張鵬

摘 要：酶聯(lián)免疫分析檢測(cè)技術(shù)具有靈敏度高，特異性強(qiáng)以及操作簡(jiǎn)單等優(yōu)勢(shì)，因此，在對(duì)農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測(cè)的過(guò)程中，酶聯(lián)免疫分析檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用十分廣泛。本文將對(duì)酶聯(lián)免疫分析檢測(cè)技術(shù)在農(nóng)藥殘留檢測(cè)中應(yīng)用的具體內(nèi)容進(jìn)行深入的分析探究。

關(guān)鍵詞：農(nóng)藥殘留；酶聯(lián)免疫分析檢測(cè)技術(shù)；應(yīng)用

中圖分類號(hào)：F767.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A DOI：10.11974/nyyjs.20171233044

前言

酶聯(lián)免疫分析檢測(cè)技術(shù)是將免疫技術(shù)和現(xiàn)代化測(cè)試技術(shù)進(jìn)行融合后產(chǎn)生的新型技術(shù)形式，因其較高的靈敏性以及操作性，在許多領(lǐng)域都得到了有效的應(yīng)用。從20世紀(jì)90年代開(kāi)始，酶聯(lián)免疫分析檢測(cè)技術(shù)在農(nóng)藥殘留檢測(cè)中得到應(yīng)用，逐漸成為農(nóng)業(yè)殘留檢測(cè)中不可缺少的技術(shù)類型之一。酶聯(lián)免疫分析檢測(cè)技術(shù)涉及到了多個(gè)學(xué)科知識(shí)的綜合應(yīng)用，農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展創(chuàng)新提供了更加廣闊的思路。

1 酶聯(lián)免疫分析檢測(cè)技術(shù)的內(nèi)涵分析

酶聯(lián)免疫分析檢測(cè)技術(shù)本質(zhì)上是免疫技術(shù)和現(xiàn)代化檢測(cè)技術(shù)的綜合應(yīng)用，因此其原理基本上就是免疫技術(shù)的原理，即抗原和抗體的特異性反應(yīng)。抗原的特性可以分為免疫原性以及反應(yīng)原性兩種類型，同時(shí)擁有上述兩種特性的抗原被稱作完全抗原，僅僅擁有反應(yīng)原性的抗原則被稱作不完全抗原。而通過(guò)對(duì)抗原和特異性反應(yīng)這一原理的應(yīng)用，人們?cè)诿庖叻治鰴z測(cè)的基礎(chǔ)上融合了更加現(xiàn)代化的檢測(cè)技術(shù)之后，研發(fā)出了酶聯(lián)免疫分析檢測(cè)技術(shù)，相對(duì)于前者，酶聯(lián)免疫分析檢測(cè)技術(shù)的檢測(cè)結(jié)果具備較高的精確度。在酶聯(lián)免疫分析檢測(cè)技術(shù)應(yīng)用于農(nóng)藥殘留檢測(cè)時(shí)，在開(kāi)始檢測(cè)之前，必須做好相應(yīng)的準(zhǔn)備工作。準(zhǔn)備好檢測(cè)使用的抗原。需要注意的是，該技術(shù)使用的是不完全抗原。農(nóng)藥殘留的分子量要遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于免疫原性物質(zhì)擁有的分子量，因此，殘留的農(nóng)藥根本不足以使機(jī)體生成針對(duì)農(nóng)藥的抗體。在這樣的情況下，必須將殘留的農(nóng)藥和大分子載體進(jìn)行偶聯(lián)，使其產(chǎn)生免疫原性。對(duì)于抗原，必須結(jié)合農(nóng)藥的類型有針對(duì)性的進(jìn)行準(zhǔn)備；人工合成免疫抗原。人工免疫抗原的合成主要是將不完全抗原放置在特殊的環(huán)境下，使其發(fā)生偶聯(lián)反應(yīng)。對(duì)于不同的半抗原活性基團(tuán)，采取的偶聯(lián)方法也會(huì)存在差異性。由于偶聯(lián)物會(huì)受到酸堿度、離子濃度等因素的影響，因此必須對(duì)偶聯(lián)反應(yīng)發(fā)生的條件進(jìn)行嚴(yán)格的控制；制備農(nóng)藥抗體。在多克隆抗體制備的過(guò)程中，可以選擇合適的小型動(dòng)物作為免疫對(duì)象，該制備方法相對(duì)而言成本較低，且操作簡(jiǎn)便。而單克隆抗體的制備雖然在成本方面要稍多，但是抗體的特異性要優(yōu)于前者。

2 酶聯(lián)免疫分析檢測(cè)方法的選擇

通過(guò)大量的實(shí)踐證明，酶聯(lián)免疫分析檢測(cè)技術(shù)的針對(duì)性較強(qiáng)，可以根據(jù)酶的處理方式對(duì)其進(jìn)行分類，目前，應(yīng)用最普遍的一種方法是酶聯(lián)免疫吸附分析法，在應(yīng)用的過(guò)程中，酶的具體作用是對(duì)復(fù)合物進(jìn)行標(biāo)記。酶聯(lián)免疫分析檢測(cè)方法主要包括以下幾種類型：酶標(biāo)抗原直接競(jìng)爭(zhēng)抑制法，在具體應(yīng)用的過(guò)程中，需要使用到固體抗原和經(jīng)過(guò)酶標(biāo)記之后的已知抗原，將上述兩種物質(zhì)和待測(cè)物品以及待測(cè)農(nóng)藥的抗原進(jìn)行均勻的混合，之后將其放置在適宜的環(huán)境中進(jìn)行培育，待測(cè)農(nóng)藥和經(jīng)過(guò)酶標(biāo)記的農(nóng)藥會(huì)同時(shí)與抗體結(jié)合，在上述反應(yīng)結(jié)束之后，就可以對(duì)反應(yīng)物進(jìn)行分離，接著通過(guò)加入酶底物的方式使其出現(xiàn)顏色變化，以此為根據(jù)就可以對(duì)農(nóng)藥的含量進(jìn)行精準(zhǔn)的掌握；酶標(biāo)抗體直接競(jìng)爭(zhēng)抑制法。該方法的作用原理與酶標(biāo)抗原直接競(jìng)爭(zhēng)抑制法基本相同，主要的區(qū)別在于，添加的物質(zhì)是被抗原包被的固相載體，在發(fā)生反應(yīng)完成后，可以通過(guò)顯色反應(yīng)了解農(nóng)藥殘留情況；雙抗體夾心法。該方法在應(yīng)用的過(guò)程中，需要使用到兩種類型的抗體，分別是抗體包被的載體和經(jīng)過(guò)酶標(biāo)記的抗體。將上述兩種抗體和待測(cè)物質(zhì)進(jìn)行混合反應(yīng)，之后將反應(yīng)物分離之后同樣采用顯色反應(yīng)測(cè)定其中的抗原含量；間接夾心法。該方法與雙抗體夾心法最大的區(qū)別就是加入固相抗體的次數(shù)為兩次，其它操作流程完全相同。

在對(duì)酶聯(lián)免疫分析檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行應(yīng)用的過(guò)程中，對(duì)于檢測(cè)方法的選擇需要結(jié)合實(shí)際情況進(jìn)行，同時(shí)，不同的方法在實(shí)施的過(guò)程中需要的反應(yīng)條件也存在一定的差別，因此，為了保障檢測(cè)的準(zhǔn)確性，一定要選擇最合適的方法。在選擇時(shí)，要充分考慮到抗體、抗原、反應(yīng)條件等內(nèi)容，通過(guò)多次的試驗(yàn)對(duì)比，選擇最準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果。此外，對(duì)于酶變性的因素也要給予充分的重視，將其濃度控制在合理的范圍內(nèi)，避免其對(duì)檢測(cè)過(guò)程造成不利的干擾，保障檢測(cè)結(jié)果的精確性。

3 酶聯(lián)免疫分析檢測(cè)技術(shù)在農(nóng)藥殘留檢測(cè)中的具體應(yīng)用分析

使用酶聯(lián)免疫分析檢測(cè)技術(shù)對(duì)農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測(cè)，可以有效的提升檢測(cè)的準(zhǔn)確性。從20世紀(jì)80年代開(kāi)始，酶聯(lián)免疫分析檢測(cè)技術(shù)進(jìn)入農(nóng)藥殘留檢測(cè)領(lǐng)域，經(jīng)過(guò)幾十年的發(fā)展，該技術(shù)已經(jīng)成為農(nóng)藥殘留檢測(cè)應(yīng)用最廣泛的技術(shù)形式。通過(guò)大量的實(shí)踐表明，通過(guò)這項(xiàng)技術(shù)的應(yīng)用能夠極大的減少分析檢測(cè)需要使用的時(shí)間。在酶聯(lián)免疫分析檢測(cè)技術(shù)發(fā)展的進(jìn)程中，許多學(xué)者都在努力對(duì)其進(jìn)行完善，尤其是在新型抗體的研發(fā)中取得了不俗的成績(jī)，使得該技術(shù)的應(yīng)用價(jià)值得到了巨大的提高。我國(guó)從20世紀(jì)90年代開(kāi)始從事這方面的研究，近些年來(lái)，酶聯(lián)免疫分析檢測(cè)技術(shù)的具體操作方法得到了極大的豐富，其應(yīng)用范圍也在不斷擴(kuò)展。筆者將以食品農(nóng)藥殘留檢測(cè)為例對(duì)酶聯(lián)免疫分析檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)行詳細(xì)的分析闡述。

使用酶聯(lián)免疫分析檢測(cè)技術(shù)對(duì)食品農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測(cè)的過(guò)程中，不需要使用多余的設(shè)備。在檢測(cè)之前，首先要對(duì)樣品進(jìn)行適當(dāng)?shù)奶幚?，使其在水中溶解，這樣可以為樣品的提取提供一定的方便，同時(shí)還能夠有效的節(jié)省成本的投入。酶聯(lián)免疫分析檢測(cè)技術(shù)對(duì)農(nóng)藥殘留的檢測(cè)可以確定農(nóng)藥殘留的量，具體可以精確到pg水平。目前，國(guó)內(nèi)外很多食品的農(nóng)藥殘留檢測(cè)都會(huì)使用到酶聯(lián)免疫分析檢測(cè)技術(shù)。

但是人們需要意識(shí)到，酶聯(lián)免疫分析檢測(cè)技術(shù)同樣存在一定的缺陷，在實(shí)際應(yīng)用的過(guò)程中，一部分待檢測(cè)物和殘留農(nóng)藥的結(jié)構(gòu)存在密切的關(guān)系，在這樣的情況下，農(nóng)藥的代謝產(chǎn)物很可能會(huì)和農(nóng)藥抗體發(fā)生反應(yīng)，從而對(duì)檢測(cè)的精確度造成一定的影響，導(dǎo)致酶聯(lián)免疫分析檢測(cè)技術(shù)的可靠性以及靈敏度降低。但是這種反應(yīng)同樣具備一定的積極意義，可以使用抗一種農(nóng)藥的抗體對(duì)結(jié)構(gòu)密切相關(guān)的代謝產(chǎn)物進(jìn)行多種農(nóng)藥殘留的總量檢測(cè)。此外，還有學(xué)者提出，可以將對(duì)多種而結(jié)構(gòu)都具備抗性的抗體和非相關(guān)的農(nóng)藥抗體進(jìn)行混合后應(yīng)用于多種農(nóng)藥殘留的綜合分析檢測(cè)，能夠更好的應(yīng)對(duì)實(shí)際情況，畢竟當(dāng)前階段，農(nóng)藥污染的規(guī)律性較差，通過(guò)這種方式可以有效的提升農(nóng)藥殘留檢測(cè)的效率。由于現(xiàn)實(shí)生活中農(nóng)藥的種類較多，樣本的處理方法也存在一定的差異，因此，酶聯(lián)免疫分析檢測(cè)技術(shù)的影響因素尚不明確，有待進(jìn)一步研究。

3 結(jié)語(yǔ)

酶聯(lián)免疫分析檢測(cè)技術(shù)雖然具備較高的靈敏度以及較強(qiáng)的特異性，能夠極大的提升農(nóng)藥殘留檢測(cè)的精確性，但是其仍舊存在一定的局限性，因此，必須加強(qiáng)對(duì)該技術(shù)的研究分析，不斷對(duì)其進(jìn)行完善，如此才能使其在農(nóng)藥殘留檢測(cè)領(lǐng)域發(fā)揮出更大的作用，為人們的食品安全提供保障。

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