文/李秀嶺 王 艷　王天梓

（北京市大興區(qū)動(dòng)物疾病控制中心）

牛副結(jié)核病是一種由副結(jié)核分枝桿菌（Mycobacterium avium subspecies. Paratuberculosis，MAP）引起的慢性消耗性傳染病，1891年由Johne和Hothinghow首次發(fā)現(xiàn)該病，因而又稱約內(nèi)氏?。↗ohne’s disease）[1]。該病呈世界性分布，感染牛會(huì)出現(xiàn)腹瀉，營(yíng)養(yǎng)吸收不良，進(jìn)行性消瘦等癥狀，進(jìn)而導(dǎo)致奶牛產(chǎn)奶量下降[2，3]，肉牛屠宰價(jià)值降低，牛使用年限下降等[4]，給牛場(chǎng)帶來(lái)巨大經(jīng)濟(jì)損失。本文從副結(jié)核病在當(dāng)前奶牛場(chǎng)的流行現(xiàn)狀和臨床癥狀出發(fā)，分析副結(jié)核病對(duì)奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)的影響，提出相關(guān)防控建議。

1　副結(jié)核病的特征

發(fā)病初期不表現(xiàn)任何癥狀，奶牛感染后直到2～5歲時(shí)才會(huì)出現(xiàn)臨床癥狀，感染途徑主要是通過消化系統(tǒng)，只有變態(tài)反應(yīng)才能檢出。發(fā)病時(shí)臨床上表現(xiàn)為漸進(jìn)性消瘦，周期性、頑固性下痢，下痢呈噴射狀、惡臭，糞便中?；煊忻撀涞哪c黏膜和血液。奶牛在亞臨床感染階段，排菌數(shù)較少，但出現(xiàn)臨床癥狀時(shí)，對(duì)排出的糞便進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)和鏡檢，糞便中含有大量可見的抗酸染色陽(yáng)性的成團(tuán)、成叢排列的小桿菌[1]。在發(fā)病的后期則極度消瘦，有時(shí)可見到下頜和腹下水腫，最后衰竭而死。

病死牛尸體極度消瘦，剖檢可見病理變化，如消化道和腸系膜淋巴結(jié)出現(xiàn)明顯病理變化，空腸、回腸和結(jié)腸前段，漿膜和腸系膜顯著水腫，腸黏膜增厚達(dá)3～20倍，并且形成明顯的皺褶。黏膜呈黃色或者灰黃色，皺褶凸起處常呈充血狀，并附有黏稠而渾濁的黏液，但通常無(wú)結(jié)節(jié)、壞死或者潰瘍病灶。

2　副結(jié)核病的流行概況

該病呈世界性分布，流行地區(qū)遍及五大洲：美國(guó)、英國(guó)、德國(guó)、加拿大、澳大利亞、意大利、丹麥、比利時(shí)、日本等養(yǎng)牛產(chǎn)業(yè)發(fā)達(dá)的國(guó)家，給這些國(guó)家?guī)?lái)了很大的經(jīng)濟(jì)損失[5]。1971年報(bào)道此病的國(guó)家有43個(gè)，1978年上升到168個(gè)。1996年美國(guó)國(guó)家動(dòng)物健康監(jiān)測(cè)系統(tǒng)（NAHMS）研究表明，超過10%的淘汰牛會(huì)表現(xiàn)出副結(jié)核臨床癥狀，隨機(jī)采集25～40頭奶牛中至少有2頭奶牛副結(jié)核檢測(cè)呈陽(yáng)性。

1955年，我國(guó)最早在內(nèi)蒙古自治區(qū)的呼盟謝爾塔拉牧場(chǎng)發(fā)現(xiàn)1例副結(jié)核疑似癥狀牛，后經(jīng)北京農(nóng)業(yè)大學(xué)確認(rèn)為副結(jié)核病牛。此后遼寧、黑龍江、內(nèi)蒙古、貴州、陜西等多地相繼發(fā)生本病。近年來(lái)由于奶牛、肉牛產(chǎn)業(yè)的迅速發(fā)展，生產(chǎn)規(guī)模逐漸擴(kuò)大，集約化程度不斷提高，牛及其副產(chǎn)品的流動(dòng)范圍越來(lái)越廣，副結(jié)核病的發(fā)病率也呈上升趨勢(shì)[1]。

3　副結(jié)核病給奶牛場(chǎng)帶來(lái)的經(jīng)濟(jì)損失

由于副結(jié)核病引起患病牛消瘦、生產(chǎn)性能下降、飼料消耗增加及易感染其它疾病直至死亡，給奶牛養(yǎng)殖企業(yè)造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失。筆者對(duì)北京市多家奶牛場(chǎng)進(jìn)行了調(diào)研，對(duì)副結(jié)核病對(duì)奶牛場(chǎng)造成的損失進(jìn)行了淺析。

若簡(jiǎn)單以純喂飼料成本計(jì)算：以單只牛的成本計(jì)算為例，1只犢牛從出生飼養(yǎng)到6月齡需要成本3600元，飼養(yǎng)到24月齡需要成本11550元。按照目前京津冀地區(qū)奶牛養(yǎng)殖業(yè)的行業(yè)平均水平，犢牛成本2500元/頭，成母牛成本15000元/頭。

從北京的奶牛場(chǎng)情況來(lái)看，副結(jié)核疾病在奶牛場(chǎng)的發(fā)病率普遍在10%～12%，而由于患病導(dǎo)致的生產(chǎn)性能下降占發(fā)病牛的8%左右。研究顯示，副結(jié)核病奶牛普遍會(huì)在產(chǎn)后0～60天被淘汰。目前，北京市場(chǎng)上的生鮮乳售價(jià)在3.5元/kg，綜合飼養(yǎng)成本，1頭被感染副結(jié)核的乳用牛被淘汰可造成的直接經(jīng)濟(jì)損失為10000元以上（平均飼養(yǎng)成本800元/月）。規(guī)模在500頭左右的奶牛場(chǎng)，有8%存欄量的奶牛感染副結(jié)核病被淘汰，每年的經(jīng)濟(jì)損失可高達(dá)30萬(wàn)元，甚至更高。

直接經(jīng)濟(jì)損失只是副結(jié)核為奶牛場(chǎng)帶來(lái)的危害之一，潛在威脅最嚴(yán)重的就是持續(xù)感染。母牛一旦感染，就會(huì)通過胎盤傳染給胎兒，引起持續(xù)性感染，如果犢牛正常產(chǎn)出，病菌能持續(xù)地進(jìn)入成年期，臨床表現(xiàn)健康，但體內(nèi)始終帶有病原菌，可以持續(xù)向牛群中釋放病原，是牛群中最危險(xiǎn)的傳染源。

4　副結(jié)核病的診斷研究現(xiàn)狀

目前牛副結(jié)核主要以臨床診斷來(lái)判定疑似病例，再運(yùn)用實(shí)驗(yàn)室診斷進(jìn)行確診。具體方法包括：直腸黏膜糞便檢菌法、細(xì)菌分離培養(yǎng)、變態(tài)反應(yīng)、瓊脂免疫擴(kuò)散試驗(yàn)（AGID）、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（GFT）、酶聯(lián)免疫吸附法試驗(yàn)（ELISA）、膠體金技術(shù)、細(xì)胞免疫測(cè)定法、核酸探針、PCR方法等。其中，直腸黏膜糞便檢菌法被公認(rèn)是診斷牛副結(jié)核病最準(zhǔn)確的方法[6]，尤其對(duì)排菌牛只的揭發(fā)率高，此法操作簡(jiǎn)單、取病料方便直接，適用于現(xiàn)場(chǎng)診斷，深受牧場(chǎng)主的歡迎。細(xì)菌分離同樣被認(rèn)為是世界上被推薦的活體定性最準(zhǔn)確和可靠的方法，但由于檢出率低、糞便培養(yǎng)試驗(yàn)操作復(fù)雜，費(fèi)用昂貴，導(dǎo)致該方法在實(shí)際應(yīng)用中受到很多限制[6]。補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（CFT）是最早應(yīng)用于本病的診斷方法，也是國(guó)際上診斷牛副結(jié)核病的常用血清學(xué)方法，但此方法結(jié)果存在假陽(yáng)性的可能，而且操作復(fù)雜不利于大規(guī)模的檢疫。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）作為近年來(lái)應(yīng)用比較多的方法，其敏感性和特異性均優(yōu)于補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)，并且同時(shí)采用兩種方法檢測(cè)，ELISA的檢出率更高并且具有操作簡(jiǎn)單適用于大規(guī)模檢疫的優(yōu)點(diǎn)[7]。

5　防控對(duì)策

副結(jié)核病自1891年首次報(bào)道以來(lái)，如何進(jìn)行有效的防控一直是研究人員和生產(chǎn)者探索的問題，因?yàn)椴∨Ｍ诟腥竞笃诓懦霈F(xiàn)臨床癥狀，藥物治療僅暫時(shí)緩解癥狀，不能停止排菌，一旦停藥排菌量會(huì)恢復(fù)到用藥前，導(dǎo)致副結(jié)核病藥物治療常無(wú)效。并且對(duì)于傳染病的普遍防治措施——疫苗接種，在牛副結(jié)核病的防控中也存在困難，因?yàn)楦苯Y(jié)核病在1月齡前最易感，并且存在較高的垂直感染，因此僅靠主動(dòng)免疫預(yù)防感染較困難。雖然由于上述原因，對(duì)于副結(jié)核病的防控問題沒能很好地解決，但發(fā)病較早的國(guó)家經(jīng)多年的實(shí)踐，根據(jù)本國(guó)的實(shí)際情況，總結(jié)出一套較為實(shí)用的防控方法。

在日本，采用對(duì)疑似污染牛群進(jìn)行ELISA檢測(cè)和糞便培養(yǎng)定期檢查，檢出陽(yáng)性牛進(jìn)行撲殺處理，國(guó)家給與80%的補(bǔ)償金。曾對(duì)某肉牛場(chǎng)的186頭妊娠母牛做了ELISA檢查，把其中的7頭陽(yáng)性牛立刻隔離，同時(shí)對(duì)所有的牛進(jìn)行糞便培養(yǎng)，3個(gè)月后證明7頭抗體陽(yáng)性牛中有6頭排菌陽(yáng)性，用這種方法防止了剩余的179頭新生犢牛的舍內(nèi)水平感染。

歐美副結(jié)核病嚴(yán)重的國(guó)家由于流行面廣，感染率高，承受不了檢出撲殺的巨大經(jīng)濟(jì)損失。經(jīng)過長(zhǎng)期試驗(yàn)，他們認(rèn)為對(duì)新生犢牛進(jìn)行免疫注射，配合必要的獸醫(yī)衛(wèi)生措施是防控該病最有效的辦法，如果嚴(yán)格執(zhí)行這一防控措施，經(jīng)過5～10年可以消除副結(jié)核病。目前他們使用的疫苗有兩種：一是弱毒活疫苗；二是滅活疫苗。英國(guó)及一些東歐國(guó)家采用弱毒活疫苗，而美國(guó)、挪威等國(guó)家使用滅活疫苗。兩種疫苗均使用效果很好，可降低90%的臨床發(fā)病率和使50%獲得抗感染能力[8]。

我國(guó)目前奶牛場(chǎng)普遍采取如下措施：對(duì)有副結(jié)核感染的牛群中的新生犢牛在7日內(nèi)進(jìn)行副結(jié)核滅活疫苗接種，同時(shí)將出生犢牛立即與母牛分開，不吸食初乳，而是對(duì)犢牛飼喂經(jīng)80℃加熱滅菌20min[5]的消毒乳。犢牛要專人飼養(yǎng)，舍內(nèi)清掃干凈，經(jīng)常用來(lái)蘇兒等消毒。對(duì)成年牛每年定期進(jìn)行3次皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)檢疫或ELISA試劑盒檢驗(yàn)，檢出陽(yáng)性牛后隔離飼養(yǎng)，一但發(fā)現(xiàn)臨床開放牛和隱性感染牛立刻撲殺，并對(duì)其可能污染的用具、場(chǎng)所進(jìn)行徹底消毒。經(jīng)過多年凈化，牛場(chǎng)的副結(jié)核病檢出率明顯下降。

[1] OIE. Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals[M]. Paris：OIE Press，2011.

[2] Benedictus G，Dijkehuizen A A，Stelwagen J. Economic losses due to paratuberculosis in dairy cattle[J]. Veterinary Record，1987，121（7）：142-146.

[3] Kudahl A B，Nielsen S S，Sorensen J T. Relationship between antibodies against Mycobacterium avium subsp.Paratuberculosis in milk and shape of curves[J]. Preventive Veterinary Medicine，2004，62（2）：119-134.

[4] Kudahl A B，Ostergarard S，Sorensen J T，et al. A Stochastic model simulating paratuberculosis in a dai ry herd[J] .Preventive VeterinaryMedicine，2007，78（2）：97-117.

[5] 谷立波，劉云志，朱恒義. 牛副結(jié)核病及其防制對(duì)策[J]. 吉林畜牧獸醫(yī)，2004（9）：13-15.

[6] 韓猛，張亮，王基隆，等. 山東省規(guī)?；膛?chǎng)結(jié)核病與副結(jié)核病流行病學(xué)調(diào)查研究[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2014，30（14）：10-13.

[7] 何昭陽(yáng)，韓有庫(kù)，顧萬(wàn)鈞，等. 牛副結(jié)核ELISA診斷方法研究[J]. 畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，1991，22（1）：57-60.

[8] 林濤. 規(guī)?；膛?chǎng)副結(jié)核快速診斷方法的比較：[碩士論文][D]. 蘭州：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)，2012.

本研究是奶牛產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系北京市創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)階段成果。奶牛產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系北京市創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)大興綜合試驗(yàn)站針對(duì)副結(jié)核病對(duì)奶牛場(chǎng)的影響等問題展開調(diào)研，參與調(diào)研的成員有李秀嶺、王艷、王天梓，本文執(zhí)筆人李秀嶺。