周恩華

摘 要：本文主要利用薄層色譜法來對(duì)口服溶液中具有的黃連、石斛物質(zhì)進(jìn)行了檢測(cè)；利用RP-HPLC法將鹽酸小檗堿當(dāng)作主要指標(biāo)對(duì)其含量進(jìn)行了詳細(xì)的檢測(cè)。無論是對(duì)定性還是對(duì)定量的檢測(cè)使用的方法都較為簡單，操作方便，并且在制劑的質(zhì)量控制方面可以得到廣泛的使用。

關(guān)鍵詞：石斛堿；RP-HPLC法；薄層色譜法

所謂清熱解讀口服液，主要是由黃連、石斛等多種中藥共同組成。本文筆者依據(jù)多年經(jīng)驗(yàn)，對(duì)該口服液里面含有的黃連、石斛這兩種重要采取薄層色譜的方法進(jìn)行了分別試驗(yàn)，并且還使用了RP-HPLC法對(duì)該制劑里面含有的鹽酸小檗堿進(jìn)行了檢測(cè)，并建立相應(yīng)的控制標(biāo)準(zhǔn)。

1 薄層色譜法定性鑒別

1.1 石斛的鑒別

實(shí)驗(yàn)人員需要通過精密的稱量提取10ml的口服液，然后放入到一個(gè)為60ml的分液漏斗中對(duì)液體進(jìn)行分離，這個(gè)時(shí)候需要添加4次的氯仿進(jìn)行萃取，無論哪一次都需要控制在10ml的范圍。當(dāng)實(shí)驗(yàn)人員將萃取液進(jìn)行合并以后，通過濃縮的方式得到1ml的劑量當(dāng)作相應(yīng)的供試液。緊接著實(shí)驗(yàn)人員需要另外提取該口服液里面存在的陰性樣品經(jīng)過加工得到相應(yīng)的陰性對(duì)照液。不僅僅如此，需要將1mg/ml的石斛堿具有的氯仿溶液當(dāng)作相應(yīng)的對(duì)照品溶液。這個(gè)時(shí)候采取薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，分別提取的溶液含量為10μm，然后再滴入到相同的薄層板上面，這個(gè)時(shí)候?qū)⒈?氯仿-甲醇（15：10：1）當(dāng)作相應(yīng)的展開劑，在經(jīng)過蒸汽充分飽和的情況下進(jìn)行展開，當(dāng)展開的距離在15cm的時(shí)候提取出來，并做好曬干處理。接著另外提取已經(jīng)改良成功的碘化秘鉀試劑顯色，并且會(huì)和對(duì)照品色譜位置的上面呈現(xiàn)出一樣的斑點(diǎn)。所獲得的結(jié)果請(qǐng)看圖1所示。

1.2 黃連的鑒別

實(shí)驗(yàn)人員取鑒別石斛項(xiàng)下面的供試品液當(dāng)作相應(yīng)的供試液，然后另外提取該口服液當(dāng)中的陰性樣品加工成相應(yīng)的陰性對(duì)照液，并且還需要將相關(guān)的甲醇溶液當(dāng)作對(duì)照品溶液。這個(gè)時(shí)候?qū)嶒?yàn)人員就需要利用薄層色譜法進(jìn)行（同前）進(jìn)行試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)人員會(huì)依據(jù)上述的方法提取三種溶液，分別提取的溶液含量為10μm，然后再滴入到相同的薄層板上面，這個(gè)時(shí)候?qū)⒄〈?醋酸-水（7：1：2）當(dāng)作相應(yīng)的展開劑，當(dāng)展開的距離在15cm的時(shí)候提取出來，并做好曬干處理。等到完全曬干以后，實(shí)驗(yàn)人員再將其放置到紫外燈（365nm）的距離下進(jìn)行觀察，這個(gè)時(shí)候就可以看到圖2A。接著，實(shí)驗(yàn)人員將苯-醋酸乙酯-甲醇-異丙醇-濃氨水（6：3：1.5：1.5：0.5）當(dāng)作相應(yīng)的展開劑，當(dāng)經(jīng)過相關(guān)設(shè)備充分作用下展開的距離在15cm的時(shí)候提取出來，并做好曬干處理。等到完全曬干以后，實(shí)驗(yàn)人員再將其放置到紫外燈（365nm）的距離下進(jìn)行觀察，這個(gè)時(shí)候就可以看到圖2B。

2 制劑中鹽酸小案堿的含量測(cè)定

2.1 色譜條

色譜柱ZebaxODS-C18（4.6mmIDX250mm）；流動(dòng)相：0.02mol/L，磷酸二氫鉀溶液-乙睛（60：40）用磷酸調(diào)節(jié)pH為2.3；流速：1.oml/min；檢測(cè)波長：346nm[，〕；進(jìn)樣量：10“l(fā)；靈敏度：0.005AUFS；最小檢出量：1.2μg/ml。

2.2 供試品溶液的制備

取本品10ml置分液漏斗中，加氨水調(diào)節(jié)pH10.0，振搖，用水飽和的正丁醇50ml，分5次萃?。看蝜0ml）。合并萃取液，水浴蒸去正丁醇后，殘留物用甲醇溶解。溶液轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，即得供試品溶液。另取缺黃連的口服液樣品10ml，照供試品溶液制備方法同法操作，作為缺黃連的陰性對(duì)照溶液。

2.3 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品17.smg；置10oml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，作為對(duì)照品溶液。

2.4 專屬性試臉

分別吸取供試品溶液、缺黃連陰性對(duì)照溶液及對(duì)照品溶液10μl，按以上色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果，鹽酸小粟堿對(duì)照品的保留時(shí)間為9.8min，缺黃連陰性對(duì)照溶液在該時(shí)間無色譜峰出現(xiàn)，而供試品溶液在該保留時(shí)間有特征吸收峰。當(dāng)在供試品溶液中加入鹽酸小巢堿對(duì)照品后測(cè)定，僅發(fā)現(xiàn)峰增高，峰面積增大，而未發(fā)生分裂，可以確定該峰即為該制劑中鹽酸小粟堿的特征峰，其它成分對(duì)測(cè)定無干擾。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密吸取鹽酸小槳堿對(duì)照品溶液1.0，2.0，4.0，6.0，10.0ml，分別置10ml量瓶中，用甲醇定容。分別進(jìn)樣10μl，測(cè)定吸收峰面積。以濃度為橫座標(biāo)，峰面積為縱座標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。實(shí)驗(yàn)表明，鹽酸小粱堿對(duì)照品在17.8一178μg/ml的濃度范圍內(nèi)與峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)直線回歸，得回歸方程為A=-8437.4+7530.8C，相關(guān)系數(shù)r=0.99987（n=5）。

2.6 精密度試驗(yàn)

同一份供試品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定其峰面積、結(jié)果表明，精密度良好，RSD=1.6%。

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)的口服液樣品5份。每份10ml，按供試品溶液制備項(xiàng)下制備，分別進(jìn)樣，依法測(cè)定。結(jié)果表明，本法重現(xiàn)性良好，RSD=2.76%。

2.8 穩(wěn)定性試臉

取供試品熔液2份，每隔2h各測(cè)一次；每份測(cè)3次（n=6），峰面積積分值的RSD=2.25%。結(jié)果表明，測(cè)得數(shù)據(jù)在4h內(nèi)穩(wěn)定。

3 討論

本文實(shí)驗(yàn)人員主要對(duì)清熱解毒口服液里面含有的石斛及其黃連分別進(jìn)行了詳細(xì)的檢測(cè)，并且將其所存在的陰性對(duì)照液進(jìn)行了對(duì)比，得到的結(jié)果并沒有受到不利影響，該試驗(yàn)有著較強(qiáng)的專屬性，并且靈敏度也比較高。顯而易見的是，實(shí)驗(yàn)人員對(duì)鹽酸小檗堿的實(shí)際含量進(jìn)行了檢測(cè)，依據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)可以得知：一些實(shí)驗(yàn)人員曾經(jīng)使用了UV-2100類型的紫外分光光度計(jì)對(duì)其含量進(jìn)行了檢測(cè)，并依據(jù)正交函數(shù)及其相關(guān)導(dǎo)數(shù)法做好恰當(dāng)?shù)奶幚?，關(guān)于小檗堿的HPLC測(cè)量方法也存在相關(guān)報(bào)道，然而因?yàn)楦蓴_組成因素存在一定的差異性，所以無法使用到含量檢測(cè)中。在實(shí)驗(yàn)的領(lǐng)域中探索了一些滿足該制劑色譜條件的一些方法。對(duì)于小檗堿的特點(diǎn)來說，存在著較高的專屬特點(diǎn)，并且在制劑中不會(huì)受到其他成分帶來的影響，并且操作較為簡便，并且不需要上柱進(jìn)行分離。所以，該方法應(yīng)用到小檗堿含量檢查中較為合適。

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