金艷+姚俊娜+格小光+張志杰+李嬈嬈+馮學(xué)鋒+石金敏

[摘要] 基于藥材性狀和組織顯微鑒別方法，對(duì)芫花及其混淆品河朔蕘花的莖、葉進(jìn)行了對(duì)比研究；并對(duì)芫花根進(jìn)行了研究。結(jié)果表明芫花條藥材或飲片主要為莖枝，節(jié)處有明顯對(duì)生的葉柄痕和枝痕，一般未觀察到葉或花序梗，折斷面皮部有細(xì)密銀白色絮狀纖維。混淆品為帶有莖枝、葉和花序梗的段，花序?？梢?jiàn)呈穗狀花序的花梗痕。在顯微組織方面，芫花的莖橫切面韌皮部有單個(gè)散在的粗大的木化韌皮纖維，壁極厚；其葉下表皮附有單細(xì)胞非腺毛。河朔蕘花莖橫切面韌皮部未見(jiàn)粗大的木化韌皮纖維；葉表皮細(xì)胞外壁有厚角質(zhì)層，下表皮無(wú)非腺毛。此結(jié)果可用于芫花條藥材與飲片鑒別及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定。芫花根的組織和橫切面觀察可用于該品種根類(lèi)藥材的鑒別。

[關(guān)鍵詞] 芫花條； 芫花； 河朔蕘花； 芫花根； 性狀鑒別； 顯微鑒別

[Abstract] The purpose of this article is to identify Daphne genkwa and its adulterants， Wikstroemia chamaedaphne， according to the morphological and microstructure characteristics of their stem and foliage. The root of D.genkwa was studied simultaneously. The results indicated that the crude drug and processed pieces of Genkwa Ramulus were mainly composed of stems and branches where obvious opposite petiole scars and branch marks were able to be seen on their nodes. Otherwise， foliage or peduncles generally couldn′t be found. Moreover， the fine silver flocculent fibers could be observed in the bark of fracture surface. The adulterants were the plant segments which were composed of stems， foliage and peduncles with spikelet-pedicel scars. There existed microstructures differences between Genkwa Ramulus and its adulterants. In the former， single thick lignified phloem fibers were interspersed in the stem phloem of the transverse section with very thick wall and unicellular non-glandular hairs could be observed on the lower epidermis of foliage. Nevertheless， in the latter， there was no thick lignified phloem fibers in cross section of stem phloem， the outer wall of epidermal cells of foliage hadthick cuticles and no non-glandular hairs in lower epidermis of foliage. The results can be used for the identification and the quality standard of the crude drug and processed pieces of D.genkwa.The characteristics of the microstructures and the transverse section can be used to identify the radix D.genkwa.

[Key words] Genkwa Ramulus； Daphne genkwa； Wikstroemia chamaedaphne； Genkwa Radix（roots of Daphne genkwa）； morphological dentification； microscopical identification

芫花條為瑞香科瑞香屬植物芫花Daphne genkwa Sieb. et Zucc.的干燥枝條。本品為現(xiàn)代民間用藥，未見(jiàn)歷代本草收載?！败净l”一名最早見(jiàn)于《山東中草藥手冊(cè)》[1]，山東省中藥材標(biāo)準(zhǔn)（1995年版、2002年版）也有收載。本品有逐水，祛痰，解毒殺蟲(chóng)，散風(fēng)祛濕功效；用于水腫脹滿(mǎn)，痰飲積聚，風(fēng)濕痹痛，外治疥癬[2]。本品是《中國(guó)藥典》2015年版“消絡(luò)痛片”和“消絡(luò)痛膠囊”的君藥[3]，用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，有較好的療效。

芫花花蕾的藥用最早記載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，芫花根的藥用則記載于《吳普本草》，這2個(gè)藥至今仍用于中醫(yī)臨床。近些年芫花葉的藥用價(jià)值也有報(bào)道[4]。芫花枝條、根、葉的化學(xué)和藥理學(xué)研究表明，這些不同部位均含有黃酮類(lèi)，香豆素類(lèi)，木脂素類(lèi)、酚酸類(lèi)及二萜原酸酯類(lèi)成分；具有抗炎、鎮(zhèn)痛作用[4-9]。芫花根總黃酮對(duì)小鼠細(xì)胞免疫功能具有調(diào)節(jié)作用，并顯示抗腫瘤活性[10-11]。

作者在對(duì)芫花條藥材商品調(diào)查及草擬其藥材標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，收集樣品的過(guò)程發(fā)現(xiàn)了2批芫花條的混淆品，樣品呈飲片狀，為莖枝的小段，并帶有果序枝和葉，經(jīng)鑒定為瑞香科蕘花屬植物河朔蕘花Wikstroemia chamaedaphne Meisn.的枝條與葉。同時(shí)作者也注意到芫花條、芫花根藥材鑒別方面的工作較少，需要進(jìn)行詳盡的實(shí)驗(yàn)研究[12]。因此為了解決這些問(wèn)題，作者對(duì)芫花的枝條、根和葉及其混淆品的藥材性狀與顯微組織進(jìn)行了比較研究，試圖為芫花條、芫花根藥材的鑒別及其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定提供科學(xué)依據(jù)。endprint

1 材料

1.1 儀器

光學(xué)顯微鏡，型號(hào)OLYMPUS-BX51；顯微數(shù)碼攝影儀，型號(hào)OLYMPUS-D72，均購(gòu)自?shī)W林巴斯株氏會(huì)社。

1.2 試劑

冰醋酸，甘油，氫氧化鉀均為分析純（北京化工廠），水為娃哈哈純凈水。

1.3 藥材

實(shí)驗(yàn)用芫花條藥材或飲片樣品34份，經(jīng)中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所馮學(xué)鋒研究員鑒定均為芫花D.genkwa的枝條、根或葉。另有2份飲片樣品（樣品35，36），經(jīng)鑒定為瑞香科蕘花屬河朔蕘花W.chamaedaphne的枝條與葉。樣品存于中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所，樣品信息見(jiàn)表1。

2 方法

每份樣品選取藥材5～10個(gè)體，觀測(cè)藥材或飲片樣品的形狀、大小，顏色、質(zhì)地、斷面、氣味等性狀特征。通過(guò)光學(xué)顯微鏡觀察莖、根或葉的橫切面，葉表面、粉末制片或解離組織制片，對(duì)樣品的顯微組織特征進(jìn)行描述、測(cè)量，并用光學(xué)數(shù)碼顯微鏡攝影。

2.1 樣品橫切片制備

選取樣品的莖、根或葉軟化后，采用常規(guī)石蠟切片、徒手或滑走切片法制片。

2.2 樣品解離組織制片

采用藥典的氫氧化鉀法，將樣品切成寬或厚約2 mm的小條或片，置于試管中，加5%氫氧化鉀溶液適量，加熱至用玻璃棒擠壓能離散為止，傾去堿液，加水洗滌后，取出少量置載玻片上，用解剖針?biāo)洪_(kāi)，以稀甘油裝片。用于觀察、測(cè)量纖維、導(dǎo)管等組織特征。

2.3 樣品粉末制片

將樣品粉碎，過(guò)60目篩，粉末用甘油醋酸試液（冰醋酸-甘油-水1∶1∶1）封片。

3 結(jié)果

3.1 藥材、飲片性狀

3.1.1 芫花條（莖枝）藥材性狀 枝條呈長(zhǎng)圓柱形，粗細(xì)均勻，或略呈下粗上細(xì)，長(zhǎng)32～118 cm，直徑2～12 mm，上部嫩枝分枝較多。老枝表面無(wú)毛，棕色、紅褐色至深褐色，可見(jiàn)橢圓形皮孔，節(jié)處有明顯對(duì)生的葉柄痕和枝痕。嫩枝較細(xì)，直徑1 mm左右，綠色或深棕色，表面覆蓋1層黃色的絹狀毛。質(zhì)硬脆，不易折斷。折斷面不整齊，皮部有2 mm厚細(xì)密銀白色絮狀纖維，木部黃色。氣清香，味微辣（圖1A）。

3.1.2 芫花根藥材性狀 根呈長(zhǎng)圓柱形，主根直徑7～18 mm，表皮紅棕色至深褐色，有突起的環(huán)狀節(jié)， 節(jié)上多生有支根。質(zhì)硬脆，不易折斷。斷面不整齊，皮部纖維性強(qiáng)，折斷處呈長(zhǎng)絨毛狀；木部呈鮮黃色或黃色。氣微，味微辣（圖1B）。

3.1.3 芫花條（莖枝）飲片性狀 樣品為長(zhǎng)短不等的段，粗細(xì)不同，直徑1.5～9 mm。老枝周邊棕色至 深褐色，無(wú)毛，有細(xì)縱棱；幼枝周邊綠色或深棕色，可見(jiàn)黃色的絹狀毛。皮部與木部常分離。切面皮部纖維性強(qiáng)，有細(xì)密銀白色絮狀纖維。木部淺黃色，有同心性環(huán)紋。質(zhì)硬。氣清香，味微辣（圖1C）。

3.1.4 河朔蕘花莖枝飲片性狀 樣品為枝、葉和花序梗的段，綠棕色，段長(zhǎng)1～1.5 cm。枝粗細(xì)不等，直徑2～10 mm。枝周邊紅棕色至棕色，有細(xì)縱棱，有的可見(jiàn)枝痕。切面皮部黃白色，木部淺黃色，有同心性環(huán)紋。質(zhì)堅(jiān)硬?；ㄐ蚬；易厣?，直徑1～2 mm，可見(jiàn)呈穗狀花序的花梗痕。葉常切斷，葉片上面棕綠色，下面灰綠色，革質(zhì)。氣微，味淡（圖1D）。

3.2 顯微組織結(jié)構(gòu)

3.2.1 莖橫切面顯微組織結(jié)構(gòu) 芫花莖橫切面（直徑5 mm）：木栓層由6～25層扁平木栓細(xì)胞組成，細(xì)胞切向延長(zhǎng)。皮層狹窄，由2～4層切向延長(zhǎng)薄壁細(xì)胞組成。中柱鞘部位有纖維束斷續(xù)環(huán)列，纖維壁增厚。韌皮部寬廣，韌皮束在外側(cè)彎曲。韌皮部中有大量纖維束切向排列，纖維極長(zhǎng)，壁薄，非木化；另有單個(gè)散在的粗大的木化纖維，壁極厚，可見(jiàn)層紋。形成層明顯，成環(huán)。木質(zhì)部導(dǎo)管徑向或切向排列，直徑大的和小的導(dǎo)管相間排列，形成年輪。導(dǎo)管周?chē)心纠w維束。木射線由1～2列細(xì)胞組成。髓部薄壁細(xì)胞較小，類(lèi)圓形或橢圓形，有的細(xì)胞破裂成空洞（圖2A）。河朔蕘花莖橫切面（直徑4 mm）與芫花莖的不同處：木栓層由5～12層扁平木栓細(xì)胞組成。皮層狹窄，由4～6層切向延長(zhǎng)薄壁細(xì)胞組成。韌皮部沒(méi)有粗大的木化纖維。木射線由1列細(xì)胞組成。薄壁細(xì)胞內(nèi)充滿(mǎn)淀粉粒（圖2B）。

3.2.2 根橫切面顯微組織結(jié)構(gòu) 芫花根橫切面木栓層由13～25層扁平木栓細(xì)胞組成，細(xì)胞切向延長(zhǎng)。韌皮部寬廣。韌皮部中有大量纖維束切向排列，纖維極長(zhǎng)，壁薄，非木化；另有單個(gè)散在的粗大的木化纖維，壁極厚，可見(jiàn)層紋。形成層明顯，成環(huán)。木質(zhì)部導(dǎo)管切向或徑向排列，導(dǎo)管周?chē)心纠w維束。木射線為由1列細(xì)胞組成（圖3）。

3.2.3 葉橫切面顯微組織結(jié)構(gòu) 芫花葉橫切面：上表皮細(xì)胞較大，長(zhǎng)方形；下表皮細(xì)胞較小，可見(jiàn)氣孔和單細(xì)胞非腺毛。柵欄組織由2～3列細(xì)胞組成，不通過(guò)中脈。海綿組織細(xì)胞排列疏松。主脈處上表皮內(nèi)側(cè)有1～2層厚角組織，下表皮細(xì)胞內(nèi)側(cè)有1層厚角細(xì)胞或不明顯。維管束外韌型，韌皮部外側(cè)有纖維束層，韌皮部較窄，木質(zhì)部呈新月形（圖4A）。河朔蕘花葉橫切面與芫花葉不同處：上、下表皮細(xì)胞外壁有厚角質(zhì)層，下表皮細(xì)胞未見(jiàn)非腺毛。主脈處上、下表皮內(nèi)側(cè)有3～4層厚角組織。維管束外韌型，韌皮部外側(cè)有纖維束層，纖維壁厚，木化（圖4B）。

3.2.4 葉表面顯微組織結(jié)構(gòu) 芫花葉表面：上表皮細(xì)胞呈多邊形，細(xì)胞壁平直，氣孔極少見(jiàn)。下表皮細(xì)胞呈多邊形，細(xì)胞壁平直，可見(jiàn)較多氣孔及非腺毛。氣孔為不定式，周?chē)缎l(wèi)細(xì)胞4～6個(gè)。非腺毛為單細(xì)胞構(gòu)成，外壁有疣狀突起（圖5A，B）。河朔蕘花葉表面：上、下表皮細(xì)胞呈多邊形，細(xì)胞壁較平直或略彎曲，外壁可見(jiàn)角質(zhì)層點(diǎn)狀或塊狀突起。上表皮氣孔極少見(jiàn)；下表皮可見(jiàn)較多氣孔，未見(jiàn)非腺毛。氣孔為不定式，周?chē)缎l(wèi)細(xì)胞4～6個(gè)（圖5C，D）。

3.2.5 粉末顯微特征 芫花條（莖枝）粉末：棕黃色。韌皮纖維眾多，多碎斷，完整者極長(zhǎng)，末端圓或尖，有的有不規(guī)則突起，或分叉，直徑7～13 μm，纖維壁一般較薄，有的有增厚，非木化或微木化。木化韌皮纖維，長(zhǎng)梭形，長(zhǎng)550～1 300 μm，直徑18～50 μm，壁極厚，可見(jiàn)層紋，木化，胞腔狹窄，有時(shí)呈線狀。導(dǎo)管多見(jiàn)具緣紋孔導(dǎo)管，偶見(jiàn)螺紋導(dǎo)管及梯紋導(dǎo)管，直徑20～65 μm。木纖維主要為纖維管胞，長(zhǎng)梭形，長(zhǎng)73～350 μm，直徑10～20 μm，壁有斜向交錯(cuò)的紋理，可見(jiàn)具緣紋孔，紋孔口圓形。木栓細(xì)胞多邊形，棕黃色（圖6A）。河朔蕘花莖枝粉末：棕黃色。韌皮纖維多碎斷，完整者極長(zhǎng)，直徑5～21 μm，纖維壁一般較薄，有的有增厚，非木化或微木化。導(dǎo) 管多見(jiàn)具緣紋孔導(dǎo)管，直徑23～56 μm。木纖維多成束，長(zhǎng)梭形，長(zhǎng)110～475 μm，直徑8～18 μm，可見(jiàn)紋孔點(diǎn)狀或斜縫狀。淀粉粒圓形或長(zhǎng)圓形，直徑3～5 μm。木栓細(xì)胞多邊形，棕黃色（圖6B）。endprint

3.3 芫花條與其混淆品（河朔蕘花莖枝）的區(qū)別

芫花條與其混淆品（河朔蕘花莖枝）在藥材或飲片性狀方面的區(qū)別在于：芫花條是以莖枝為主。枝節(jié)處有明顯對(duì)生的葉柄痕和枝痕。嫩枝表面覆蓋1層黃色的絹狀毛。折斷面皮部有細(xì)密銀白色絮狀纖維。河朔蕘花莖枝飲片為枝、葉和花序梗的段?；ㄐ蚬？梢?jiàn)呈穗狀花序的花梗痕。皮部纖維不呈銀白色絮狀（表2）。

在顯微組織方面，芫花的莖橫切面在韌皮部有單個(gè)散在的粗大的木化韌皮纖維，壁極厚，可見(jiàn)層紋。木纖維主要為纖維管胞，長(zhǎng)梭形，壁有斜向交錯(cuò)的紋理，可見(jiàn)具緣紋孔，紋孔口圓形。薄壁細(xì)胞內(nèi)淀粉粒較少。芫花的葉下表皮附有單細(xì)胞非腺毛，中脈處厚角組織1～2層。河朔蕘花的莖韌皮部沒(méi)有粗大的木化韌皮纖維。木纖維壁沒(méi)有斜向交錯(cuò)的紋理。薄壁細(xì)胞內(nèi)充滿(mǎn)淀粉粒。河朔蕘花的葉表皮外有厚角質(zhì)層，下表皮無(wú)非腺毛，中脈處厚角組織3～4層（表2）。

4 結(jié)論與討論

在藥材商品調(diào)查時(shí)，發(fā)現(xiàn)芫花條混淆品，經(jīng)鑒定為瑞香科蕘花屬植物河朔蕘花W.chamaedaphne的莖葉，經(jīng)過(guò)對(duì)2種藥材性狀與顯微組織比較鑒別研究，認(rèn)為兩者有區(qū)別，可以用于2種藥材的鑒別。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，芫花條藥材或飲片主要為莖枝，一般看不到葉或花序梗，節(jié)處有明顯對(duì)生的葉柄痕和枝痕，折斷面皮部有細(xì)密銀白色絮狀纖維?；煜罚ê铀肥伝ǎ閹в星o枝、葉和花序梗的段，花序?？梢?jiàn)呈穗狀花序的花梗痕。兩者的藥材外形容易區(qū)別。在顯微組織方面，芫花的莖橫切面韌皮部有單個(gè)散在的粗大的木化韌皮纖維，壁極厚；其葉下表皮附有單細(xì)胞非腺毛。河朔蕘花莖橫切面韌皮部未見(jiàn)粗大的木化韌皮纖維；葉表皮細(xì)胞外壁有厚角質(zhì)層，葉下表皮無(wú)非腺毛。

由于芫花條混淆品（河朔蕘花）中帶有碎葉片，因而對(duì)河朔蕘花與芫花的葉顯微結(jié)構(gòu)進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)兩者葉片顯微組織有區(qū)別。芫花葉的下表皮附著有單細(xì)胞非腺毛，非腺毛外壁有疣狀突起；主脈表皮內(nèi)側(cè)的厚角組織較薄，只有1～2層細(xì)胞。河朔蕘花的葉下表皮無(wú)非腺毛，但其葉表皮細(xì)胞外壁有厚的角質(zhì)層，主脈上、下表皮內(nèi)側(cè)有較厚的厚角組織，為3～4層細(xì)胞組成。此實(shí)驗(yàn)結(jié)果與芫花葉紙質(zhì)，河朔蕘花葉近革質(zhì)[13]的形態(tài)描述相符。芫花的葉未見(jiàn)有藥用記載，但是近年有學(xué)者對(duì)其含有的黃酮類(lèi)、木脂素化合物進(jìn)行分析研究[8-9]。

芫花的根有藥用記載，最早見(jiàn)于《吳普本草》。芫花根在《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑》第十七冊(cè)所附“藥典未收載的藥材名稱(chēng)及來(lái)源”的藥材名單中有收錄。芫花根具有逐水，解毒，散結(jié)功效，用于水腫，瘰疬，乳癰，痔瘡，疥瘡，風(fēng)濕痹痛[3]。以往，僅見(jiàn)其根皮藥材及顯微鑒別工作[12]。因此，做了芫花根的藥材性狀和橫切面觀察，其結(jié)果可供芫花根藥材鑒別。

有文獻(xiàn)記載芫花莖皮纖維可用來(lái)作造紙和人造棉原料[13]。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，芫花莖皮折斷時(shí)呈細(xì)密銀白色絮狀，其根也有類(lèi)似情況。顯微鏡觀察，芫花莖或根的韌皮層含有大量的韌皮纖維束，韌皮纖維細(xì)而極長(zhǎng)，直徑7～13 μm，壁薄。由于纖維眾多，易被切片刀刮帶，在做其根或莖橫切片時(shí)，很難達(dá)到滿(mǎn)意的切片效果。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 山東中草藥手冊(cè)編寫(xiě)組. 山東中草藥手冊(cè)[M].濟(jì)南： 山東人民出版社， 1970：676.

[2] 山東省食品藥品監(jiān)督管理局. 山東省中藥材標(biāo)準(zhǔn)[M]. 2012年版.濟(jì)南：山東科學(xué)技術(shù)出版社，2013： 104.

[3] 國(guó)家中醫(yī)藥管理局中華本草編委會(huì).中華本草.第5冊(cè)[M]. 上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1999：402.

[4] 李嬈嬈，劉延澤. RP-HPLC法測(cè)定芫花葉中3種黃酮苷的含量[J]. 中草藥，2004，35（7）： 822.

[5] 和蕾，史琪榮，柳潤(rùn)輝，等.芫花條中抗炎活性成分[J].第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，29（10）：1221.

[6] 和蕾，史琪榮，柳潤(rùn)輝，等.芫花條中香豆素類(lèi)成分研究[J]. 藥學(xué)實(shí)踐雜志，2008，26（6）：441.

[7] 徐光，李天景，阮征，等.芫花枝條木脂素化學(xué)成分研究[J]. 中國(guó)現(xiàn)代中藥，2014，16（6）：447.

[8] 李天景，徐貝貝，白景芫，等. 花枝條化學(xué)成分研究[J]. 中草藥，2011，42（9）：1702.

[9] 汪茂田， 馮衛(wèi)生. 芫花葉中的新木脂素內(nèi)酯[J]. 藥學(xué)學(xué)報(bào)，1990，25（11）：866.

[10] 鄭維發(fā)， 王莉， 石楓，等.芫花根總黃酮對(duì)小鼠細(xì)胞免疫功能的調(diào)節(jié)作用[J]. 解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)，2004， 20（4）：241.

[11] 魏志文，高曉雯，鄭維發(fā). 芫花根總黃酮抗腫瘤活性研究[J]. 解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)，2008，24（2）：116.

[12] 梁益敏，武祖發(fā)，劉繼宏. 芫花根皮的生藥學(xué)研究[J]. 時(shí)珍國(guó)藥研究，1997，8（6）：518.

[13] 中國(guó)植物志編輯委員會(huì). 中國(guó)植物志.第52卷.第1分冊(cè)[M]. 北京：科學(xué)出版社，1999： 322，336.

[責(zé)任編輯 呂冬梅]endprint