高 峰 遲景宏 王欣平 蔣 萊

(齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院附屬第三醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科,黑龍江 齊齊哈爾 161000)

急性腦梗死是缺血性腦血管病，病情變化迅速，后果嚴(yán)重。研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞因子作為一種重要的遞質(zhì)在腦卒中發(fā)生、發(fā)展及疾病的轉(zhuǎn)歸中起到了重要的作用〔1，2〕。半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3是近年發(fā)現(xiàn)的一種分子量為32 kD的半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶，是細(xì)胞凋亡執(zhí)行階段的關(guān)鍵蛋白酶，腦缺血發(fā)生后，缺血半暗帶區(qū)Caspase-3的表達(dá)增加〔3，4〕。神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)是存在于機(jī)體中的關(guān)鍵酶，是由2-磷酸甘油轉(zhuǎn)化成磷酸烯醇式丙酮酸的限速酶，當(dāng)腦實(shí)質(zhì)破壞時(shí)，神經(jīng)元中的NSE可以釋放入腦脊液和血液中，且釋放量與神經(jīng)細(xì)胞的損傷程度平行〔5，6〕。本文對(duì)急性腦梗死患者血清中Caspase-3和NSE的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，分析其臨床意義及相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1臨床資料 2013年1月至2016年6月齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院附屬第三醫(yī)院確診為急性腦梗死的患者58例為觀察組，納入均經(jīng)病史、癥狀、體征及輔助檢查證實(shí)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①具有器質(zhì)性精神障礙；②伴有惡性腫瘤；③伴有風(fēng)濕免疫性疾病及血液系統(tǒng)疾病。男32例，女26例，年齡53～87歲，平均65.9歲。24例體檢證實(shí)為無(wú)明顯器質(zhì)性疾病的成人為對(duì)照組，其中男12例，女12例，年齡43～65歲，平均59.9歲。兩組一般資料無(wú)明顯差異，具有可比性。

1.2Caspase-3和NSE表達(dá)的檢測(cè) 觀察組抽取發(fā)病后12、24、48 h、3、5、7、10 d的靜脈血3 ml，對(duì)照組常規(guī)抽取空腹靜脈血3 ml，2 000 r/min離心后分離血清，置于-20℃冰箱中凍存待檢。Caspase-3和NSE的檢測(cè)應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法，按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，并由同一檢驗(yàn)師進(jìn)行操作，嚴(yán)格質(zhì)量控制工作。

1.3腦梗死灶體積計(jì)算 腦梗死灶體積根據(jù)患者發(fā)病2 d內(nèi)頭顱磁共振成像(MRI)結(jié)果計(jì)算：梗死體積=a×b×c×層厚×π/6(a為梗死灶的最大長(zhǎng)徑，b為與長(zhǎng)徑相垂直的直徑，c為MRI掃描的陽(yáng)性層數(shù))。分為3組：小梗死組≤4.0 cm314例，中梗死組4.1～10.0 cm325例，大梗死組>10.0 cm319例。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SAS6.12統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)、方差分析。

2 結(jié) 果

2.1觀察組不同時(shí)點(diǎn)血清中Caspase-3表達(dá)的比較 觀察組發(fā)病12 h能檢測(cè)到血清中Caspase-3的表達(dá)〔(16.68±4.13)μg/L〕，24 h達(dá)高峰〔(22.81±4.24)μg/L〕，之后血清中的濃度逐漸下降〔48 h,(21.35±4.82)μg/L;3 d,(19.69±4.64)μg/L;5 d,(18.98±3.40)μg/L;7 d,(16.15±4.38)μg/L〕，與對(duì)照組均差異顯著(P<0.05)。第10天〔(14.18±3.07)μg/L〕與對(duì)照組〔(13.87±4.37)μg/L〕無(wú)顯著差異。

2.2觀察組不同時(shí)點(diǎn)血清中NSE表達(dá)的比較 觀察組發(fā)病后12 h能檢測(cè)到血清中NSE表達(dá)〔(12.24±4.24)μg/L〕，24 h〔(14.54±4.08)μg/L〕,48 h達(dá)高峰〔(19.30±4.41)μg/L〕，后逐漸下降〔3 d，(19.12±4.75)μg/L；5 d，(17.78±3.68)μg/L；7 d,(16.45±4.08)μg/L〕，與對(duì)照組差異均顯著(P<0.05)，第10天〔(12.10±3.95)μg/L〕與對(duì)照組〔(11.56±3.24)μg/L〕無(wú)明顯差異。

2.3觀察組發(fā)病24 h血清中Caspase-3表達(dá)與梗死灶大小的比較 觀察組發(fā)病24 h血清中Caspase-3的表達(dá)與梗死灶大小〔小、中、大分別為(20.92±2.61)、(22.69±3.54)、(24.46±3.98)μg/L〕差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=5.68,P=0.024 7)。

2.4觀察組發(fā)病48 h血清中NSE的表達(dá)與梗死灶大小的比較 觀察組發(fā)病48 h血清中NSE表達(dá)與梗死灶大小〔小、中、大分別為(16.52±3.56)、(19.02±4.47)、(22.43±4.98)μg/L〕差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=6.98,P=0.014 1)。

3 討 論

缺血性腦卒中的常見(jiàn)原因是動(dòng)脈粥樣硬化，病變形成過(guò)程中常出現(xiàn)蛋白的表達(dá)異?！?，8〕。Caspase-3以酶原形式存在是沒(méi)有生物學(xué)活性的，而當(dāng)細(xì)胞接受凋亡信號(hào)刺激時(shí)，被系列反應(yīng)激活，誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡，活化的Caspase-3主要是通過(guò)裂解抑制凋亡的蛋白，發(fā)揮促凋亡的作用〔3，9〕。機(jī)體內(nèi)活化的Caspase-3促凋亡的機(jī)制有：①結(jié)構(gòu)蛋白及看家蛋白的水解，細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)破壞；②通過(guò)水解脫氧核糖酸酶的抑制蛋白，活化DNA裂解酶，引起凋亡DNA片段化，促進(jìn)細(xì)胞的凋亡。此時(shí)DNA修復(fù)酶被Caspase-3通過(guò)水解特異性細(xì)胞蛋白直接引發(fā)凋亡，另一方面通過(guò)破壞DNA修復(fù)蛋白，阻礙DNA修復(fù)，促進(jìn)凋亡〔10，11〕。NSE是存在于機(jī)體中的關(guān)鍵酶，在正常神經(jīng)細(xì)胞周?chē)囊后w環(huán)境中的含量較低，而在血液中的含量更低〔12〕。在神經(jīng)細(xì)胞缺血、損傷后可以引起細(xì)胞膜的完整性破壞，NSE釋放進(jìn)入腦脊液，在血-腦屏障受到破壞后進(jìn)入血液循環(huán)〔13〕。NSE是較為敏感的反映神經(jīng)元損傷的指標(biāo)〔14〕。本研究結(jié)果提示急性腦梗死在病變形成和發(fā)展時(shí)Caspase-3和NSE存在動(dòng)態(tài)變化。這可能與急性腦梗死后病灶區(qū)及周?chē)M織細(xì)胞缺血缺氧有關(guān)，此時(shí)Caspase-3和NSE的濃度上升，啟動(dòng)下游凋亡信號(hào)傳導(dǎo)通路，但是NSE的升高晚于Caspase-3，這可能是遲發(fā)性改變。24 h正是缺血后誘發(fā)的梗死灶周?chē)罅磕X細(xì)胞凋亡形成的時(shí)期，48 h是梗死繼發(fā)性病變明顯的時(shí)期，因此NSE是凋亡形成后遲發(fā)性病變的血清學(xué)表現(xiàn)，具體機(jī)制需要后續(xù)更多實(shí)驗(yàn)證實(shí)。本文結(jié)果提示Caspase-3和NSE的表達(dá)量與病變程度密切相關(guān)。Caspase-3和NSE高表達(dá)時(shí)可能使急性腦梗死持續(xù)的時(shí)間較長(zhǎng)，二者的變化不僅對(duì)急性腦梗死持續(xù)性的損傷有一定作用，還可能是判斷病變嚴(yán)重程度的指標(biāo)〔15，16〕。

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