葉樺秀 李麗麗 江莉莉 福建省老年醫(yī)院檢驗科 （福建 福州 350003）

利用VITEK 2 Compact微生物全自動分析系統(tǒng)進(jìn)行細(xì)菌的鑒定，相比于傳統(tǒng)的細(xì)菌鑒定方法，具有操作簡單、耗時短的優(yōu)勢，同時也能克服人為判斷的準(zhǔn)確性較差的弊端。現(xiàn)階段，VITEK 2 Compact微生物全自動分析系質(zhì)控菌株統(tǒng)已被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)領(lǐng)域和食品安全領(lǐng)域?；诖?，為探究VITEK 2 Compact微生物全自動分析系統(tǒng)對微生物鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確性，本次研究對3株ATCC標(biāo)準(zhǔn)菌株，28株質(zhì)控菌株和64株本實驗室內(nèi)臨床分離純化菌株進(jìn)行檢測，并于常規(guī)鑒定方法的結(jié)果相比較，實現(xiàn)驗證VITEK 2 Compact微生物全自動分析系統(tǒng)總體符合率的目的[1]。

1.材料與方法

1.1 鑒定樣本來源

ATCC標(biāo)準(zhǔn)菌株是本次試驗主要的鑒定樣本來源，主要包括ATCC25922大腸埃希菌、ATCC25923金黃色葡萄球菌和ATCC27853銅綠假單胞菌。2014年～2017上半年福建省臨床檢驗中心提供的28株質(zhì)控菌株是本次研究的主要菌株樣本，以回報結(jié)果為準(zhǔn)。盲樣考核菌株為本實驗室內(nèi)臨床分離菌株，來自肺部、尿路、腸道感染及血液、膽汁、膿汁分離的致病菌及條件致病菌。包括不動桿菌、假單胞菌、克雷伯氏菌、沙雷菌、枸櫞酸菌、黃桿菌、埃希菌、沙門菌、志賀菌、變形桿菌、普羅威登斯菌、產(chǎn)堿桿菌、李斯特菌、葡糖球菌、腸球菌、產(chǎn)堿桿菌、弧菌屬、氣單胞菌、鄰單胞菌、假絲酵母菌20個屬共95株菌株，經(jīng)血平板分離純化。

1.2 鑒定儀器和鑒定卡

本次鑒定儀器所選用的是VITEK 2 Compact微生物全自動分析系統(tǒng)法國梅里埃公司生產(chǎn)的鑒定卡以及鑒定卡的配套試劑。其中，鑒定卡的種類包括革蘭氏陰性細(xì)菌鑒定卡GN、革蘭氏陽性細(xì)菌鑒定卡GP和酵母菌鑒定卡YST。

本次鑒定器材選用手工鑒定生化反應(yīng)培養(yǎng)基和念珠顯色培養(yǎng)基，鑒定血清選用的是沙門菌診斷血清和志賀菌診斷血清，在試驗過程中，注重對鑒定血清的有效期進(jìn)行控制。

1.3 鑒定方法

依據(jù)VITEK 2 Compact微生物全自動分析系統(tǒng)及配套GN、GP、YST鑒定卡的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，對95株菌株，運用VITEK 2 Compact微生物全自動分析系統(tǒng)和常規(guī)手工鑒定的方法分別驗證。VITEK 2 Compact微生物全自動分析系統(tǒng)鑒定分辨率＞85%的為可信鑒定結(jié)果，鑒定分辨率在50%至84%之間的菌株，再送至外院運用梅里埃VITEK MS質(zhì)譜儀加以佐證，確定總體符合率，并依據(jù)第四版《全國臨床檢驗操作規(guī)程》進(jìn)行常規(guī)的手工鑒定，此外，應(yīng)用念珠顯色培養(yǎng)基鑒定酵母菌。

表1 VITEK 2 Compact微生物全自動分析系統(tǒng)鑒定結(jié)果符合率

2.結(jié)果

2.1 鑒定時間

所有參與鑒定的菌株忽略在培養(yǎng)階段的時間。應(yīng)用VITEK 2 Compact微生物全自動分析系統(tǒng)，革蘭陰性菌鑒定卡在10h內(nèi)獲得鑒定結(jié)果，革蘭陽性菌鑒定卡在8h內(nèi)獲得鑒定結(jié)果，酵母菌鑒定卡在18h內(nèi)獲得鑒定結(jié)果。常規(guī)鑒定方法于24h后觀察鑒定結(jié)果。

2.2 符合程度

將通過VITEK 2 Compact微生物全自動分析系統(tǒng)鑒定的結(jié)果與常規(guī)鑒定結(jié)果進(jìn)行對比發(fā)現(xiàn)，VITEK 2 Compact微生物全自動分析系統(tǒng)對95株菌株的鑒定符合率為96.9%，標(biāo)準(zhǔn)菌株鑒定結(jié)果的符合率為100%，盲樣考核菌株鑒定結(jié)果的符合率達(dá)到了95.3%，質(zhì)控菌株鑒定結(jié)果的符合率達(dá)到了97.5%，依據(jù)菌株的性質(zhì)來看，革蘭陽性菌鑒定結(jié)果的符合率為97.9%，革蘭陰性菌的符合率為95.2%，酵母菌的符合率100%。

2.3 鑒定結(jié)果分析

本次研究利用VITEK 2 Compact微生物全自動分析系統(tǒng)對所選取的95株菌株共測試了128次，鑒定結(jié)果總體符合率為96.9%，其中，標(biāo)準(zhǔn)菌株的生化特性顯著且穩(wěn)定，符合率為100%，體現(xiàn)了VITEK 2 Compact微生物全自動分析系統(tǒng)的重復(fù)性和穩(wěn)定性較高。革蘭陰性菌中的3例菌株不符合鑒定結(jié)果，經(jīng)梅里埃VITEK MS質(zhì)譜儀加以鑒定確認(rèn)，為質(zhì)控菌株中的多殺巴斯德菌和盲樣考核菌株中的副溶血性弧菌及無丙二酸檸檬酸桿菌，系統(tǒng)鑒定的分辨率均低于85%，本次研究所鑒定的95株菌株除了沙門菌和志賀菌需要另外進(jìn)行血清學(xué)的試驗輔助從而實現(xiàn)對細(xì)菌種類的判別外，其余93株菌株均可利用VITEK 2 Compact微生物全自動分析系統(tǒng)直接鑒定。革蘭陽性菌中的停乳鏈球菌似馬亞種系統(tǒng)鑒定分辨率是50%，為低分辨率。酵母菌符合率為100%，鑒定菌株為白色假絲酵母菌、熱帶假絲酵母菌、光滑假絲酵母菌、克柔假絲酵母菌，此四種菌為臨床酵母菌感染中的常見菌，也是念珠菌顯色培養(yǎng)基可鑒定的范疇。

3.討論

現(xiàn)階段，VITEK 2 Compact微生物全自動分析系統(tǒng)擁有6種不同微生物的鑒定卡，細(xì)菌鑒定結(jié)果采用GB推薦生化鑒定顯色法，大于500種可鑒定細(xì)菌[2]，在臨床試驗過程中，經(jīng)常運用革蘭氏陰性細(xì)菌鑒定卡GN和革蘭氏陽性細(xì)菌鑒定卡GP進(jìn)行細(xì)菌鑒定工作，同時，酵母菌鑒定卡YST在細(xì)菌鑒定中應(yīng)用的次數(shù)也較多。應(yīng)用VITEK 2 Compact微生物全自動分析系統(tǒng)可對臨床感染中的多數(shù)病原菌進(jìn)行檢測，從而提升疾病的預(yù)防和診治能力。直接獲取鑒定結(jié)果，所需要的時間平均為6～8個小時，相比于常規(guī)的鑒定方法來說，耗時縮短了許多，有效提升了鑒定的效率[3]。因此，采用VITEK 2 Compact微生物全自動分析系統(tǒng)進(jìn)行微生物的鑒定具有十分重要的現(xiàn)實意義，被臨床實驗室廣泛應(yīng)用。本實驗室的鑒定結(jié)果顯示，念珠菌顯色培養(yǎng)基和VITEK 2 Compact微生物全自動分析系統(tǒng)對上述四種酵母菌均有較高分辨率和符合率。3例列為不符合的革蘭氏陰性菌，多殺巴斯德菌、副溶血性弧菌及無丙二酸檸檬酸桿菌的系統(tǒng)分辨率均低于85%，需以輔助試驗加以確認(rèn)。表明VITEK 2 Compact微生物全自動分析系統(tǒng)對微生物鑒定的結(jié)果還是較為準(zhǔn)確。但對少數(shù)疑難細(xì)菌，在鑒定時可能會出現(xiàn)偏差。在鑒定的過程中，菌株種類復(fù)雜，試劑濃度不合格以及菌株的培養(yǎng)時間不一致都會對鑒定結(jié)果的符合率造成影響。因此，在出現(xiàn)問題的時候應(yīng)對上述可能引發(fā)鑒定結(jié)果符合率下降的因素進(jìn)行逐一排查，并定期檢查鑒定儀器、鑒定卡片及配套試劑，確保其在有效期內(nèi)使用，同時應(yīng)開展鑒定技術(shù)培訓(xùn)，提升鑒定人員對VITEK 2 Compact微生物全自動分析系統(tǒng)的操作熟練程度和技術(shù)水平，實現(xiàn)人工鑒定方法和利用VITEK 2 Compact微生物全自動分析系統(tǒng)進(jìn)行鑒定的方法相結(jié)合，從而形成參照關(guān)系，有利于提升微生物鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確性[3]。

鑒定結(jié)果表明，VITEK 2 Compact微生物全自動分析系統(tǒng)在選擇所需鑒定菌株的過程中，應(yīng)注重選擇培養(yǎng)時間較短的菌株，同時要將菌株進(jìn)行分離，分離時間約為24h，從而提升鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確性。同時，在貯存菌株的過程中，應(yīng)保持適宜的溫度，避免反復(fù)冷凍和融化的現(xiàn)象，并牢記菌株的保存期限。研究結(jié)果表明，李斯特菌、耶爾森菌鑒定結(jié)果的符合率隨時間變化下降不甚明顯，副溶血性弧菌和金黃色葡糖球菌鑒定結(jié)果的符合率與時間的變化呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)的發(fā)展趨勢，即時間越長，副溶血性弧菌和金黃色葡糖球菌鑒定結(jié)果的符合率越低。由此可見，保存時間過長和反復(fù)融化和冷凍都會對微生物的特性造成影響，進(jìn)一步對鑒定結(jié)果造成影響[4]。綜上所述，利用VITEK 2 Compact微生物全自動分析系統(tǒng)進(jìn)行菌株的鑒定，能夠確定致病菌的種類，為合理選擇治療法方法奠定理論基礎(chǔ)。具有較高的鑒定符合率，值得被廣泛推廣和應(yīng)用。同時，在鑒定的過程中，應(yīng)注意結(jié)合手工鑒定的方法對鑒定結(jié)果進(jìn)行復(fù)查，從而提升鑒定的準(zhǔn)確性[5]。

4.結(jié)論

研究結(jié)果表明，利用VITEK 2 Compact微生物全自動分析系統(tǒng)對微生物進(jìn)行檢測符合率較高，提升了臨床病原菌的診斷與治療的及時性和準(zhǔn)確性。

[1]丁秀榮,劉志忠,陳銘,等.VITEK2Compact全自動微生物鑒定系統(tǒng)對無名念珠菌的錯誤鑒定及文獻(xiàn)回顧[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2016,26(13):1855-1857.

[2]楊晶,王偉歡.VITEK2Compact系統(tǒng)的應(yīng)用及鑒定結(jié)果分析[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2016,26(18):2643-2645.

[3]陳蓉,居颺,劉戰(zhàn)民.3種鑒定系統(tǒng)在微生物室間質(zhì)量評價中的應(yīng)用和比較[J].檢驗醫(yī)學(xué),2017,32(5):415-420.

[4]Gray TJ,Kong F,Jelfs P,et al.Improved identification of rapidly growing mycobacteria by a 16S-23S internal transcribed spacer region PCR and capillary gelelectrophoresis[J].PLo S One,2014,9(7):102290.

[5]葉乃芳,凌華志.16S r RNA 序列分析技術(shù)對臨床標(biāo)本中疑難細(xì)菌的鑒定[J].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2015,50(7):1000-1003.