顧沐恩 吳煥淦 劉雅楠 張琳珊 劉慧榮 趙繼夢(mèng) 李晨 李璟

摘要 炎癥性腸病（IBD）是病因和發(fā)病機(jī)制尚不明確的慢性炎癥性疾病，包括克羅恩?。–D）和潰瘍性結(jié)腸炎（UC）。針灸在治療IBD上具有顯著的療效和優(yōu)勢(shì)，但其作用機(jī)制需深入研究和探討。近年來研究發(fā)現(xiàn)lncRNAs廣泛參與機(jī)體的生理病理過程，尤其是可通過基因調(diào)控介導(dǎo)機(jī)體的免疫炎性反應(yīng)，與包括IBD在內(nèi)的多種免疫性疾病都有密切關(guān)系。IBD發(fā)生時(shí)有多種差異表達(dá)的lncRNAs，其表達(dá)和功能的異?？稍贗BD炎癥的發(fā)生發(fā)展中有重要作用。文章就lncRNA的功能及與IBD關(guān)系的研究進(jìn)展進(jìn)行了總結(jié)，并基于針灸對(duì)IBD的治療作用，以期研究針灸能否通過調(diào)控相關(guān)lncRNA起到對(duì)IBD炎性反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用，從而為針灸治療IBD的機(jī)制研究提供新的思路。

關(guān)鍵詞 IBD；中醫(yī)針灸；長(zhǎng)鏈非編碼RNA；療效機(jī)制；思考與展望

Abstract Inflammatory bowel disease （IBD），including crohn′s disease and ulcerative colitisis，are chronic inflammatory diseases with unclear etiology and pathogenesis.The effect of acupuncture and moxibustion on the treatment of IBD is curative and has significant advantages，but its mechanisms still need to be further studied.Studies in recent years found that lncRNAs widely involved in the physiological and pathological process of the body，especially mediating the immune inflammatory response through gene regulation，and have close relationship with variety autoimmune diseases that including IBD.A variety of lncRNAs differently expressed when IBD occurs，and the abnormal expression and function of lncRNAs play an important role in the development of IBD inflammation.In this article，the functions of lncRNA as well as research progress of its relationship with IBD are summarized，and then base on the treatment of acupuncture and moxibustion on IBD，we in order to study whether acupuncture and moxibustion regulate the inflammatory response of IBD through regulating related lncRNAs，which will provide new ideas for the research on the mechanism of acupuncture and moxibustion on the treatment of IBD.

Key Words Inflammatory bowel disease （IBD）； Acupuncture and moxibustion； Long non-coding RNA； Effective mechanism； Thought and prospect

中圖分類號(hào)：R245.3；R259文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2017.02.046

長(zhǎng)鏈非編碼RNA（Long non-coding RNA，lncRNA）是一類從基因組上轉(zhuǎn)錄而來的不編碼蛋白質(zhì)的長(zhǎng)鏈RNA，在染色體沉默、染色質(zhì)修飾、轉(zhuǎn)錄激活、轉(zhuǎn)錄干擾、核內(nèi)運(yùn)輸?shù)冗^程中有重要作用。炎癥性腸?。↖nflammatory Bowel Diseases，IBD），包括克羅恩?。–rohn′s Disease，CD）和潰瘍性結(jié)腸炎（Ulcerative Colitis，UC），是非特異性慢性腸道炎癥性疾病，臨床上主要表現(xiàn)為腹瀉、腹痛，可有黏液或膿血便。其病因和發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，腸道黏膜免疫異常反應(yīng)所導(dǎo)致的炎性反應(yīng)在IBD發(fā)病中起重要作用。隨著現(xiàn)代生命科學(xué)研究的發(fā)展，基因組學(xué)研究發(fā)現(xiàn)基因的多態(tài)性和表觀遺傳調(diào)控與IBD的發(fā)生發(fā)展有著密切關(guān)系[1-2]。腸上皮黏膜屏障受損導(dǎo)致的腸道免疫失衡是引起IBD腸道炎癥的關(guān)鍵因素，而lncRNA可調(diào)控相關(guān)的炎性反應(yīng)基因以及炎性反應(yīng)信號(hào)通路關(guān)鍵分子的轉(zhuǎn)錄，參與腸道炎癥的發(fā)生發(fā)展。目前，針灸可通過影響多靶點(diǎn)和疾病過程的多個(gè)環(huán)節(jié)，在治療IBD及免疫炎癥調(diào)節(jié)上具有一定的作用，但其作用機(jī)制尚未完全闡明。因此，我們通過篩選與比較IBD的差異表達(dá)lncRNAs，闡釋lncRNA在針灸治療IBD的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制。

1 lncRNAs與中醫(yī)針灸

長(zhǎng)鏈非編碼RNAs（long noncoding RNAs，lncRNAs）轉(zhuǎn)錄本長(zhǎng)度200 nt～100 kb，可由RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生，主要位于細(xì)胞核內(nèi)。lncRNAs根據(jù)其基因組位置的不同分為正義lncRNAs、反義lncRNAs、雙向lncRNAs、內(nèi)含子lncRNAs以及基因間lncRNAs[3]。lncRNAs序列保守性較低，曾認(rèn)為lncRNAs是基因組轉(zhuǎn)錄過程中的垃圾副產(chǎn)物。晚近研究表明并非所有的lncRNAs都是轉(zhuǎn)錄噪聲，其部分參與調(diào)控細(xì)胞周期、細(xì)胞分化等生理過程，在表觀遺傳修飾、轉(zhuǎn)錄水平、轉(zhuǎn)錄后加工及翻譯水平等多個(gè)層面調(diào)控基因表達(dá)[4-5]。此外，lncRNAs具有不同的分子功能原型，包括信號(hào)傳導(dǎo)、誘導(dǎo)、指引和支架等，這些lncRNAs功能原型可以為lncRNA如何捕獲有用的蛋白作為生物傳感器提供思路，并可暗示它們可能的起源[6]。lncRNA曾被普遍認(rèn)為不能編碼任何蛋白質(zhì)，然而一些特異的lncRNAs可編碼大量的微肽。在分析肌肉特異性的lncRNAs的功能時(shí)，發(fā)現(xiàn)了一種在骨骼肌中特異性表達(dá)的lncRNA，這一RNA以往被歸類為非編碼RNA，但它的序列中包含的一小段卻類似一個(gè)編碼區(qū)域，并編碼了一個(gè)包含46個(gè)氨基酸的微肽，稱之為myoregulin（MLN）[7]。MLN形成了在結(jié)構(gòu)上與表達(dá)于心肌和慢收縮骨骼肌中的小蛋白phospholamban（PLN）和sarcolipin（SLN）相似的一種跨膜α-螺旋。未來可能會(huì)發(fā)現(xiàn)有更多的lncRNA能編碼小分子微肽。

lncRNA的生物功能被探索與研究，發(fā)現(xiàn)其功能和基因表達(dá)與臨床疾病的表型密切關(guān)系，在孟德爾疾病、癌癥、心血管疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、炎癥性腸病等疾病的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用[8-9]。目前研究提示與lncRNAs相關(guān)的疾病約166種[10]。全基因組關(guān)聯(lián)性研究（Genome-wide Association Studies，GWASs）發(fā)現(xiàn)，人類基因組中有大量與疾病表型相關(guān)的單核苷酸多態(tài)性（Genome-wide Association Studies，SNPs），其中217種與疾病的表型相關(guān)的SNPs位于162個(gè)lncRNAs位點(diǎn)，并與112種疾病表型相關(guān)聯(lián)，提示lncRNAs與疾病的發(fā)生關(guān)系密切[11]。

LncRNA、miRNA和mRNA之間構(gòu)成復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)，相互促進(jìn)或抑制，也可形成復(fù)合物調(diào)節(jié)，在系統(tǒng)生物學(xué)中具有重要的作用，參與諸多的生物學(xué)功能。正常的機(jī)體功能是人體的基因有序表達(dá)的結(jié)果，機(jī)體的復(fù)雜系統(tǒng)會(huì)通過不同網(wǎng)絡(luò)之間的信息傳遞和整合，使基因或其轉(zhuǎn)錄翻譯產(chǎn)物蛋白質(zhì)產(chǎn)生出最終的生物學(xué)功能，而機(jī)體的病或證則源于mRNA表達(dá)的失衡[12]。中醫(yī)的整體觀念運(yùn)用陰陽(yáng)五行學(xué)說解釋生理、病理現(xiàn)象，將陰陽(yáng)的對(duì)立統(tǒng)一看成普遍存在的規(guī)律，強(qiáng)調(diào)陰陽(yáng)的平衡，臟腑功能趨于調(diào)和。非編碼RNA與mRNA之間的調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)與中醫(yī)的整體觀念類似，在病理狀態(tài)下異常表達(dá)引起疾病，而在生理狀態(tài)下正常表達(dá)以維系著機(jī)體的動(dòng)態(tài)平衡。

2 lncRNAs與免疫炎性反應(yīng)

lncRNAs能調(diào)節(jié)炎性反應(yīng)細(xì)胞因子的轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后調(diào)控，參與toll樣受體（Toll-like Receptor，TLR）、NOD樣受體等炎性反應(yīng)相關(guān)信號(hào)通路的調(diào)節(jié)，在機(jī)體的免疫應(yīng)答及炎性反應(yīng)中發(fā)揮重要作用[13]。其中，LncDC是第一個(gè)被識(shí)別的具有免疫細(xì)胞分化功能的lncRNA，它能通過抑制SHP引起的轉(zhuǎn)錄因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3（Signal transducer and activator of transcription 3，STAT3）脫磷酸化，激活STAT3，調(diào)控樹突狀細(xì)胞的分化[14]。研究還發(fā)現(xiàn)超過有2 000種lncRNAs可表達(dá)于T細(xì)胞，調(diào)控Th細(xì)胞的特定基因編碼蛋白，并選擇性的調(diào)節(jié)Th2型細(xì)胞因子IL-4、IL-5、IL-13的表達(dá)[15]。此外，lncRNAs對(duì)固有免疫、適應(yīng)性免疫、免疫細(xì)胞發(fā)展分化及自身免疫性疾病都具有調(diào)節(jié)作用，系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、1型糖尿病、多發(fā)性硬化、甲狀腺炎、克羅恩病等多種自身免疫性疾病中存在lncRNAs的差異表達(dá)[9]，進(jìn)一步提示lncRNA可參與免疫炎性反應(yīng)的發(fā)生發(fā)展。

目前已發(fā)現(xiàn)多種lncRNAs與免疫炎性反應(yīng)的發(fā)生相關(guān)。LncRNA NEAT1（Nuclear Enriched Abundant Transcript 1，NEAT1）又稱為病毒誘導(dǎo)的非編碼RNA VINC，可通過誘導(dǎo)其相關(guān)聯(lián)的核內(nèi)旁斑蛋白剪接因子（Splicing Factor Proline/glutamine-rich，SFPQ）從IL-8啟動(dòng)子區(qū)域遷移到亞細(xì)胞核內(nèi)旁斑內(nèi)，消除SFPQ對(duì)IL-8轉(zhuǎn)錄的抑制作用，促進(jìn)IL-8的轉(zhuǎn)錄激活和表達(dá)，而沉默NEAT1的表達(dá)能抑制TLR2信號(hào)活化誘導(dǎo)的IL6、CXCL10、CCL2、CCL8和CXCL11等下游晚期反應(yīng)炎性反應(yīng)因子的表達(dá)[16-17]。LncRNA PACER即p50-associated COX-2 extragenic RNA，它能與NF-κB的抑制性亞基p50相結(jié)合，潛在地促進(jìn)Cox2啟動(dòng)區(qū)NF-κB p65/p50二聚體的結(jié)合，使p300組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶聚集，組蛋白乙?；蚏NA聚合酶II起始復(fù)合物的聚集增加，進(jìn)一步誘導(dǎo)Cox2的表達(dá)，引發(fā)炎性反應(yīng)[18]。lincRNA-Cox2也是一種參與NF-κB轉(zhuǎn)錄激活的早期原發(fā)性炎性反應(yīng)基因。當(dāng)細(xì)菌脂多糖LPS刺激巨噬細(xì)胞后，lincRNA-Cox2與SWI/SNF結(jié)合形成lincRNA-Cox2/SWI/SNF復(fù)合體，并調(diào)節(jié)NF-κB亞基結(jié)合到SWI/SNF復(fù)合體，引起巨噬細(xì)胞炎性反應(yīng)基因SWI/SNF相關(guān)的染色質(zhì)的重塑和反式激活，調(diào)控LPS誘導(dǎo)的炎性反應(yīng)[19]。LncRNA THRIL則是一種TNF-α與異構(gòu)核L核糖核蛋白（heterogenous nuclear Ribonucleoprotein L，hnRNPL）關(guān)聯(lián)的免疫調(diào)節(jié)性LincRNA，位于編碼BRI3結(jié)合蛋白基因的下游。THP-1巨噬細(xì)胞經(jīng)激活后，lncRNAs中差異表達(dá)較明顯的THRIL可與hnRNPL結(jié)合，形成THRIL–hnRNPL復(fù)合體，通過與TNF-α啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合調(diào)節(jié)TNF-α基因的轉(zhuǎn)錄，并參與轉(zhuǎn)錄后調(diào)控，其表達(dá)與急性炎癥性疾病的嚴(yán)重程度相關(guān)[20]。

另外，也有一些lncRNAs可抑制炎性反應(yīng)。lncRNA Lethe是由前炎性反應(yīng)因子通過NF-κB或糖皮質(zhì)激素受體激動(dòng)劑誘導(dǎo)產(chǎn)生的假基因lncRNA，它能與NF-κB的亞單位RelA結(jié)合，抑制RelA DNA結(jié)合和靶基因的激活，負(fù)反饋調(diào)節(jié)NF-κB信號(hào)通路，抑制由TNF-α誘發(fā)的炎性反應(yīng)[21]。Lnc-IL7R是一種經(jīng)LPS誘導(dǎo)產(chǎn)生的lnc RNA，它與人IL-7R基因的3′非編碼區(qū)域（3′UTR）重疊，可通過調(diào)節(jié)炎性反應(yīng)遞質(zhì)近端啟動(dòng)子的組蛋白H3第27個(gè)氨基酸上三甲基化（Histone 3 Lysine 27 Trimethylation，H3K27me3）修飾，抑制LPS誘導(dǎo)的炎性反應(yīng)，LPS誘導(dǎo)產(chǎn)生的E-selectin、VCAM-1、IL-6、IL-8在lnc-IL7R基因敲除細(xì)胞中呈現(xiàn)高表達(dá)[22]。lincRNA-EPS則在巨噬細(xì)胞中調(diào)控免疫應(yīng)答基因IRGs的表達(dá)，它定位在IRGs的調(diào)控區(qū)域，與hnRNPL相互作用，控制核小體定位并抑制其轉(zhuǎn)錄，調(diào)節(jié)炎性反應(yīng)，實(shí)驗(yàn)也證實(shí)lincRNA-ERS敲除小鼠在受到內(nèi)毒素攻擊后炎性反應(yīng)明顯增強(qiáng)[23]。綜上，參與免疫炎性反應(yīng)調(diào)節(jié)的lncRNAs。見表1。

綜上所述，lncRNA參與免疫炎性反應(yīng)的調(diào)節(jié)，或可從lncRNA的角度闡釋炎癥性腸病的發(fā)病機(jī)制。針灸能調(diào)節(jié)免疫炎性反應(yīng)因子的表達(dá)，具有抗炎免疫的作用[24]。將強(qiáng)調(diào)中醫(yī)整體觀念的針灸療法與系統(tǒng)生物學(xué)中的轉(zhuǎn)錄組學(xué)相結(jié)合，或可從整體水平揭示針灸治療潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩病的效應(yīng)及調(diào)控機(jī)制。

3 lncRNAs與炎癥性腸病

基因多態(tài)性等遺傳因素在IBD的發(fā)生中占有重要地位，如TLR4 rs4986790A>G和rs4986791C>T基因多態(tài)性可增加患IBD的風(fēng)險(xiǎn)，并與IBD的發(fā)病機(jī)制有一定關(guān)系[1]；基因的差異表達(dá)也在IBD的發(fā)病過程中有重要作用[25]?；騃L-10啟動(dòng)子KAT2B和H4K5ac的富集率減少可導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄沉默，影響先天和適應(yīng)性免疫應(yīng)答，使IL-10在IBD的結(jié)腸炎癥組織中表達(dá)減少，體現(xiàn)了IBD中關(guān)鍵抑炎因子IL-10失調(diào)的表觀遺傳修飾機(jī)制[2]。人體組織中可映射到大量IBD位點(diǎn)相關(guān)lncRNAs的表達(dá)，距1231個(gè)IBD候選基因5 kb的上下游區(qū)域內(nèi)或周圍有4272個(gè)lncRNAs[26]。與IBD主要相關(guān)的lncRNAs，如：RP11-324I22.2、AC074391.1、AC012370.2、BSN-AS1與IBD相關(guān)；其中CTC-349C3.1與UC相關(guān)，且與IBD相關(guān)的IL21/IL21-AS1位點(diǎn)包含了lncRNA IL21-AS1，其在Th1細(xì)胞與IL-21呈現(xiàn)共表達(dá)。lncRNA的功能或免疫細(xì)胞的特異性表達(dá)影響IBD的發(fā)生發(fā)展[27]。

CD患者較正常人表達(dá)上調(diào)了1211種lncRNAs，下調(diào)了777種。其中上調(diào)倍數(shù)變化較顯著的有GUSBP2，RP5-968D22.1、RP11-68L1.2、RP11-428F8.2、GAS5-AS1，下調(diào)倍數(shù)變化較顯著的有AF113016、ALOX12P2、AGSK1、CTC-338M12.3、AC064871.3[28]。lncRNA DQ786243與CD的嚴(yán)重程度相關(guān)，通過促CREB的磷酸化影響CREB和Foxp3的表達(dá)，調(diào)節(jié)Treg的功能[29]。CD患者結(jié)腸黏膜組織lncRNA與正常人相比，lncRNAs表達(dá)有254種上調(diào)，184種下調(diào)，主要有RP11-731 F5.2、MMP12、RP11-465 L10.10、RP11-44 K6.2表達(dá)上調(diào)，而主要有DPP10-AS1、PDZK1P2、DIO3OS、ANRIL（CDKN2B-AS1）下調(diào)，這些差異表達(dá)的lncRNAs可能成為CD診斷與治療的的生物學(xué)標(biāo)記[30]。

UC患者較正常人結(jié)腸組織有370種lncRNAs表達(dá)上調(diào)，主要有RP11-44 K6.2、MMP12、RP11-465 L10.10、KIF9-AS1；375種下調(diào)，主要有ANRIL（CDKN2B-AS1）、PDZK1P2、DPP10-AS1等[30]。通UC活動(dòng)期患者結(jié)腸組織較對(duì)照者有1961中差異表達(dá)lncRNAs，UC活動(dòng)期較非活動(dòng)期有1361種差異表達(dá)lncRNAs，UC非活動(dòng)期較對(duì)照者有287種差異表達(dá)lncRNAs，經(jīng)篩選發(fā)現(xiàn)Lnc RNA IFNG-AS1的表達(dá)差異最明顯，且與IBD易感基因位點(diǎn)SNP rs7134599相關(guān)，其位置與炎性反應(yīng)細(xì)胞因子IFNG鄰近，上游調(diào)節(jié)因子IFNG、IL-1、IL-6、TNF-a、IL-1β在IFNG-AS1高表達(dá)的結(jié)腸組織中被激活；動(dòng)物實(shí)驗(yàn)小鼠UC結(jié)腸組織lnc RNA IFNG-AS1的表達(dá)升高，并正向的調(diào)節(jié)IFNG的表達(dá)，說明IFNG-AS1可能通過調(diào)節(jié)關(guān)鍵炎性反應(yīng)細(xì)胞因子IFNG的水平在UC炎性反應(yīng)中起到重要作用[31]。H19過表達(dá)致對(duì)腸上皮屏障功能的破壞，H19過表達(dá)可能是減少表達(dá)的VDR在UC結(jié)腸組織中的機(jī)制之一，H19和VDR信號(hào)之間的相互作用可能提供UC的潛在治療目標(biāo)[32]。Myc相關(guān)鋅指蛋白調(diào)節(jié)DSS誘導(dǎo)的UC結(jié)腸上皮緊密連接（TJ）蛋白ZO-1和閉合蛋白Occludin，而miR-34c靶向MAZ調(diào)節(jié)其表達(dá)，此外，PlncRNA1和miR-34c結(jié)合在一起調(diào)節(jié)MAZ，ZO-1和Occludin的表達(dá)。PlncRNA1過表達(dá)對(duì)腸上皮屏障功能的保護(hù)作用被miR-34c的過表達(dá)逆轉(zhuǎn)，協(xié)同調(diào)節(jié)腸功能障礙[33]?；顒?dòng)期UC患者乙狀結(jié)腸組織中，有329種lncRNAs上調(diào)，126種lncRNAs下調(diào)，其中上調(diào)最顯著有BC012900、AK001903、AK023330，下調(diào)最顯著有BC029135、CDKN2B-AS1和BC062296，篩選出來的BC012900存在于結(jié)腸上皮和固有層細(xì)胞胞核內(nèi)，采用IL-1β、TNF-α以及病原體相關(guān)的分子模式（Pathogen-associated Molecular Patterns，PAMPs）HKLM（TLR2 ligand）、LPS（TLR4 ligand）、ST-FLA（TLR5 ligand）、ODN2006（TLR9 ligand）、MDP（NOD2 agonist）等炎性反應(yīng)因子刺激結(jié)腸上皮細(xì)胞后BC012900表達(dá)可增加；其位于DUSP4的下游，兩者由相同的啟動(dòng)區(qū)域調(diào)節(jié)，但轉(zhuǎn)錄形式和功能不同；BC012900在結(jié)腸上皮細(xì)胞的過表達(dá)顯著抑制了細(xì)胞增殖，增加了細(xì)胞凋亡的易感性，這可能是lncRNA參與UC腸道炎性反應(yīng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，有望成為UC診斷和治療的新靶點(diǎn)[34]。

綜上所述，lncRNA與IBD的發(fā)病密切相關(guān)。課題組前期關(guān)于miRNAs和mRNA研究，發(fā)現(xiàn)運(yùn)用整體觀念的中醫(yī)針灸療法能影響炎癥性腸病結(jié)腸組織差異mRNAs及miRNAs的表達(dá)，可能是通過影響miRNA與mRNA調(diào)控網(wǎng)絡(luò)發(fā)揮作用的[35-37]；也能影響正常大鼠結(jié)腸組織及心肌組織的mRNA表達(dá)譜[38-39]。隨著表觀遺傳修飾研究進(jìn)展，采用高通量測(cè)序及生物信息學(xué)分析的技術(shù)與方法，結(jié)合lncRNAs或有助于深入針灸治療潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩病的效應(yīng)機(jī)制的研究。

4 lncRNAs與針灸治療IBD作用機(jī)制相結(jié)合研究的思考

IBD明確的病因和發(fā)病機(jī)制尚不清楚，目前認(rèn)為遺傳易感性、表觀遺傳修飾、免疫因素、感染、環(huán)境因素是引起慢性腸道炎癥的原因[40]。從細(xì)胞水平和現(xiàn)代分子水平研究，發(fā)現(xiàn)針灸治療IBD的主要通過抗炎免疫發(fā)揮作用的，表觀遺傳修飾可能參與針灸抗炎免疫的調(diào)節(jié)[40-42]。lncRNA是非編碼的一部分，也屬于表觀遺傳修飾的一種。

本課題組前期研究根據(jù)IBD的發(fā)病特點(diǎn)，提出“艾灸溫養(yǎng)脾胃，調(diào)和腸腑氣血”的學(xué)術(shù)觀點(diǎn)，選氣海、足三里、天樞、大腸俞、上巨虛等采用針灸治療，對(duì)CD和UC均治療有效[43-46]。針灸對(duì)IBD的效應(yīng)機(jī)制通過UC和CD大鼠的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究，選氣海、天樞穴，采用針刺和/或艾灸的干預(yù)方法，闡明了針灸對(duì)IBD的抗炎免疫調(diào)節(jié)作用。艾灸可抑制血清IL-8水平及結(jié)腸NF-κB p65和TLR-9蛋白的表達(dá)，上調(diào)抑炎因子IL-10的水平，下調(diào)UC結(jié)腸組織IL-8及ICAM-1 mRNA的表達(dá)，改善炎性反應(yīng)，減輕UC小鼠結(jié)腸黏膜損傷，起到治療作用[47-48]；隔藥灸還能調(diào)節(jié)UC大鼠結(jié)腸TLR/NF-κB信號(hào)通路中的關(guān)鍵細(xì)胞因子蛋白如TLR2、NF-κB、IFN-β等的表達(dá)，促進(jìn)UC結(jié)腸損傷黏膜的修復(fù)[49]。針灸治療CD的研究中，隔藥灸可降低靶器官結(jié)腸黏膜中的炎性反應(yīng)因子TNF-α、TNFR1、SP、NK-1R、MCP-1、IL-8的表達(dá)，從而減輕腸道炎癥，改善組織損傷，抑制腸上皮細(xì)胞凋亡，保護(hù)結(jié)腸上皮屏障，進(jìn)而達(dá)到保護(hù)結(jié)腸的效應(yīng)[50-52]；隔藥灸和電針均可以降低CD大鼠結(jié)腸IGF家族及其受體IGF-1、IGF-1R、IGFBP-5等蛋白的表達(dá)，促進(jìn)結(jié)腸組織結(jié)構(gòu)與功能的恢復(fù)[42]。隔藥灸可下調(diào)CD模型大鼠結(jié)腸黏膜IL-17、IL-23 mRNA的表達(dá)，Treg細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子Foxp3 mRNA的表達(dá)[54]，緩解腸道炎癥；隔藥灸和電針均可下調(diào)UC大鼠結(jié)腸組織IFN-γ和IL-12 mRNA表達(dá)，上調(diào)IL-4和IL-10 mRNA表達(dá)，保持Th1和Th2細(xì)胞間平衡而改善免疫功能[55]；隔藥灸也可降低UC大鼠結(jié)腸TLR4和TNF-α蛋白及其mRNA表達(dá)，控制其介導(dǎo)的炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)，以上初步闡釋了針灸對(duì)IBD的抗炎免疫功能。但針灸的抗炎免疫調(diào)節(jié)作用是怎么發(fā)生的，緩解IBD的臨床療效是否受其他因素的影響，表觀遺傳修飾的非編碼RNA中的lncRNA是否參與了針灸抗炎免疫的調(diào)節(jié)還需要進(jìn)一步的探討，該機(jī)制的闡明將有助于提高針灸的臨床療效。

lncRNA是基因在轉(zhuǎn)錄過程中的表達(dá)產(chǎn)物之一，多種lncRNA能通過一系列調(diào)控作用對(duì)機(jī)體的免疫炎性反應(yīng)（包括IBD的發(fā)生發(fā)展）有重要作用，那么對(duì)lncRNA表達(dá)的調(diào)控也可能是針灸治療IBD的關(guān)鍵機(jī)制。因此，可借鑒現(xiàn)代分子生物學(xué)研究方法，同時(shí)將其與針灸學(xué)相結(jié)合，運(yùn)用基因芯片、高通量測(cè)序和生物信息學(xué)分析技術(shù)和方法，篩選IBD病理狀態(tài)下差異表達(dá)的lncRNAs及針灸能有效逆轉(zhuǎn)的lncRNAs，以深入闡釋IBD的發(fā)病機(jī)制與針灸治療IBD的效應(yīng)機(jī)制。這將從整體水平揭示lncRNAs在針灸對(duì)IBD療效機(jī)制中的作用，有助于中醫(yī)整體觀念理論的補(bǔ)充，也有利于針灸學(xué)的現(xiàn)代研究有更高層次的發(fā)展。

5 思考與展望

非編碼RNA在表觀遺傳調(diào)控中扮演了重要的角色[56-57]，lncRNA作為非編碼RNA的一種，其調(diào)控作用也逐漸引起人們廣泛的關(guān)注。lncRNAs表達(dá)或功能的異?？山閷?dǎo)機(jī)體的免疫應(yīng)答，促進(jìn)或抑制炎性反應(yīng)，IBD中差異表達(dá)的lncRNAs也提示其在IBD的發(fā)生發(fā)展中有著重要作用。因此，深入探討lncRNAs的功能及其在IBD中的免疫調(diào)控作用，可從表觀遺傳、轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的角度開展研究，也可為IBD的臨床診斷、靶向治療等提供新方法。此外，結(jié)合整體觀念和辨證論治，針灸臨床采用溫養(yǎng)脾胃，調(diào)和腸腑氣血法治療IBD，其療效肯定，應(yīng)建立療效評(píng)價(jià)體系，同時(shí)從lncRNA-miRNA-mRNA調(diào)控網(wǎng)絡(luò)引入中醫(yī)整體觀念，研究針灸調(diào)和陰陽(yáng)及其抗炎免疫的作用機(jī)制。

另一方面，lncRNA與mRNA均為基因轉(zhuǎn)錄后的產(chǎn)物，針灸可通過調(diào)控IBD相關(guān)細(xì)胞因子mRNA的表達(dá)，抑制腸道促炎細(xì)胞因子的釋放，減輕炎癥性腸病黏膜炎性反應(yīng)，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能。那么針灸對(duì)IBD炎癥的免疫調(diào)節(jié)作用是否受相關(guān)的lncRNA調(diào)控免疫炎性反應(yīng)因子的轉(zhuǎn)錄有關(guān)，值得深入研究。因此，我們將結(jié)合臨床研究和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，通過對(duì)IBD患者和健康者結(jié)腸黏膜lncRNA和mRNA表達(dá)譜進(jìn)行篩選和比較。1）研究病理狀態(tài)下結(jié)腸黏膜的差異lncRNAs和mRNAs，采用生物信息學(xué)的方法分析lncRNA和mRNA的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，擬揭示IBD結(jié)腸黏膜特異性lncRNAs和mRNAs，為IBD的生物標(biāo)志及臨床靶向診斷和治療提供科學(xué)依據(jù)；2）采用原位雜交和非編碼RNA干擾的方式深入研究IBD特異性lncRNA調(diào)控mRNA的作用機(jī)制，擬闡釋IBD的部分發(fā)病機(jī)制；3）在明確針灸治療IBD有效的基礎(chǔ)上，觀察針灸對(duì)IBD特異性lncRNA-mRNA調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)，擬明確針灸影響的結(jié)腸黏膜炎癥相關(guān)lncRNAs對(duì)免疫炎性反應(yīng)因子調(diào)節(jié)機(jī)制，擬闡釋中醫(yī)針灸治療IBD的部分效應(yīng)機(jī)制，為針灸的臨床應(yīng)用提供科學(xué)的臨床資料和理論依據(jù)。

將中醫(yī)針灸學(xué)與現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)相結(jié)合必然可為針灸學(xué)發(fā)展提供廣闊的前景。只有運(yùn)用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)與手段，才能客觀的闡釋中醫(yī)針灸學(xué)理論及其作用機(jī)制，充分發(fā)揮針灸在治療IBD臨床療效方面的優(yōu)勢(shì)。這不僅能有利于從基因調(diào)控方面揭示針灸對(duì)IBD的作用機(jī)制，也對(duì)針灸治療IBD的基礎(chǔ)及臨床研究起到很大的推動(dòng)作用。

參考文獻(xiàn)

[1]Ao R，Wang Y，Zhnag DR，et al.Role of TLR4 rs4986790A>G and rs4986791C>T Polymorphisms in the Risk of Inflammatory Bowel Disease[J].Gastroenterol Res Pract，2015，2015：141070.

[2]Bai AH，Wu WK，Xu L，et al.Dysregulated Lysine Acetyltransferase 2B Promotes Inflammatory Bowel Disease Pathogenesis Through Transcriptional Repression of Interleukin-10[J].J Crohns Colitis，2016，10（6）：726-734.

[3]Ponting C，Oliver P，Reik W.Evolution and Functions of Long Noncoding RNAs[J].Cell，2009，136（4）：629-641.

[4]Wapinski O，Chang HY.Long noncoding RNAs and human disease[J].Trends Cell Biol，2011，21（6）：354-361.

[5]Liao Q，Liu C，Yuan X，et al.Large-scale prediction of long non-coding RNA functions in a coding-non-coding gene co-expression network[J].Nucleic Acids Res，2011，39（9）：3864-3878.

[6]Kevin C.Wang，Howard Y.Chang.Molecular mechanisms of long noncoding RNAs[J].Mol Cell，2011，43（6）：904-914.

[7]Anderson DM，Anderson KM，Chang CL，et al.A micropeptide encoded by a putative long noncoding RNA regulates muscle performance[J].Cell，2015，160（4）：595-606.

[8]Maass PG，Luft FC，Bhring S.Long non-coding RNA in health and disease[J].J Mol Med（Berl），2014，92（4）：337-346.

[9]Wu GC，Pan HF，Leng RX，et al.Emerging role of long noncoding RNAs in autoimmune diseases[J].Autoimmun Rev，2015，14（9）：798-805.

[10]Chen G，Wang Z，Wang D，et al.LncRNA Disease：a database for long-non-coding RNA-associated diseases[J].Nucleic Acids Res，2013，41（Database issue）：D983-986.

[11]Ning S，Wang P，Ye J，et al.A global map for dissecting phenotypic variants in human lincRNAs[J].Eur J Hum Genet，2013，21（10）：1128-1133.

[12]沈自尹.系統(tǒng)生物學(xué)和信息醫(yī)學(xué)在中西醫(yī)結(jié)合中的應(yīng)用[J].中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報(bào)，2006，4（2）：111-113.

[13]Carpenter S，F(xiàn)itzgerald KA.Transcription of Inflammatory Genes：Long Noncoding RNA and Beyond[J].J Interferon Cytokine Res，2015，35（2）：79-88.

[14]Wang P，Xue Y，Han Y，et al.The STAT3-binding long noncoding RNA lnc-DC controls human dendritic cell differentiation[J].Science，2014，344（6181）：310-313.

[15]Spurlock CF，Tossberg JT，Guo Y，et al.Expression and functions of long noncoding RNAs during human T helper cell differentiation[J].Nat Commun，2015，6：6932.

[16]Imamura K，Imamachi N，Akizuki G，et al.Long Noncoding RNA NEAT1-Dependent SFPQ Relocation from Promoter Region to Paraspeckle Mediates IL8 Expression upon Immune Stimuli[J].Mol Cell，2014，53（3）：393-406.

[17]張飛飛，沈南，唐元家.Lnc RNA NEAT1參與TLR2介導(dǎo)的炎癥因子的表達(dá)[J].現(xiàn)代免疫學(xué)，2015，35（4）：316-321.

[18]Krawczyk M，Emerson BM.p50-associated COX-2 extragenic RNA（PACER）activates COX-2 gene expression by occluding repressive NF-kappaB complexes[J].Elife，2014，3：e01776.

[19]Hu G，Gong AY，Wang Y，et al.LincRNA-Cox2 Promotes Late Inflammatory Gene Transcription in Macrophages through Modulating SWI/SNF-Mediated Chromatin Remodeling[J].J Immunol，2016，196（6）：2799-2808.

[20]Li Z，Chao TC，Chang KY，et al.The long noncoding RNA THRIL regulates TNF-α expression through its interaction with hnRNPL[J].Proc Natl Acad Sci USA，2014，111（3）：1002-1007.

[21]Rapicavoli N，Qu K，Zhang J.A mammalian pseudogene lncRNA at the interface of inflammation and anti-inflammatory therapeutics[J].eLife Science，2013，2：e00762.

[22]Cui H，Xie N，Tan Z，et al.The human long noncoding RNA lnc-IL7R regulates the inflammatory response[J].Eur J Immunol，2014，44（7）：2085-2095.

[23]Atianand MK，Hu W，Satpathy AT，et al.A Long Noncoding RNA lincRNA-EPS Acts as a Transcriptional B rake to Restrain Inflammation[J].Cell，2016，165（7）：1672-1685.

[24]吳煥淦，翁志軍，劉慧榮，等.基于免疫相關(guān)性疾病的艾灸鎮(zhèn)痛與抗炎免疫研究[J].世界中醫(yī)藥，2016，11（12）：2505-2514.

[25]Van der Goten J，Vanhove W，Lemaire K，et al.Integrated miRNA and mRNA expression profiling in inflamed colon of patients with ulcerative colitis[J].PLoS One，2014，9（12）：e116117.

[26]Mirza AH，Kaur S，Brorsson CA，et al.Effects of GWAS-Associated Genetic Variants on lncRNAs within IBD and T1D Candidate Loci[J].PLoS One，2014，9（8）：e105723.

[27]Hrdlickova B，Kumar V，Kanduri K，et al.Expression profiles of long non-coding RNAs located in autoimmune disease-associated regions reveal immune cell-type specificity[J].Genome Med，2014，6（10）：88.

[28]Dong Chen，Jiang Liu，Hui-Ying Zhao，et al.Plasma long noncoding RNA expression profile identified by microarray in patients with Crohn′s disease[J].World J Gastroenterol，2016，22（19）：4716-4731.

[29]Qiao YQ，Huang ML，Xu AT，et al.LncRNA DQ786243 affects Treg related CREB and Foxp3 expression in Crohn′s disease[J].J Biomed Sci，2013，20：87.

[30]Mirza AH，Berthelsen CH，Seemann SE，et al.Transcriptomic landscape of lncRNAs in inflammatory bowel disease[J].Genome Med，2015，7（1）：39.

[31]Padua DM，Mahurkar-Joshi S，Law IK，et al.A long noncoding RNA signature for ulcerative colitis identifies IFNG-AS1 as an enhancer of inflammation[J].Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol，2016，311（3）：G446-457.

[32]Chen SW，Wang PY，Liu YC，et al.Effect of Long Noncoding RNA H19 Overexpression on Intestinal Barrier Function and Its Potential Role in the Pathogenesis of Ulcerative Colitis[J].Inflamm Bowel Dis，2016，22（11）：2582-2592.

[33]Chen T，Xue H，Lin R，et al.MiR-34c and PlncRNA1 mediated the function of intestinal epithelial barrier by regulating tight junction proteins in inflammatory bowel disease[J].Biochem Biophys Res Commun，2017 Jan 30.pii：S0006-291X（17）30174-2.doi：10.1016/j.bbrc.2017.01.115.

[34]Wu F，Huang Y，Dong F，et al.Ulcerative Colitis-Associated Long Noncoding RNA，BC012900，Regulates Intestinal Epithelial Cell Apoptosis[J].Inflamm Bowel Dis，2016，22（4）：782-795.

[35]Wu Luyi，Huang Y，Wu Huangan，et al.Su1859 Alterations in microRNA Expression Profiles in Inflamed and Non-Inflamed Ascending Colon Mucosae of Adult Patients With Active Crohn′s Disease[J].Gastroenterology，2016，150（4）：S572.

[36]Huang Y，Ma Z，Cui YH，et al.Effects of Herb-Partitioned Moxibustion on the miRNA Expression Profiles in Colon from Rats with DSS-Induced Ulcerative Colitis[J].2017，2017：1767301.

[37]Wei K，Zhang D，Hong J，et al.Herb-Partitioned Moxibustion and the miRNAs Related to Crohn′s Disease：A Study Based on Rat Models[J].Evid Based Complement Alternat Med，2015，2015：265238.

[38]黃艷，顧沐恩，翁志軍，等.逆灸“天樞”穴干預(yù)大鼠結(jié)腸組織基因表達(dá)譜的實(shí)驗(yàn)研究[J].世界中醫(yī)藥，2016，11（12）：2549-2553.

[39]Huang Y，Lu SF，Hu CJ，et al.Electro-acupuncture at Neiguan pretreatment alters genome-wide gene expressions and protects rat myocardium against ischemia-reperfusion[J].Molecules，19（10）：16158-16178.

[40]Ventham NT，Kennedy NA，Nimmo ER，et al.Beyond gene discovery in inflammatory bowel disease：the emerging role of epigenetics[J].Gastroenterology，2013，145（2）：293-308.

[41]黃艷，竇傳字，黃任佳，等.從表觀遺傳修飾角度探討艾灸對(duì)炎癥性腸病的調(diào)控機(jī)制[J].中國(guó)組織工程研究，2015，19（2）：294-299.

[42]黃艷，竇傳字，劉慧榮，等.表觀遺傳修飾與潰瘍性結(jié)腸炎[J].中國(guó)組織工程研究，2015，19（7）：1099-1103.

[43]Joos S，Wildau N，Kohnen R，et al.Acupuncture and moxibustion in the treatment of ulcerative colitis：a randomized controlled study[J].Scand J Gastroenterol，2006，41（9）：1056-1063.

[44]Joos S，Brinkhaus B，Maluche C，et al.Acupuncture and moxibustio in the treatment ofactive Crohn′s disease：a randomized controlled study[J].Digestion，2004，69（3）：131-139.

[45]Bao CH，Zhao JM，Liu HR，et al.Randomized controlled trial：moxibustion and acupuncture for the treatment of Crohn′s disease[J].World J Gastroenterol，2014，20（31）：11000-11011.

[46]Xu YL，Du YH，Xu XM，et al.Observation on therapeutic effect of herb-partitioned spread moxibustion for treatment of chronic nonspecific ulcerative colitis[J].Chinese Acupuncture and Moxibustion，2010，30（4）：289-291.

[47]Han Y，Ma TM，Lu ML，et al.Role of moxibustion in inflammatory responses during treatment of rat ulcerative colitis[J].World J Gastroenterol，2014，20（32）：11297-11304.

[48]Zhou EH，Liu HR，Wu HG，et al.Down-regulation of protein and mRNA expression of IL-8 and ICAM-1 in colon tissue of ulcerative colitis patients by partition-herb moxibustion[J].Dig Dis Sci，2009，54（10）：2198-2206.

[49]Wang X，Liu Y，Dong H，et al.Herb-Partitioned Moxibustion Regulates the TLR2/NF-κB Signaling Pathway in a Rat Model of Ulcerative Colitis[J].Evid Based Complement Alternat Med，2015，2015：949065.

[50]Bao CH，Wu LY，Wu HG，et al.Moxibustion inhibits apoptosis and tumor necrosis factor-alpha/tumor necrosis factor receptor 1 in the colonic epithelium of Crohn′s disease model rats[J].Dig Dis Sci，2012，57（9）：2286-2295.

[51]施征，張慧，王曉梅，等.艾灸對(duì)克羅恩病大鼠結(jié)腸黏膜MCP-1和IL-8蛋白表達(dá)的影響[J].上海針灸雜志，2009，28（9）：497-501.

[52]劉慧榮，華雪桂，施茵，等.針灸對(duì)克羅恩病大鼠P物質(zhì)與神經(jīng)激肽1受體表達(dá)的影響[J].上海中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，19（2）：48-51.

[53]馬曉芃，安彩萍，吳煥淦，等.隔藥灸和電針對(duì)克羅恩病大鼠結(jié)腸IGF-I、IGF-IR、IGFBP-5表達(dá)的影響[J].上海針灸雜志，2008，27（5）：37-40.

[54]Weng ZJ，Wu LY，Lü TT，et al.Regulatory effects of herbal cake-partitioned moxibustion on the expressions of IL-17，IL-23 and their mRNAs in the colon of rats with Crohn′s disease[J].J Acupunct Tuina Sci，2016，14（3）：156-163.

[55]陳艷萍.針灸對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠Th1/Th2免疫平衡的影響[J].針刺研究，2016，41（3）：210-214.

[56]Agirre X，Martínez-Climent Já，Odero MD，et al.Epigenetic regulation of miRNA genes in acute leukemia[J].Leukemia，2012，26（3）：395-403.

[57]Adefuin AM，Kimura A，Noguchi H，et al.Epigenetic mechanisms regulating differentiation of neural stem/precursor cells[J].Epigenomics，2014，6（6）：637-649.