(chóng)基因檢測(cè)。對(duì)陽(yáng)性PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，將測(cè)序序列與GenBank中已有的序列進(jìn)行Blast比對(duì)分析，并將測(cè)序序列提交至GenBank中。結(jié)果：5例患者均為自非洲的歸國(guó)人員，其中3例歸國(guó)前有瘧疾發(fā)病史，臨床上主要表現(xiàn)為頭痛、咳嗽、發(fā)冷和發(fā)熱等癥狀，偶有腹瀉，初步診斷結(jié)果均為間日瘧感染。本文鏡檢復(fù)核結(jié)果顯示，4份血樣為卵形瘧原蟲(chóng)感染1份（病例1）為卵形瘧原蟲(chóng)和間日瘧原蟲(chóng)混合感染。鏡下可見(jiàn)瘧原蟲(chóng)環(huán)狀體、滋養(yǎng)體、未成熟裂殖體、成熟裂殖體和配子體。被寄生的紅細(xì)胞大小正?；蚵阅[脹，部分被感染的紅細(xì)胞邊緣呈現(xiàn)傘矢狀，有的可見(jiàn)斑點(diǎn)粗大的薛氏小點(diǎn)。環(huán)狀體核較大，胞質(zhì)粗厚，且存在一個(gè)紅細(xì)胞內(nèi)多個(gè)環(huán)狀體以及環(huán)狀體和配子體重復(fù)感染的現(xiàn)象。大滋養(yǎng)體胞質(zhì)堅(jiān)實(shí)，空泡不顯著，呈圓形，瘧色素棕黃色。未成熟的裂殖體胞漿呈圓形或卵圓形，無(wú)空泡，可見(jiàn)棕黃色的瘧色素散在分布。成熟裂殖體可見(jiàn)聚集成團(tuán)的棕黃色瘧色素，裂殖子數(shù)約為10個(gè)。雄配子體核質(zhì)疏松，位于中央，胞質(zhì)呈淺藍(lán)色，棕黃色瘧色素散在分布。RDT檢測(cè)結(jié)果顯示，5份血樣均為瘧原蟲(chóng)陰性。巢氏PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，5份血樣的全血DNA均擴(kuò)增出卵形瘧原蟲(chóng)特異性條帶（約800 bp），其中1份血樣（病例1）同時(shí)還擴(kuò)增出間日瘧原蟲(chóng)特異性條帶（約120 bp）。測(cè)序序列經(jīng)Blast比對(duì)，5份血樣的擴(kuò)增片段序列與Genbank中卵形瘧原蟲(chóng)SSU RNA部分序列（登錄號(hào)分別為AB182489.1、AF145337.1、AB182490.1、AB182489.1和AF145337.1）的同源性均為99%，其中1份血樣（病例1）的另一擴(kuò)增片段序列與間日瘧原蟲(chóng)SV5 18S rRNA部分序列（登錄號(hào)為JQ627157.1）的同源性為99%。將5例卵形瘧原蟲(chóng)特異性基因序列提交至GenBank中，登錄號(hào)分別為KC633223、KC633225-KC63228。結(jié)論：結(jié)合顯微鏡檢查、RDT和巢式PCR檢測(cè)結(jié)果，5例輸入性瘧疾病例中4例為卵形瘧原蟲(chóng)感染，1例為卵形瘧原蟲(chóng)和間日瘧原蟲(chóng)混合感染。本文檢測(cè)結(jié)果提示：在瘧原蟲(chóng)蟲(chóng)種鑒定中，顯微鏡檢查雖作為瘧原蟲(chóng)診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但僅依靠顯微鏡形態(tài)學(xué)檢查在某些蟲(chóng)種鑒定時(shí)仍存在一定的局限，尤其在間日瘧原蟲(chóng)和卵形瘧原蟲(chóng)以及混合感染蟲(chóng)種的鑒定中；RDT檢測(cè)方法因操作簡(jiǎn)便、快速等優(yōu)點(diǎn)而備受推崇，但其在檢測(cè)卵形瘧原蟲(chóng)時(shí)常存在一定的假陰性結(jié)果，因此在感染瘧原蟲(chóng)蟲(chóng)種較難判定時(shí)，需進(jìn)一步結(jié)合巢式PCR檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行確診。

來(lái)源出版物：中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志, 2013, 31(3):221-223

入選年份：2015