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(1.湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬人民醫(yī)院消化內(nèi)科，湖北 十堰 442000 2.湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬人民醫(yī)院藥學(xué)部)

·臨床醫(yī)學(xué)·

I型糖尿病并發(fā)慢性膽囊炎與IL-6基因多態(tài)性的關(guān)聯(lián)研究

吳軍1，尚瑞1*,鄭雪皎2

(1.湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬人民醫(yī)院消化內(nèi)科，湖北 十堰 442000 2.湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬人民醫(yī)院藥學(xué)部)

目的探討I型糖尿病并發(fā)慢性膽囊炎與IL-6基因多態(tài)性的相關(guān)性。方法收集I型糖尿病并發(fā)慢性膽囊炎患者110例和對(duì)照者120例。采用PCR技術(shù)進(jìn)行基因多態(tài)性檢測(cè)，結(jié)合問(wèn)卷調(diào)查等進(jìn)行病例對(duì)照研究。結(jié)果結(jié)果提示病例組CC基因型比例高GG基因型比例低;病例組C等位基因分布較高。單因素分析提示攜帶IL-6 174 C等位基因的OR值為1.357；高血壓現(xiàn)病史的OR值為1.324；多因素Logistics回歸分析結(jié)果提示攜帶IL-6 174 C等位基因、高血壓、肥胖/超重以及飲酒史為潛在危險(xiǎn)因素。結(jié)論IL-6 -174C/G基因多態(tài)性與慢性膽囊炎并發(fā)I型糖尿病患者的易感性可能存在關(guān)聯(lián)。

白細(xì)胞介素-6; 慢性膽囊炎； I型糖尿?。?基因多態(tài)性

慢性膽囊炎常常見(jiàn)于急性或亞急性膽囊炎反復(fù)發(fā)作或膽囊結(jié)石引起的膽囊功能異常，患者可能存在細(xì)菌感染，是臨床上常見(jiàn)的一種慢性炎癥性疾病[1-2]。Ⅰ型糖尿病(Type 1 Diabetes Mellitus,T1DM)也是臨床不容忽視的一種慢性疾病，其發(fā)生更多地與免疫和遺傳因素密切相關(guān)。近年來(lái)很多研究報(bào)道糖尿病患者合并膽囊疾病的發(fā)病率有不斷增高的趨勢(shì)[3-5]。白細(xì)胞介素-6 (interleukin-6,IL-6) 是一種由單核巨噬細(xì)胞分泌的多功能細(xì)胞因子,人類的IL-6 基因定位于7p21,含五個(gè)外顯子和四個(gè)內(nèi)含子,其啟動(dòng)子區(qū)含有多個(gè)不同的調(diào)控元件，IL-6主要在人體的免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮作用，可以參與炎癥反應(yīng)[6-7]。臨床上包括糖尿病以及膽囊疾病在內(nèi)的許多疾病患者都可能出現(xiàn)血清IL-6 水平升高，IL-6 基因具有多態(tài)性,比如其基因啟動(dòng)子區(qū)3個(gè)位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性的分布與慢性乙型肝炎病毒感染、肝細(xì)胞癌等許多肝膽消化系統(tǒng)疾病存在關(guān)聯(lián)，同時(shí)也有不少報(bào)道提示IL-6的基因多態(tài)性與糖尿病及其大血管病變關(guān)聯(lián)密切[6-7]。鑒于IL-6基因多態(tài)性與T1DM并發(fā)慢性膽囊炎的關(guān)聯(lián)究尚鮮有研究涉及，故本研究就此進(jìn)行初步分析討論。

1 材料與方法

1.1一般資料本研究得到本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。將2013年1月至2015年12月在本院治療的T1DM并發(fā)慢性膽囊炎患者110例作為病例組，同時(shí)收集年齡性別可比的120例健康受試者作為對(duì)照者。兩組性別年齡可比，病例組的BMI指數(shù)28.15±3.98 kg/m2,高于對(duì)照組26.86±6.52kg/m2,P<0.05;病例組的高血壓現(xiàn)患例數(shù)65例，構(gòu)成比例為59.09%，高于對(duì)照組的39例(32.50%),P<0.01;病例組的糖尿病家族史比例高于對(duì)照組，分別為60(例占54.55%)和13例(占10.83%),P<0.01;吸煙和飲酒史的比例也為病例組較高，吸煙史病例組15例(占13.64%)對(duì)照組為14例(11.67%)，P<0.05；飲酒史病例組21例(占19.09%)，對(duì)照組10例(8.33%)，P<0.01。詳見(jiàn)表1所示。

表1 研究對(duì)象臨床資料及一般情況的特征分布比較(n,%)

與對(duì)照組比，a:P<0.05，b:P<0.01

1.2診斷標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)慢性膽囊炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)參照該病臨床表現(xiàn)多不典型，有厭油膩食物、腹脹、噯氣、上腹部不適等癥狀，查體無(wú)明顯陽(yáng)性體征等臨床表現(xiàn)，并參考尿膽紅素陽(yáng)性而尿膽原減少，輔以B超等檢查。T1DM的診斷標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)ADA1997年發(fā)布的診斷與分型標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行[9]。排除標(biāo)準(zhǔn)；排除Graves病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、橋本氏甲狀腺炎等自身免疫性疾病。全部受試者均知情同意，并簽署知情同意書。

1.3 PCR法檢測(cè)外周血IL-6 174C/G基因型根據(jù)文獻(xiàn)涉及PCR引物擴(kuò)增目標(biāo)材料，分別以Hin1I酶切前、后的模板DNA，進(jìn)行IL-6 174C/G 基因的擴(kuò)增，擴(kuò)增體系為 20 μL:混勻離心；設(shè)置 RT-PCR 反應(yīng)條件：95 ℃ 10 min，40個(gè)循環(huán)，在ABI StepOne/StepOnePlus 實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀上完成，通過(guò)軟件分析擴(kuò)增情況，循環(huán)結(jié)束后進(jìn)行熔解曲線分析。每個(gè)樣品設(shè)兩個(gè)復(fù)孔，結(jié)果取其平均值。計(jì)算基因型頻率和等位基因頻率，并結(jié)合問(wèn)卷調(diào)查和臨床檢查的相關(guān)信息進(jìn)行病例對(duì)照分析研究。研究對(duì)象外周靜脈血5 mL，EDTA抗凝，-20 ℃保存?zhèn)溆糜谠噭┖蟹ㄑ夯蚪M DNA提取。

2 結(jié) 果

2.1血IL-6 174G/C基因多態(tài)性本研究中，病例組和對(duì)照組中IL-6三種基因型的分布特征比較結(jié)果提示存在差別，病例組CC基因型比例高，比例為40.91%，對(duì)照組為28.33%，P<0.05;而GG基因型病例組為7.27%，對(duì)照組為19.17%，P<0.05;此外，C等位基因分布在病例組為52.73%，對(duì)照組為15.00%，P<0.01。如表2所示。

表2 兩組人群血IL-6 174G/C基因多態(tài)性比較(n,%)

與對(duì)照組比，a:P<0.05，b:P<0.01

2.2影響T1DM并慢性膽囊炎的潛在危險(xiǎn)因素分析單因素分析結(jié)果提示攜帶IL-6 174 C等位基因的OR值為1.357(1.037～1.776)；高血壓現(xiàn)病史的OR值為1.324(1.187～1.476)；超重或肥胖以及飲酒史也都表現(xiàn)為危險(xiǎn)因素，OR值分別為1.165(1.087～1.249)和1.113(1.046～1.184)；在單因素分析的結(jié)果基礎(chǔ)上，并結(jié)合臨床實(shí)際，對(duì)可能影響本病發(fā)生的的潛在因素進(jìn)行多因素Logistics回歸分析，結(jié)果提示攜帶IL-6 174 C等位基因、高血壓以及肥胖/超重為潛在危險(xiǎn)因素，OR值及其95%可信區(qū)間飲酒史的OR值詳見(jiàn)表3。

3 討 論

白細(xì)胞介素是細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)中重要成分之一，是具有多種功能的細(xì)胞因子，在人體中白介素會(huì)通過(guò)復(fù)雜的細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)途徑調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、凋亡、轉(zhuǎn)化等過(guò)程[6-7]。IL-6 的基因多態(tài)性一方面可能來(lái)源于基因組中重復(fù)序列拷貝數(shù)的差異,另一方面也可能來(lái)源于單拷貝序列的變異[8]。最近越來(lái)越多的研究結(jié)果顯示，IL-6相關(guān)信號(hào)傳導(dǎo)通路異常激活、過(guò)度表達(dá)減弱或缺失等與眾多慢性病的發(fā)生以及發(fā)展過(guò)程均存在關(guān)聯(lián)。另有研究提示，在慢性結(jié)石性膽囊炎組織中，重組人猬因子SHH(Sonic Hedgehog,SHH)信號(hào)通路異常激活與膽囊上皮細(xì)胞的過(guò)度增殖以及惡變可能存在聯(lián)系，同時(shí)鈣粘蛋白抑癌基因表達(dá)下調(diào)可能導(dǎo)致膽囊上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能破壞，與此同時(shí)IL-6的表達(dá)上調(diào)有可能引起膽囊上皮細(xì)胞的過(guò)度增殖，這三者存在一定相關(guān)性[9]。不同種族背景的人群中對(duì)T1DM患者IL-6 174 GG 基因型頻率進(jìn)行分析可見(jiàn)明顯升高趨勢(shì)以及CC 基因型的明顯減低，另也有研究結(jié)果支持糖尿病發(fā)生危險(xiǎn)性與IL-6 基因-174 G/C 多態(tài)性沒(méi)有明顯相關(guān)[10-11]。

表3 IL-6 174G/C基因多態(tài)性等因素與T1DM并慢性膽囊炎的關(guān)聯(lián)分析

本研究結(jié)果提示病例組CC基因型比例高而GG基因型比例低，而C等位基因分布較高;此外，多因素Logistics回歸分析提示攜帶IL-6 -174 C等位基因、高血壓、肥胖/超重以及飲酒史為潛在危險(xiǎn)因素，OR值分別為1.258,1.225,1.167和1.111。進(jìn)一步證明IL-6 -174C/G基因多態(tài)性與慢性膽囊炎并發(fā)1型糖尿病患者的易感性存在聯(lián)系，且C等位基因是潛在危險(xiǎn)因素，同時(shí)也提示血壓異常、肥胖以及飲酒等環(huán)境因素也對(duì)T1DM并發(fā)慢性膽囊炎的發(fā)病也是促發(fā)因素，這與其他研究一致[12]。

綜上，IL-6 174C/G基因多態(tài)性與T1DM并發(fā)慢性膽囊炎患者的易感性確實(shí)存在著一定的關(guān)聯(lián)，且受到一些環(huán)境因素的影響。

[1] 王平,陳曉霞,王興鵬.細(xì)胞因子在小鼠慢性胰腺炎中的表達(dá)及其意義[J].臨床薈萃,2013,28(1):53-55.

[2] 溫言,劉國(guó)暉,葉研碩,等.2型糖尿病與膽囊炎相關(guān)因素分析[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2012,22(22):5023-5024.

[3] 秦德友,康俊玲,程超,等.舒血寧注射液治療急性腦梗死的療效及其對(duì)血清IL-6、IL-8、CRP水平的影響[J].海南醫(yī)學(xué),2014,25(12):1769-1771.

[4] 侯小飛,高方友.IL-6跨信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)作用與其相關(guān)疾病的研究進(jìn)展[J].海南醫(yī)學(xué),2016,27(16):2667-2670.

[5] 蘇國(guó)生,羅曉璐,黎建源.白介素-6基因多態(tài)性與乙肝后肝癌的相關(guān)性研究進(jìn)展[J].海南醫(yī)學(xué),2012,23(11):120-122.

[6] 中華醫(yī)學(xué)會(huì)糖尿病學(xué)分會(huì).中國(guó)1型糖尿病胰島素治療指南[J].中國(guó)糖尿病雜志,2016,8(10):591-597.

[7] Kubaszek A,Pihlajamaki J,Punnonen K,et al.The C-174G promoter polymorphism of the IL-6 gene affects energy expenditure and insulin sensitivity[J].Diabetes,2003,52(3):558-561.

[8] Kubaszek A,Pihlajamaki J,Komarovski V,et al.Promoter polymorphisms of the TNF-alpha (G-308A)and IL-6 (C-174G)genes predict the conversion from impaired glucose tolerance to type 2 diabet es:the finnish diabetes prevention study[J].Diabetes,2003,52(10):1872-1876.

[9] Hayakawa T,Takamura T,Hisada A,et al.IL-6 gene polymorphism -174G C does not contribute substantially to hyperlipidaemia and typeⅡdiabetes mellitus in Japanese men[J].Diabetologia,2002,45(3):453-454.

[10] Testa R,Olivieri F,Bonfigli AR,et al.Interleukin-6-174 G/C polymorphism affects the association between IL-6 plasma levels and insulin resistance in type 2 diabetic patients[J].Diabetes Res Clin Pract,2006,71(3):299-305.

[11] Bettaieb A,Koike S,Chahed S,et al.Pancreatic protein tyrosine phosphatase 1B deficiencyeExacerbates acute pancreatitis in mice[J].Am J Pathol,2016,186(8):2043-2054.

[12] Gillies N,Pendharkar S A,Asrani V M,et al.Interleukin-6 is associated with chronic hyperglycemia and insulin resistance in patients after acute pancreatitis[J].Pancreatology,2016,16(5):748-755.

10.15972/j.cnki.43-1509/r.2017.04.016

2016-09-26；

2017-05-02

*通訊作者，E-mail:shangree@126.com.

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