譚愷

摘要 為探明鐵皮石斛超微飲片與傳統(tǒng)飲片對(duì)微生物生長的影響，明確中藥超微飲片的優(yōu)越性，選用生長受鐵皮石斛影響明顯的2種微生物，通過液體培養(yǎng)比濁法研究了鐵皮石斛超微飲片與傳統(tǒng)飲片的作用效果。結(jié)果表明，鐵皮石斛超微飲片和傳統(tǒng)飲片對(duì)釀酒酵母的生長都有促進(jìn)作用，且超微飲片的效果優(yōu)于傳統(tǒng)飲片，其中0.08～0.12 g/mL鐵皮石斛超微飲片對(duì)釀酒酵母生長的促進(jìn)效果與傳統(tǒng)飲片相比差異達(dá)顯著或極顯著水平。鐵皮石斛超微飲片和傳統(tǒng)飲片對(duì)大腸桿菌的生長都有抑制作用，并且超微飲片的效果強(qiáng)于傳統(tǒng)飲片，其中0.04～0.08 g/mL鐵皮石斛超微飲片對(duì)大腸桿菌生長的抑制效果與傳統(tǒng)飲片相比差異達(dá)顯著或極顯著水平，0.10 g/mL鐵皮石斛超微飲片對(duì)大腸桿菌生長的抑制效果與傳統(tǒng)飲片相比沒有顯著性差異?？梢?，超微飲片的有效物質(zhì)浸出率高于傳統(tǒng)飲片，超微技術(shù)有利于中藥成分的溶出。

關(guān)鍵詞 鐵皮石斛；超微中藥；抑菌作用；促菌作用；微生態(tài)

中圖分類號(hào) R285.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-5739（2018）01-0235-02

鐵皮石斛（Dendrobium officinale）為多年生草本植物，是一種名貴的中藥材 [1-3]，有“除痹下氣，補(bǔ)五臟虛勞贏瘦，強(qiáng)陰，久服厚腸胃輕身延年”的功效[4]。研究表明，鐵皮石斛對(duì)假絲酵母（Candida albicans）、釀酒酵母（Saccharomyces cere-visiae）、德巴利酵母（Debaryomyces hansenii）的生長具有明顯的促進(jìn)作用，對(duì)保加利亞乳桿菌（Lactobacillus delbrueckii）和枯草芽胞桿菌（Bacillus subtilis）等有益細(xì)菌的生長也具有明顯的促進(jìn)作用，能夠抑制大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和沙門氏菌等致病菌的生長，但是對(duì)綠膿桿菌、嗜熱鏈球菌、產(chǎn)氣桿菌、地衣芽胞桿菌的生長沒有明顯的影響[1]。

傳統(tǒng)中藥飲片工序簡(jiǎn)單，臨床使用顯示了極強(qiáng)的生命力，但傳統(tǒng)中藥飲片服用前需臨時(shí)煎煮，使用和攜帶不方便，藥物有效成分煎出率低，藥材利用率低[1-2]。超微中藥采用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)與傳統(tǒng)的中藥炮制技術(shù)相結(jié)合，將傳統(tǒng)飲片加工成一種粒徑為微米級(jí)的新型中藥飲片，服用方便[5]。與傳統(tǒng)飲片相比，超微技術(shù)能更好地促進(jìn)中藥材中有效成分的溶出[1，6]。中藥飲片經(jīng)超微處理后，粒度更細(xì)、勻，藥材成分與溶劑的接觸面積增大，進(jìn)入人體的超微飲片是大部分破壁后的全細(xì)胞成分[7]，因而超微飲片的療效較傳統(tǒng)飲片要高[8]?，F(xiàn)選用鐵皮石斛作用明顯的釀酒酵母和大腸桿菌，研究超微飲片與傳統(tǒng)飲片的作用效果，以探討超微飲片對(duì)中藥藥效的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 菌株。研究證明鐵皮石斛對(duì)大腸桿菌的生長具有明顯的抑制作用，對(duì)酵母菌的生長有明顯的促進(jìn)作用[1]。本研究選取大腸桿菌和釀酒酵母作為供試菌株，菌株由湖南中醫(yī)藥大學(xué)提供，制成菌懸液[1]，待用。

1.1.2 藥物。鐵皮石斛超微粉和常規(guī)細(xì)粉[1]，由湖南龍石山鐵皮石斛基地有限公司提供。

1.1.3 培養(yǎng)基[9]。YPD液體培養(yǎng)基，用于培養(yǎng)釀酒酵母[1-2]。牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基，用于培養(yǎng)大腸桿菌。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 藥液制備。分別稱取適量的鐵皮石斛超微粉和常規(guī)細(xì)粉加入到對(duì)應(yīng)菌種的培養(yǎng)基中，拌勻[1]，達(dá)到所需的濃度，根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)[1]的結(jié)果，使用0.04、0.06、0.08、0.10 g/mL等藥物濃度研究對(duì)大腸桿菌生長的抑制作用，使用0.06、0.08、0.10、0.12 g/mL等藥物濃度研究對(duì)釀酒酵母生長的促進(jìn)作用，高壓蒸汽滅菌后，冷卻，待用。

1.2.2 超微鐵皮石斛對(duì)大腸桿菌生長的抑制作用。分別向已滅菌的2種鐵皮石斛飲片與液體培養(yǎng)基混合液中加入 0.1 mL對(duì)應(yīng)的供試大腸桿菌菌液（以加菌液的培養(yǎng)基混合液作為參比）[1]，于搖床中37 ℃、120 r/min振蕩培養(yǎng)24 h，取樣，測(cè)OD660。

1.2.3 超微鐵皮石斛對(duì)酵母菌生長的促進(jìn)作用。分別向已滅菌的2種鐵皮石斛飲片與液體培養(yǎng)基混合液中加入0.1 mL對(duì)應(yīng)的供試菌菌液（以未加菌液的混合液作為參比），于搖床中28 ℃、120 r/min振蕩培養(yǎng)48 h，取樣，測(cè)OD660。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

用SPSS 19.0軟件處理數(shù)據(jù)，各分組所得計(jì)量數(shù)據(jù)用平均值表示，用t檢驗(yàn)比較組間均值，P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[1-2]。

2 結(jié)果與分析

2.1 鐵皮石斛對(duì)大腸桿菌生長的抑制作用

由圖1可知，鐵皮石斛超微飲片和傳統(tǒng)飲片在試驗(yàn)濃度范圍內(nèi)對(duì)大腸桿菌的生長均有抑制作用，并且超微飲片的抑制效果強(qiáng)于傳統(tǒng)飲片。當(dāng)2種鐵皮石斛飲片的濃度為0.04～0.08 g/mL時(shí)，鐵皮石斛超微飲片對(duì)大腸桿菌生長的抑制效果與傳統(tǒng)飲片相比差異達(dá)顯著或極顯著水平（P<0.05或P<0.01），而0.10 g/mL鐵皮石斛超微飲片對(duì)大腸桿菌生長的抑制效果優(yōu)于鐵皮石斛傳統(tǒng)飲片，但二者相比沒有顯著性差異（P>0.05）。說明在一定濃度范圍內(nèi)，隨著鐵皮石斛濃度的增加，對(duì)大腸桿菌的抑制作用增強(qiáng)，但當(dāng)濃度達(dá)0.10 g/mL及以上時(shí)，其抑制效果最好。雖然超微飲片的有效成分浸出率比傳統(tǒng)飲片高，但差異不顯著。

2.2 鐵皮石斛對(duì)酵母菌生長的促進(jìn)作用

由圖2可知，鐵皮石斛超微飲片和傳統(tǒng)飲片在試驗(yàn)濃度范圍內(nèi)對(duì)釀酒酵母的生長均有促進(jìn)作用，且超微飲片的效果優(yōu)于傳統(tǒng)飲片。當(dāng)鐵皮石斛濃度為0.08～0.12 g/mL時(shí)，超微飲片對(duì)釀酒酵母生長的促進(jìn)效果與傳統(tǒng)飲片相比差異達(dá)顯著或極顯著水平（P<0.05或P<0.01），而0.06 g/mL鐵皮石斛超微飲片對(duì)釀酒酵母生長的促進(jìn)效果強(qiáng)于傳統(tǒng)飲片，但二者相比沒有顯著性差異（P>0.05）。這說明鐵皮石斛對(duì)釀酒酵母生長的促進(jìn)作用在一定濃度范圍內(nèi)隨著濃度的升高而增加，由于超微飲片有效成分的浸出率比傳統(tǒng)飲片大，鐵皮石斛濃度達(dá)0.08 g/mL時(shí)就表現(xiàn)出明顯的優(yōu)勢(shì)。endprint

3 結(jié)論與討論

大腸桿菌屬于腸道的正常菌群，鐵皮石斛能夠調(diào)整脾虛便秘小鼠腸道的大腸桿菌數(shù)[10]，鐵皮石斛多糖含量為45%左右[11]，大量研究證明，鐵皮石斛多糖對(duì)大腸桿菌有明顯的抑制作用[12]，鐵皮石斛多糖可能是鐵皮石斛抑制大腸桿菌的主要成分。并且，脾虛便秘造模破壞了腸道細(xì)菌多樣性，經(jīng)2種鐵皮石斛湯劑的治療，可以使腸道的微生態(tài)得到一定的調(diào)整，發(fā)現(xiàn)超微50%量湯劑效果優(yōu)于傳統(tǒng)湯劑[13]。體內(nèi)和體外試驗(yàn)均證明超微飲片的有效成分浸出率高于傳統(tǒng)飲片。

酵母菌是腸道常見的有益菌，腸道酵母菌的改變也直接關(guān)系著腸道微生態(tài)平衡，七味白術(shù)散通過促進(jìn)腸道酵母菌的繁殖，在治療菌群失調(diào)腹瀉中發(fā)揮著一定的作用[14]。鐵皮石斛能促進(jìn)腸道酵母菌數(shù)量的增加，調(diào)整脾虛便秘小鼠腸道微生態(tài)平衡，對(duì)脾虛便秘的治愈起到一定的效果，并且鐵皮石斛超微飲片對(duì)腸道酵母菌的促進(jìn)作用要強(qiáng)于傳統(tǒng)飲片[10]，說明鐵皮石斛中存在促進(jìn)酵母菌生長的有效成分，有關(guān)具體成分還有待進(jìn)一步研究。鐵皮石斛超微飲片對(duì)酵母菌生長的促進(jìn)作用優(yōu)于傳統(tǒng)飲片，進(jìn)一步證明中藥超微飲片有利于中藥有效成分的浸出，提高中藥利用度，節(jié)省中藥材。

4 參考文獻(xiàn)

[1] 彭買姣，肖新云，譚周進(jìn)，等.鐵皮石斛對(duì)微生物生長的影響研究[J].中國微生態(tài)學(xué)雜志，2015，27（6）：654-657.

[2] 吳海.超微七味白術(shù)散對(duì)腸道微生物分子多樣性的影響[D].長沙：湖南中醫(yī)藥大學(xué)，2012.

[3] 柳蓮芳.鐵皮石斛的最新研究進(jìn)展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（11）：6426-6428.

[4] 吳普，孫星衍.神農(nóng)本草經(jīng)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1982：21.

[5] 郝征紅，張炳文.中藥的超微細(xì)胞破壁粉碎技術(shù)[J].中國獸藥雜志，2003，37（6）：50-52.

[6] 鄒龍，桂卉，周春湘，等.雄黃超微粉體與常規(guī)粉體的體外溶出研究[J].世界中醫(yī)藥，2009，4（1）：53-54.

[7] 張素萍，胡能.超微粉碎技術(shù)在中藥生產(chǎn)中應(yīng)用探討[J].貴州化工，2008，33（3）：29-32.

[8] 李勇敏，蔡光先，彭淑珍，等.超微速溶小柴胡湯與傳統(tǒng)湯劑的藥理作用比較[J].中國中醫(yī)藥科技， 2007，14（5）：343-344.

[9] 趙斌，何紹江.微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)[M].北京：科學(xué)出版社，2002：251-261.

[10] 曹蓉，王歡，吳維佳，等.超微鐵皮石斛對(duì)脾虛便秘小鼠腸道微生物及酶活的影響[J].中國微生態(tài)學(xué)雜志，2014，26（9）：1011-1015.

[11] 屠國昌.鐵皮石斛的化學(xué)成分、藥理作用及臨床應(yīng)用[J].海峽藥學(xué)，2010，22（2）：70-71.

[12] 李蕾，丁長春，李付惠.兩種石斛多糖的抑菌作用研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，39（10）：5753-5754.

[13] 趙興兵，吳維佳，肖嫩群，等.超微鐵皮石斛對(duì)脾虛便秘小鼠腸道細(xì)菌分子多樣性的影響[J].應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報(bào)，2015，21（1）：170-174.

[14] GUO K X，LI W G，PENG Z F，et al.Intestinal Pichia burtonii associated with Qiweibaizhusan[J].International Journal of Pharmaceutical Science Invention，2013，2（9）：26-33.endprint