李艷麗，辛宇波，武文學(xué)，肖 帥*

(1.吉林省疾控中心環(huán)境所，吉林 長春130062；2.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院；3.長春市雙陽區(qū)醫(yī)院)

RacGAP1與Cyclin-D1在胃癌組織中的表達及意義

李艷麗1，辛宇波2，武文學(xué)3*，肖 帥2*

(1.吉林省疾控中心環(huán)境所，吉林 長春130062；2.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院；3.長春市雙陽區(qū)醫(yī)院)

Rac GTP酶活性蛋白-1(RacGAP1)是GTP酶活性蛋白家族的一員,研究發(fā)現(xiàn)RacGAP1在胃癌組織中高表達，且RacGAP1高表達的患者預(yù)后較差[1]。Pliarchopoulou等人的研究發(fā)現(xiàn)RacGAP1可以促進乳腺癌細胞的分裂與增殖[2]。細胞周期蛋白D1(Cyclin D1)已經(jīng)被證實在細胞周期的調(diào)控中起到重要作用，可以促進腫瘤細胞的增殖[3]。本文應(yīng)用免疫組織化學(xué)法和western blot檢測RacGAP1與Cyclin D1兩種蛋白在胃癌組織和正常胃黏膜組織中的表達情況，并分析二者之間及與臨床病理資料的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料

實驗組174例均選自我院基本外科2010年1月至12月收治的胃癌患者，其中男93例，女81例，年齡39-81歲，平均年齡(67.3±10.1)歲。所有患者均行胃癌根治術(shù)(D2清掃)，術(shù)后病理均為腺癌，其中低分化101例，中分化63例，高分化10例。腫瘤部位：胃竇/幽門79例，胃體56例，胃底/賁門39例。納入標準：(1)均為首發(fā)胃癌；(2)術(shù)前未接受過任何放療、化療；(3)無其它惡性腫瘤病史；(4)病理資料完整。排除標準：(1)因腫瘤合并穿孔、出血，行急診手術(shù)者；(2)合并其它器官(如心、肝、腎等)功能不全者；(3)合并免疫系統(tǒng)疾病者[4]。另選取門診胃鏡檢查，病理為非萎縮性胃炎者100例作為對照組，其中男68例，女42例，年齡31-79歲，平均年齡(61.2±10.5)歲。病理取材位置：胃竇/幽門46例，胃體37例，胃底/賁門17例。兩組受試者在性別比例、平均年齡等一般資料上無顯著差異(P>0.05)。此次研究經(jīng)過醫(yī)院倫理委員會審查通過，所有患者均在術(shù)前告知實驗內(nèi)容，獲得同意后簽署知情同意書1份。

1.2方法

應(yīng)用免疫組織化學(xué)法(S-P法)檢測組織標本中RacGAP1與Cyclin D1的表達情況。手術(shù)切除胃組織后，避開腫瘤中心處壞死組織，取大小為0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm腫瘤組織作為實驗組標本，對照組標本選用胃鏡下活檢的胃黏膜組織。用4%甲醛固定后，石蠟包埋，切成3 μm厚的4張連續(xù)切片。RacGAP1抗體選用兔抗人RacGAP1多克隆抗體(貨號ab90550)，Cyclin D1抗體選用鼠抗人Cyclin D1單克隆抗體(PL0502539)，陰性對照抗體選用PBS緩沖液，S-P試劑與上述抗體均購自美國Abcam公司(上海)。陽性對照組為已知陽性切片。所有操作均嚴格按照說明書進行。

1.3判斷標準

400倍鏡下隨機選取3個互不重疊的視野，計數(shù)視野內(nèi)細胞總數(shù)與染色細胞數(shù)，計算染色細胞數(shù)所占比例。RacGAP1與 Cyclin D1均主要在細胞核中表達。根據(jù)染色細胞比例與染色程度進行評分：0分：<10%；1分：11%-50%；2分：>50%。0分：無染色；1分：淡黃色；2分：棕黃色；3分：黃褐色。兩項評分相加，陰性(—)：<2分；弱陽性(+)：2-3分；強陽性(++)：4-5分，陽性率：(弱陽性數(shù)+強陽性)/總數(shù)×100%。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1RacGAP1與CyclinD1在胃癌組織中的表達

情況RacGAP1與Cyclin D1均主要表達在細胞核內(nèi)，見圖1。 RacGAP1與Cyclin D1在胃癌組織中的陽性表達率顯著高于正常胃黏膜組織(P<0.05)。見表1。

2.2RacGAP1及CyclinD1的表達與臨床資料的關(guān)系RacGAP1在胃癌組織的表達與腫瘤病理T分期、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移以及腫瘤部位有關(guān)(P<0.05)，而與性別、年齡、分化程度無關(guān)(P>0.05)；Cyclin D1在胃癌組織中的表達與腫瘤病理T分期、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，而與性別、年齡、分化程度和腫瘤部位無關(guān)(P>0.05)。見表2。

2.3RacGAP1與CyclinD1在胃癌組織中表達的相關(guān)性174例胃癌標本中，77例RacGAP1與Cyclin D1均為陽性，33例RacGAP1與Cyclin D1均為陰性，RacGAP1與Cyclin D1表達呈正相關(guān)(r=0.708，P<0.05)，見表3。

圖1400倍鏡下RacGAP1與CyclinD1在胃癌組織中的表達情況(A：RacGAP1B：CyclinD1)

表1 RacGAP1與Cyclin D1在胃癌組織中的表達情況

注：與對照組相比，*P<0.05

表2 RacGAP1及Cyclin D1的表達與臨床資料的關(guān)系

表3 RacGAP1與Cyclin D1在胃癌組織中表達的相關(guān)性

3 討論

研究發(fā)現(xiàn)RacGAP1在肝癌、乳腺癌等組織中有過表達的情況[5，6]，Kin等人[7]的研究結(jié)果認為RacGAP1可能通過縮短細胞周期從而促進癌細胞的增殖，但具體機制尚不清楚。當細胞中Cyclin D1過表達時，RNA與蛋白質(zhì)合成速度加快，細胞G1期時長顯著縮短，迅速進入S期，從而促進細胞增殖[8]。羅楓等人[9]在結(jié)腸癌中、劉博[8]在食管癌中也發(fā)現(xiàn)存在Cyclin D1高表達的現(xiàn)象。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Rac GTP酶活性蛋白-1在胃癌組織中的陽性表達率顯著高于正常胃黏膜組織(P<0.05)，Cyclin D1在胃癌組織中也呈高表達(P<0.05)，這與之前的研究結(jié)果相似[1]，這提示RacGAP1、Cyclin D1的表達可能與胃癌有關(guān)。應(yīng)用Spearman等級相關(guān)分析法對RacGAP1與Cyclin D1在胃癌組織中表達的相關(guān)性進行檢驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)RacGAP1與Cyclin D1表達呈正相關(guān)(r=0.708，P<0.05)，推測在胃癌組織中，RacGAP1與Cyclin D1可能會相互促進，從而通過縮短細胞周期促進胃癌的發(fā)展。

RacGAP1與臨床資料的關(guān)系表明RacGAP1在胃癌組織的表達與腫瘤病理T分期、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移以及腫瘤部位有關(guān)(P<0.05)，而與性別、年齡、分化程度無關(guān)(P>0.05)，這提示RacGAP1與腫瘤的惡性程度有關(guān)。與Cyclin D1不同的是，胃竇/幽門處腫瘤組織中RacGAP1的陽性表達率顯著高于胃底/賁門與胃體部腫瘤，這可能與幽門螺桿菌的感染有關(guān)。Lorès等人[10]發(fā)現(xiàn)RacGAP1可以通過重構(gòu)細胞骨架、重排細胞極來改變細胞形態(tài)，使癌細胞與正常細胞粘附力降低，從而發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移。Ke等人[11]也認為RacGAP1可以作為評價腦膜瘤患者預(yù)后不良的指標之一。Cyclin D1作為一種細胞周期的正性調(diào)控因子[12，13]，已被大量研究證實參與了胃癌的發(fā)生與發(fā)展，本文結(jié)果發(fā)現(xiàn)Cyclin D1在胃癌組織中的表達與腫瘤病理T分期、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，而與性別、年齡、分化程度和腫瘤部位無關(guān)(P>0.05)。這進一步證實了Cyclin D1可以作為判斷胃癌惡性程度的指標。

綜上所述，RacGAP1與Cyclin D1在胃癌組織中呈高表達，二者可能在胃癌的發(fā)展過程中起到協(xié)同作用。

[1]路 明,劉恒昌,王 權(quán),等.RacGAP1在胃癌中的表達與幽門螺桿菌L型感染的關(guān)系[J].臨床薈萃,2016,31(1):48.

[2]Pliarchopoulou K,Kalogeras KT,Kronenwett R,et al.Prognostic significance of RACGAP1 mRNA expression in high-risk early breast cancer:a study in primary tumors of breast cancer patients participating in a randomized Hellenic Cooperative Oncology Group trial[J].Cancer Chemotherapy and Pharmacology,2013,71(1):245.

[3]崔連艷,楊昭婷,倪衛(wèi)東,等.SOX9在食管鱗癌中的表達及臨床病理學(xué)意義[J].中國實驗診斷學(xué),2017,21(3):386.

[4]韓忠寶,于魏紅,金美玉,等.腹腔鏡胃癌根治術(shù)后不同營養(yǎng)方式對患者免疫功能的影響[J].中國實驗診斷學(xué),2015,19(6):1006.

[5]Wang SM,Ooi LL,Hui KM.Upregulation of Rac GTPase-activating protein 1 is significantly associated with the early recurrence of human hepatocellular carcinoma[J].Clinical Cancer Research,2011,17(18):6040.

[6]Lawson CD,Fan C,Mitin N,et al.Rho GTPase Transcriptome Analysis Reveals Oncogenic Roles for Rho GTPase-Activating Proteins in Basal-like Breast Cancers.[J].Cancer Research,2016,76(13):3826.

[7]Kin ML,Fanny MT,Jenny TX,et al.Activation of GPR30 stimulates GTP-binding of Gαi1 protein to sustain activation of Erk1/2 in inhibition of prostate cancer cell growth and modulates metastatic properties[J].Experimental Cell Research,2017,350(1):199.

[8]劉 博,呂 洋,李 坤,等.TMSG-1和Cyclin D1在食管鱗癌的表達及臨床病理意義[J].實用醫(yī)學(xué)雜志,2016,32(17):2829.

[9]羅 楓,伍世鋼,劉坤平,等.結(jié)直腸癌Stat3表達與細胞增殖、凋亡及預(yù)后的關(guān)系[J].基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床,2016,36(11):1531.

[10]Lorès P,Vernet N,Kurosaki T,et al.Deletion of MgcRacGAP in the male germ cells impairs spermatogenesis and causes male sterility in the mouse[J].Developmental Biology,2014,386(2):419.

[11]Ke HL,Ke RH,Li ST,et al.Expression of RACGAP1 in high grade meningiomas:A potential role in cancer progression[J].Journal of Neuro-Oncology,2013,113(2):327.

[12]姚 楠,孫景秋,張 瓊,等.肝細胞癌中Dkk-3與Cyclin D1的表達及臨床意義[J].臨床與實驗病理學(xué)雜志,2017,33(2):158.

[13]熊 瑋,駱 瑜,董少紅,等.微小RNA-146a上調(diào)cyclinD1表達誘導(dǎo)大鼠血管平滑肌細胞的增殖[J].中國免疫學(xué)雜志,2016,32(7):974.

*通訊作者

1007-4287(2017)12-2138-03

2016-05-13)