李堆淑,何念武,冀玉良
(商洛學(xué)院 生物醫(yī)藥與食品工程學(xué)院, 陜西 商洛 726000)
灰色鏈霉菌(Streptomycesgriseus):購于中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心;桔梗種子來自陜西省商洛市天士力有限公司。
牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基:牛肉膏5.0 g,蛋白胨10.0 g,NaCl 5.0 g,瓊脂18.0 g,水1 000 mL,pH 7.2~7.4。
高氏一號(hào)培養(yǎng)基:KNO31.0 g、FeSO4·7H2O 0.01 g、K2HPO40.5 g、淀粉20.0 g、MgSO4·7H2O 0.5 g、瓊脂18.0 g、NaCl 0.5 g、蒸餾水1 000 mL,pH 7.2~7.4。
馬鈴薯培養(yǎng)基(PDA):馬鈴薯300 g、葡萄糖20 g、瓊脂20 g、蒸餾水1 000 mL、自然pH。
種子培養(yǎng)基:可溶性淀粉20 g、酵母膏5 g、蛋白胨5 g、NaCl 5 g、K2HPO41 g、蒸餾水1 000 mL、pH 7.2。
發(fā)酵培養(yǎng)基:玉米粉20 g、黃豆餅粉15 g、CaCl20.2 g、MgSO40.2 g、NaCl 2.5 g、K2HPO42 g、檸檬酸鈉2 g、硫酸銨0.75 g(溶解后加入)、Na2HPO42 g、蒸餾水1 000 mL,pH 7.0。
1.3.1 發(fā)酵液的制備與濃度的配制 在活化的斜面灰色鏈霉菌菌種中加無菌水5 mL,刮下培養(yǎng)好的孢子,倒入裝有適量玻璃珠的錐形瓶內(nèi),震蕩15 min,打散孢子,制成一定濃度的孢子懸液,吸取1 mL菌懸液接種于三角瓶液體種子培養(yǎng)基中,于28℃,130 r·min-1的恒溫培養(yǎng)振蕩器中培養(yǎng)3 d后,按10%的接種量接于三角瓶(裝有玻璃球)發(fā)酵培養(yǎng)基中,于28℃,130 r·min-1的恒溫培養(yǎng)振蕩器中培養(yǎng)5~7 d。將灰色鏈霉菌發(fā)酵液的原液配制成不同濃度(稀釋為0,10,50,100,150倍,其中稀釋為100倍的發(fā)酵液的菌數(shù)為1×108cfu·mL-1),備用。
1.3.2 桔梗的培養(yǎng)與處理 選取大小均勻、無病蟲害的桔梗種子,用3%濃度的KMnO4浸泡消毒30 min,再用蒸餾水沖洗干凈后自然曬干,備用。將直徑9 cm的培養(yǎng)皿洗凈烘干并鋪上雙層濾紙,然后加入10 mL蒸餾水,將桔梗種子放入,每皿50粒,在25℃、濕度為85.5%的人工氣候箱中培養(yǎng),每天補(bǔ)加蒸餾水以保持濾紙濕潤。待桔梗幼苗生長至大約0.2 cm長度移栽至裝有沙質(zhì)土壤的小花盆中,每盆(直徑15 cm×高度15 cm)土量為2.5 kg,將不同濃度的灰色鏈霉菌發(fā)酵液200 mL分別與花盆中的土攪拌,無菌水作為對(duì)照(CK),土壤的持水量控制在45%左右(采用環(huán)刀法測定),每盆15株,共60盆,擺放在實(shí)驗(yàn)室樓頂?shù)钠脚_(tái)上培養(yǎng),生長至四葉期時(shí),分別于7、14、21、28、35 d取桔梗根際土壤(0~20 cm),檢測不同時(shí)間桔梗幼苗根際土壤酶活性變化,篩選最佳濃度的灰色鏈霉菌發(fā)酵液處理的桔梗根際土壤,測定土壤理化性質(zhì)和微生物數(shù)量。
1.3.3 土壤酶活性測定 參考關(guān)松蔭[16]的方法測定土壤酶活性,蔗糖酶活性測定用3,5-二硝基水楊酸比色法,以24 h后1 g干土生成葡萄糖毫克數(shù)表示。脲酶活性測定用苯酚鈉比色法,以24 h后1 g土壤中NH3-N的毫克數(shù)表示。過氧化氫酶活性用高錳酸鉀滴定法測定,以每克干土1 h內(nèi)消耗的0.1 mol·L-1KMnO4溶液體積數(shù)表示。纖維素酶活性測定用3,5-二硝基水楊酸比色法,以72 h后1 g干土生成葡萄糖毫克數(shù)表示。蛋白酶活性測定用茚三酮比色法,以24 h后1 g土壤中的氨基氮的毫克數(shù)表示。
1.3.4 土壤理化性質(zhì)測定 有機(jī)質(zhì)含量采用重鉻酸鉀容量法測定,全氮含量采用濃硫酸—硫酸銅—硫酸鉀—硒消解的凱氏定氮法測定,有效磷含量采用濃硫酸—高氯酸消解硫酸鉬銻抗比色法測定,速效鉀含量采用1.0 mol·L-1CH3COONH4浸提-火焰光度計(jì)法測定。
1.3.5 土壤微生物數(shù)量測定 采用稀釋平板計(jì)數(shù)法[17],以土壤懸濁液稀釋10-6接種于牛肉蛋蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基,24~48 h統(tǒng)計(jì)細(xì)菌數(shù)量,土壤懸濁液稀釋10-4接種于高氏一號(hào)瓊脂培養(yǎng)基,5~7 d統(tǒng)計(jì)放線菌數(shù)量,土壤懸濁液稀釋10-2接種于PDA瓊脂培養(yǎng)基,3~5 d統(tǒng)計(jì)真菌數(shù)量。
1.3.6 數(shù)據(jù)處理 采用Excel 2010和SPSS 17.0多重比較的Duncan進(jìn)行整理和分析數(shù)據(jù)。
2.1.1 灰色鏈霉菌發(fā)酵液對(duì)干旱脅迫的桔梗根際土壤蔗糖酶活性的影響 將不同濃度灰色鏈霉菌菌株發(fā)酵液加入干旱脅迫的桔梗幼苗根際土壤,不同時(shí)間內(nèi)測定桔梗土壤根際蔗糖酶活性。如表1所示,在桔梗育苗過程中,各組處理根際土壤蔗糖酶活性的變化動(dòng)態(tài)規(guī)律基本相似。隨著灰色鏈霉菌發(fā)酵液濃度稀釋倍數(shù)的增加,桔梗根際土壤蔗糖酶活性也在增加,發(fā)酵液濃度稀釋到100倍時(shí),在7~35 d桔梗根際土壤蔗糖酶活性均顯著高于對(duì)應(yīng)時(shí)間的其它處理,并且在第14天,原液濃度稀釋100倍時(shí),桔梗根際土壤蔗糖酶活性達(dá)到峰值,為0.798±0.040 mg·g-1,比CK、灰色鏈霉菌稀釋0,10,20,50,150倍的峰值分別高68%、12.55%、8.87%、7.98%、45.89%。用同種溶液濃度處理的桔梗根際土壤,在不同時(shí)間桔梗根際土壤蔗糖酶活性變化趨勢為先升高后降低。說明低濃度的灰色鏈霉菌菌株發(fā)酵液對(duì)桔梗根際土壤蔗糖酶活性有一定的促進(jìn)作用,還能緩解桔梗幼苗受干旱脅迫。因此,不同灰色鏈霉菌發(fā)酵液通過誘導(dǎo)桔梗根際土壤,可以提高灰色鏈霉菌菌株發(fā)酵液中的土壤肥力。
表1 灰色鏈霉菌發(fā)酵液對(duì)干旱脅迫的桔梗根際土壤蔗糖酶活性的影響
注:同列不同小寫字母表示顯著差異(P<0.05),下同。
Note: Different small letters within the same column mean significant difference(P<0.05), the same as below.
2.1.2 灰色鏈霉菌發(fā)酵液對(duì)干旱脅迫的桔梗根際土壤脲酶活性的影響 將不同濃度灰色鏈霉菌菌株發(fā)酵液加入干旱脅迫的桔梗幼苗根際土壤,不同時(shí)間內(nèi)測定桔梗土壤根際脲酶活性。如表2所示,在不同濃度灰色鏈霉菌發(fā)酵液處理?xiàng)l件下,各組處理在7~35 d內(nèi)桔梗根際土壤脲酶活性均有顯著影響。隨著灰色鏈霉菌發(fā)酵液稀釋倍數(shù)的增加,桔梗根際土壤脲酶活性不斷增加,灰色鏈霉菌發(fā)酵液稀釋到100倍時(shí),桔梗根際土壤脲酶活性均達(dá)到了峰值,隨之桔梗根際土壤脲酶活性有下降趨勢。但是用6種溶液處理的桔梗根際土壤脲酶活性隨著時(shí)間的延長均顯著增高(P<0.05)。處理第35天時(shí),用灰色鏈霉菌發(fā)酵液稀釋100倍處理的桔梗根際土壤脲酶活性的峰值最高(11.616±0.012 mg·g-1),比CK、灰色鏈霉菌發(fā)酵液稀釋0、10、20、50、150倍分別升高了12.63%、6.64%、5.48%、3.37%、7.70%。可見經(jīng)過灰色鏈霉菌發(fā)酵液處理的桔梗根際土壤肥力在7~35 d不斷地增強(qiáng),還能緩解桔梗幼苗受干旱脅迫。
2.1.3 灰色鏈霉菌發(fā)酵液對(duì)干旱脅迫的桔梗根際土壤過氧化氫酶活性的影響 將不同濃度灰色鏈霉菌菌株發(fā)酵液加入干旱脅迫的桔梗幼苗根際土壤,不同時(shí)間內(nèi)測定桔梗土壤根際過氧化氫酶活性。如表3所示,在不同濃度灰色鏈霉菌發(fā)酵液處理?xiàng)l件下,各組處理在7~35 d內(nèi)桔梗根際土壤過氧化氫酶活性均有顯著影響。各處理的桔梗根際土壤過氧化氫酶(CAT)的活性均顯著地高于CK,隨著各處理時(shí)間的延長桔梗根際土壤過氧化氫酶活性均先升高后下降。CK的過氧化氫酶活性在處理后的28 d達(dá)到峰值(4.537±0.002 mg·g-1),其它處理均是在處理后的第21天達(dá)到峰值,其中灰色鏈霉菌菌株發(fā)酵液稀釋100倍處理的桔梗根際土壤過氧化氫酶活性達(dá)到最大值(5.060±0.056 mg·g-1),分別比CK、灰色鏈霉菌發(fā)酵液稀釋0、10、50、150倍的峰值分別提高了11.53%、7.67%、4.63%、1.87%、6.53%。可見,用灰色鏈霉菌發(fā)酵液稀釋100倍能更有效地誘導(dǎo)一系列防御機(jī)制保護(hù)桔梗根際土壤免受氧化脅迫,但過量的過氧化氫則導(dǎo)致過氧化氫酶損失??梢姡疑溍咕l(fā)酵液能緩解桔梗幼苗受干旱脅迫。
表2 灰色鏈霉菌發(fā)酵液對(duì)干旱脅迫的桔梗根際土壤脲酶活性的影響
表3 灰色鏈霉菌發(fā)酵液對(duì)干旱脅迫的桔梗根際土壤過氧化氫酶活性的影響
2.1.4 灰色鏈霉菌發(fā)酵液對(duì)干旱脅迫的桔梗根際土壤纖維素酶活性的影響 將不同濃度灰色鏈霉菌菌株發(fā)酵液加入干旱脅迫的桔梗幼苗根際土壤,不同時(shí)間內(nèi)測定桔梗土壤根際纖維素酶活性。如表4所示,干旱脅迫的桔梗根際土壤纖維素酶活性較小,在不同濃度灰色鏈霉菌發(fā)酵液處理?xiàng)l件下,各組處理在7~35 d內(nèi)桔梗根際土壤纖維素酶活性變化較顯著(P<0.05)。各處理的桔梗根際土壤纖維素酶活性均顯著高于CK,施加灰色鏈霉菌發(fā)酵液能使桔梗根際土壤纖維素酶活性提前達(dá)到峰值。隨著桔梗的生長,不同濃度的灰色鏈霉菌發(fā)酵液處理的桔梗根際土壤纖維素酶活性均在處理后的第28天達(dá)到峰值,而CK在第35天達(dá)到峰值。從整體看,用灰色鏈霉菌發(fā)酵液稀釋100倍處理的桔梗根際土壤纖維素酶活性在7~35 d內(nèi)均高于其它處理的對(duì)應(yīng)時(shí)間的纖維素酶活性。用灰色鏈霉菌發(fā)酵液稀釋100倍處理的桔梗根際土壤纖維素酶活性峰值(0.897±0.021 mg·g-1),分別比CK、灰色鏈霉菌發(fā)酵液稀釋0、10、50、150倍的峰值分別提高了128.24%、85.71%、34.48%、22.37%、30.57%。土壤纖維素酶分解的纖維素越多,土壤肥力就越高,作物產(chǎn)量也越高,可見,灰色鏈霉菌發(fā)酵液能很好地促進(jìn)桔梗根際土壤分解纖維素。
2.1.5 灰色鏈霉菌發(fā)酵液對(duì)干旱脅迫的桔梗根際土壤蛋白酶活性的影響 將不同濃度灰色鏈霉菌菌株發(fā)酵液加入桔梗幼苗的根際土壤,不同時(shí)間內(nèi)測定桔梗土壤根際土壤蛋白酶活性。如表5所示,在不同濃度灰色鏈霉菌發(fā)酵液處理?xiàng)l件下,各組處理在7~35 d內(nèi)桔梗根際土壤蛋白酶活性變化顯著。用灰色鏈霉菌發(fā)酵液處理的桔梗根際土壤蛋白酶活性隨著桔梗生育期的延長呈先升高后降低的變化趨勢,但CK的桔梗根際土壤蛋白酶活性在7~35 d內(nèi)一直升高,并且在同一生育期桔梗根際土壤蛋白酶活性總是低于其它處理,土壤中蛋白酶活性反映了土壤中氮素營養(yǎng)的轉(zhuǎn)化狀況,說明CK處理的土壤中的氮素水平較低。用灰色鏈霉菌菌株發(fā)酵液稀釋100倍處理的桔梗根際土壤蛋白酶活性峰值(1.748±0.028 mg·g-1),分別比CK、灰色鏈霉菌菌株發(fā)酵液0、10、50、150倍的峰值分別提高了43.51%、33.33%、34.67%、27.50%、23.56%。從整體看,用灰色鏈霉菌菌株發(fā)酵液稀釋100倍處理的桔梗根際土壤蛋白酶活性,在不同生長時(shí)間均比對(duì)應(yīng)的其它處理的桔梗根際土壤蛋白酶活性顯著提高(P<0.05),說明了土壤肥力越高,土壤供應(yīng)養(yǎng)分的能力越強(qiáng),桔梗幼苗生長越好??梢?,灰色鏈霉菌發(fā)酵液可以緩解桔梗幼苗受干旱脅迫。
表4 灰色鏈霉菌發(fā)酵液對(duì)干旱脅迫的桔梗根際土壤纖維素酶活性的影響
表5 灰色鏈霉菌發(fā)酵液對(duì)干旱脅迫的桔梗根際土壤蛋白酶活性的影響
如表6可見,用稀釋100倍的灰色鏈霉菌發(fā)酵液處理干旱脅迫的桔梗幼苗根際土壤,在0~35 d內(nèi)桔梗根際土壤肥力因素的變化趨勢基本一致。隨著灰色鏈霉菌發(fā)酵液處理時(shí)間的延長,土壤有機(jī)質(zhì)、全氮、有效磷和速效鉀含量均不斷增加,在第35天時(shí),土壤有機(jī)質(zhì)、全氮、有效磷和速效鉀含量均達(dá)到最高值,分別比CK升高了280.13%、99.15%、60%和60.12%。
表6 灰色鏈霉菌發(fā)酵液(稀釋100倍)對(duì)干旱脅迫的桔梗根際土壤理化性質(zhì)的影響
如表7可見,用稀釋100倍的灰色鏈霉菌發(fā)酵液處理干旱脅迫的桔梗根際土壤,在0~35 d內(nèi)桔梗根際土壤微生物群落的數(shù)量細(xì)菌占優(yōu)勢。隨著處理時(shí)間的延長,細(xì)菌的數(shù)量一直增加,而放線菌和真菌的數(shù)量先升高后降低。在桔梗根際土壤處理的第35天時(shí)細(xì)菌數(shù)量最多比未處理土壤的細(xì)菌數(shù)量增加了355.43%,在桔梗根際土壤處理的第28天時(shí)放線菌和真菌數(shù)量均達(dá)到最高值,分別比未處理土壤的放線菌和真菌數(shù)量增加了253.70%和223.38%??梢?,用稀釋100倍的灰色鏈霉菌發(fā)酵液處理桔梗根際土壤,土壤中微生物群落在整個(gè)生長過程變化差異顯著(P<0.05),并且細(xì)菌數(shù)量的增長分別比放線菌和真菌快101.73個(gè)和132.05個(gè)百分點(diǎn)。
如表8可見,用稀釋100倍的灰色鏈霉菌發(fā)酵液處理干旱脅迫的桔梗根際土壤,在0~35 d內(nèi)桔梗根際土壤酶活性、土壤肥力、微生物之間存在一定的相關(guān)性。土壤酶活性與土壤酶活性之間的相關(guān)性表現(xiàn)為:蔗糖酶與過氧化氫酶正相關(guān)顯著(r=0.849,P<0.05),脲酶與纖維素酶正相關(guān)顯著(r=0.825,P<0.05),其它土壤酶之間相關(guān)但差異不顯著(P>0.05)。土壤酶活性與土壤肥力含量、微生物數(shù)量的相關(guān)性表現(xiàn)為:脲酶與有機(jī)質(zhì)、全氮、有效磷、速效鉀含量和細(xì)菌數(shù)量分別為正相關(guān)且極顯著(P<0.01);纖維素酶與有機(jī)質(zhì)、全氮含量和細(xì)菌數(shù)量分別為正相關(guān)且極顯著(P<0.01),而與有效磷、速效鉀含量和放線菌數(shù)量分別為正相關(guān)且顯著(P<0.05);蛋白質(zhì)酶與放線菌數(shù)量正相關(guān)且極顯著(P<0.01),而與有機(jī)質(zhì)、有效磷、速效鉀含量和細(xì)菌、真菌數(shù)量分別為正相關(guān)且顯著(P<0.05)。土壤肥力含量之間相關(guān)性表現(xiàn)為:有機(jī)質(zhì)含量與全氮、有效磷、速效鉀含量分別為正相關(guān)且極顯著(P<0.01),全氮含量與有效磷、速效鉀含量分別為正相關(guān)且極顯著(P<0.01),有效磷與速效鉀含量為正相關(guān)且極顯著(P<0.01)。土壤肥力含量與土壤微生物數(shù)量相關(guān)性表現(xiàn)為:細(xì)菌分別與有機(jī)質(zhì)、全氮、有效磷、速效鉀含量呈正相關(guān)且極顯著(P<0.01),而放線菌含量分別與有機(jī)質(zhì)、有效磷、速效鉀、細(xì)菌數(shù)量正相關(guān)且顯著(P<0.05),真菌數(shù)量與放線菌數(shù)量正相關(guān)且顯著(P<0.05)。
表7 灰色鏈霉菌發(fā)酵液(稀釋100倍)對(duì)干旱脅迫的桔梗根際土壤微生物的影響
表8 桔梗根際土壤酶活性、土壤理化性質(zhì)和土壤微生物的相關(guān)性
注:*表示P<0.05,**表示P<0.01。 Note: *P<0.05, **P<0.01.
土壤酶活性可以作為評(píng)價(jià)土壤肥力狀況的生物指標(biāo),蔗糖酶與土壤有機(jī)質(zhì)、氮、磷含量和微生物數(shù)量有關(guān)。本研究用不同濃度灰色鏈霉菌發(fā)酵液處理干旱脅迫的桔梗根際土壤,發(fā)現(xiàn)桔梗根際土壤的蔗糖酶、脲酶、過氧化氫酶、蛋白酶、纖維素酶活性比CK均顯著提高,尤其稀釋100倍的灰色鏈霉菌發(fā)酵液比其它濃度更為顯著(P<0.05)。由于土壤脲酶能促進(jìn)土壤中氮素循環(huán),提高土壤肥力。過氧化氫酶活性與土壤中H2O2含量密切相關(guān),H2O2可以殺死病原菌,還能誘導(dǎo)一系列防御酶系統(tǒng)。土壤纖維素酶有助于腐殖質(zhì)的形成,促進(jìn)纖維素分解利用,是自然界碳循環(huán)的重要環(huán)節(jié),最終提高土壤肥力,增加農(nóng)作物的產(chǎn)量。土壤蛋白酶也能促進(jìn)土壤中氮素循環(huán)。可見,灰色鏈霉菌發(fā)酵液隨著濃度的稀釋,土壤氮素、碳素的循環(huán)轉(zhuǎn)化速率不斷提高,腐殖質(zhì)形成和有機(jī)質(zhì)的轉(zhuǎn)化能力不斷增強(qiáng),直到灰色鏈霉菌發(fā)酵液稀釋到100倍,土壤氮素、碳素的循環(huán)轉(zhuǎn)化速率、腐殖質(zhì)形成和有機(jī)質(zhì)的轉(zhuǎn)化能力達(dá)到最高值,桔梗根際土壤的蔗糖酶、過氧化氫酶、蛋白酶和纖維素酶活性均是隨著灰色鏈霉菌發(fā)酵液處理時(shí)間的延長,此4種土壤酶活性均先升高后降低;而脲酶活性在0~35 d內(nèi)一直升高,并且此4種土壤酶活性均顯著高于CK?;疑溍咕l(fā)酵液使干旱脅迫的桔梗根際土壤微生物群落中細(xì)菌占優(yōu)勢,細(xì)菌的數(shù)量一直增加,而放線菌和真菌的數(shù)量先升高后降低??梢?,施加灰色鏈霉菌有利于干旱脅迫的桔梗幼苗根際土壤酶活性的提高,間接的促進(jìn)了土壤微生物的生長,增加了土壤中微生物群落的數(shù)量,能促進(jìn)土壤肥力提高,說明灰色鏈霉菌能緩解桔梗幼苗受干旱脅迫。此結(jié)果與高吉坤[18]研究枯草芽抱桿菌B29有利于提高土壤中蔗糖酶、脲酶、過氧化氫酶、酸性磷酸酶活性的結(jié)果基本一致。劉慧芬[19]發(fā)現(xiàn)刺槐根瘤固氮菌放氮有利于增加土壤微生物,能提高脫氫酶、過氧化氨酶、脲酶、轉(zhuǎn)化酶等土壤酶活性。
本研究發(fā)現(xiàn)桔梗根際土壤蔗糖酶與過氧化氫酶、脲酶與纖維素酶、蛋白酶呈顯著正相關(guān),可以促進(jìn)氮素循環(huán),說明桔梗根際土壤中這5種酶之間關(guān)系密切,它們共同影響著土壤肥力。土壤中微生物之間的關(guān)系為:細(xì)菌與放線菌、放線菌與真菌呈顯著正相關(guān),且細(xì)菌在微生物群落中占優(yōu)勢。這與何芳蘭[20]研究沙化高寒草甸土壤中細(xì)菌是土壤微生物的主要成分的結(jié)果基本一致。土壤肥力之間的關(guān)系為土壤有機(jī)質(zhì)與全氮、有效磷、速效鉀互相呈極顯著正相關(guān)。土壤酶活性與土壤肥力、微生物數(shù)量的關(guān)系為脲酶與有機(jī)質(zhì)、全氮、有效磷、速效鉀和細(xì)菌呈極顯著正相關(guān),纖維素酶與有機(jī)質(zhì)、全氮、有效磷、速效鉀、細(xì)菌和放線菌呈極顯著或顯著正相關(guān),蛋白酶與有效磷、速效鉀、細(xì)菌、放線菌和真菌呈極顯著或顯著正相關(guān),蔗糖酶和過氧化物酶與有機(jī)質(zhì)、全氮、有效磷、速效鉀和細(xì)菌呈負(fù)相關(guān)且不顯著,與放線菌和真菌正相關(guān)且不顯著。從土壤酶活性、土壤肥力、微生物數(shù)量之間的相關(guān)性可以看出,土壤酶活性影響著土壤肥力和微生物數(shù)量變化,土壤肥力同時(shí)影響著土壤酶活性和微生物數(shù)量變化,它們之間是相互影響、相互制約的。這與王笛等[21-22]研究結(jié)果基本一致。
[1] 張 承,龍友華,和桂秋,等.生長調(diào)節(jié)劑浸種對(duì)桔梗種子萌發(fā)及生長的影響[J].中藥材,2015,28(1):22-25.
[2] 黃世文,高成偉,王 玲,等.土壤中有益放線菌的高效分離,篩選和生物測定技術(shù)[J].植物保護(hù),2008,34(1):138-141.
[3] 許世俊,薛泉宏,邢勝利,等.3株放線菌對(duì)草莓的促生作用及對(duì)PPO活性的影響[J].西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2008,17(1):129-136.
[4] Janos Berdy. Bioactive microbial metabolites, a personal review[J]. J Antiblot, 2005,58(1):1-26.
[5] 姜 怡,徐 平,婁 愷,等.放線菌藥物資源開發(fā)面臨的問題與對(duì)策[J].微生物學(xué)通報(bào),2008,35(2):272-274.
[6] 倪 彬.巨桉人工林根系土壤微生物根系土壤酶活性與根系土壤養(yǎng)分研究[D].成都:四川農(nóng)業(yè)大學(xué),2007:9-10.
[7] 徐 鍇,趙德莫,袁繼存,等.地膜和秸稈覆蓋對(duì)梨園土壤酶活性的影響[J].中國南方果樹,2014,43(6):94-96.
[8] 陳 玨.水土保持林地根系分泌物及土壤酶活性研究[D].北京:北京林業(yè)大學(xué),2011:7-9.
[9] 李俊華,沈其榮,褚貴新,等.氨基酸有機(jī)肥對(duì)棉花根際和非根際土壤酶活性和養(yǎng)分有效性的影響[J].土壤,2011,43(2):277-284.
[10] 耿增超,劉莉麗,畢春俠.秦嶺南坡銳齒櫟林、松櫟混交林幾種土壤酶活性的初步研究[J].西北林學(xué)院學(xué)報(bào),1999,14(1):64-67.
[11] Kandeler E, Luxhi J, Tscherko J, et al. Xylanase, invertase and protease at the soil-litterinter face of a loamy sand[J]. Soil Biology and Biochemistry, 1999,31:1171-1179.
[12] 李 敏,吳鳳芝.不同填閑模式對(duì)黃瓜根際土壤酶活性及細(xì)菌群落的影響[J].應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào),2014,25(12):3556-3562.
[14] 司 鵬,邵 微,于會(huì)麗,等.甜櫻桃重茬土壤有效養(yǎng)分及酶活性的變化[J].干旱地區(qū)農(nóng)業(yè)研究,2017,35(4):39-44.
[15] 王麗紅,郭曉冬,譚雪蓮,等.不同輪作方式對(duì)馬鈴薯土壤酶活性及微生物數(shù)量的影響[J].干旱地區(qū)農(nóng)業(yè)研究,2016,34(5):109-113.
[16] 關(guān)松蔭.土壤酶及其研究方法[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,1987:1-304.
[17] 林先貴.土壤微生物研究原理與方法[M].北京:高等教育出版社,2010.
[18] 高吉坤.施加生防菌B29對(duì)黃瓜根際土壤微生物多樣性的影響[D].哈爾濱:黑龍江大學(xué),2013:29-32.
[19] 劉慧芬.刺槐根瘤固氮放氮對(duì)根際土壤微生物的影響[D].西安:西北大學(xué),2010:51-52.
[20] 何芳蘭,金紅喜,王鎖民,等.沙化對(duì)瑪曲高寒草甸土壤微生物數(shù)量及土壤酶活性的影響[J].生態(tài)學(xué)報(bào),2016,36(18):1-8.
[21] 王 笛,馬風(fēng)云,姚秀粉,等.黃河三角洲退化濕地土壤養(yǎng)分、微生物與土壤酶特性及其關(guān)系分析[J].中國水土保持科學(xué),2012,10(5):94-98.
[22] 許景偉,王衛(wèi)東,李 成.不同類型黑松混交林土壤微生物、酶及其與土壤養(yǎng)分關(guān)系的研究[J].北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2000,22(1):51-55.