劉 雁，許 健，邢亞群，陳衛(wèi)東

(1.蚌埠醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院藥劑科，安徽 蚌埠 233000； 2.蚌埠醫(yī)學院第二附屬醫(yī)院藥劑科，安徽 蚌埠 233000； 3.安徽中醫(yī)藥大學藥學院，安徽 合肥 230012)

三種劑量艾迪注射液對多西他賽在大鼠體內藥動學參數的影響Δ

劉 雁1*，許 健1，邢亞群2，陳衛(wèi)東3#

(1.蚌埠醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院藥劑科，安徽 蚌埠 233000； 2.蚌埠醫(yī)學院第二附屬醫(yī)院藥劑科，安徽 蚌埠 233000； 3.安徽中醫(yī)藥大學藥學院，安徽 合肥 230012)

目的：探討三種劑量艾迪注射液對多西他賽在大鼠體內藥動學參數的影響。方法：取24只SD大鼠隨機分為艾迪注射液低、中及高劑量組和空白對照組，每組6只。艾迪注射液低、中及高劑量組大鼠分別尾靜脈注射艾迪注射液5、10及20 ml/kg，連續(xù)給藥10 d，空白對照組大鼠不做任何特殊處理；四組大鼠于第10日最后1次給藥結束后10 min，尾靜脈注射相同劑量的多西他賽13.5 mg/kg。四組大鼠于注射多西他賽后2、5、10、20、30、60、120、240、480和600 min 于眼框靜脈叢取血約0.4 ml，經預處理后進樣分析，根據血藥濃度計算藥動學參數。結果：與空白對照組比較，艾迪注射液高劑量組大鼠血漿半衰期(t1/2)和表觀分布容積(Vd)明顯降低；艾迪注射液中劑量組大鼠t1/2、藥時曲線下面積和Vd明顯降低，血漿清除率明顯升高，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結論：10 ml/kg的艾迪注射液可加速大鼠體內多西他賽的清除，表現出較強的誘導作用。

多西他賽； 艾迪注射液； 藥動學參數

*副主任藥師。研究方向：藥動學。E-mail：905015187@qq.com

#通信作者：主任藥師，教授。研究方向：藥動學。E-mail:anzhongdong@126.com

多西他賽為紫杉醇類抗腫瘤藥，用于惡性腫瘤的療效確切，但其引起的不良反應對治療不利。艾迪注射液為中藥復方制劑，其主要成分斑蝥素可通過誘導細胞凋亡[1]、調控細胞周期[2]及增強免疫或細胞自噬[3-4]等機制，發(fā)揮一定的抗腫瘤活性，該藥與其他抗腫瘤藥聯合應用可增效減毒[5-7]。多西他賽與艾迪注射液在適應證的覆蓋方面有較大交集，具有聯合用藥的可能；目前，已有2藥聯合治療非小細胞肺癌的報道，可提高療效、減少多西他賽的毒性反應，提高化療順應性和遠期生存率[8]。然而，聯合用藥可能會通過影響代謝酶的活性或表達而發(fā)生藥物相互作用，使多西他賽的藥效增強或減弱，也可能增加藥品不良反應。本研究探討了三種劑量艾迪注射液對多西他賽在大鼠體內藥動學參數的影響，以期為臨床合理用藥提供理論依據。

1 材料

1.1 實驗動物

無特定病原體級SD大鼠24只，雌雄各半，體質量(220±20) g，由安徽醫(yī)科大學實驗動物中心提供[許可證號：SCXK(皖)2016-012]。

1.2 儀器

Agilent-1290型超高效液相色譜儀(美國安捷倫公司)；AB135-S型十萬分之一電子天平(德國METTLERTOLEDO)；XW-80A型微型渦旋混合儀(上海滬西分析儀器廠有限公司)；KQ-300B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；TG16-WS型臺式高速離心機(長沙湘儀離心機儀器有限公司)；LC-4016型低速離心機(安徽中科中佳科學儀器有限公司)；DW-86L388A型立式超低溫保存箱(青島海爾特種電器有限公司)；BCD-225CHC型冰箱(合肥美菱股份有限公司)；Milli-Q Gradient A10型超純水系統(tǒng)(密理博貿易有限公司)。

1.3 藥品與試劑

多西他賽標準品(中國食品藥品檢定研究院，純度99.3%，批號：100666—200401)；紫杉醇標準品(中國食品藥品檢定研究院，純度99.6%，批號：100382—201102)；多西他賽注射液(齊魯制藥有限公司，批準文號：國藥準字H20041129，批號：5030021TB，規(guī)格：40 mg)；艾迪注射液(貴州益佰制藥股份有限公司，批準文號：國藥準字Z52020236，批號：20160824，規(guī)格：10 ml)；甲醇(上海星可高純溶劑有限公司，色譜純)；超純水(Milli-Q超純水機制備)。

2 方法與結果

2.1 實驗動物分組與處理

將24只SD大鼠隨機分為艾迪注射液低、中及高劑量組和空白對照組，每組6只。艾迪注射液低、中及高劑量組大鼠分別尾靜脈注射艾迪注射液5、10及20 ml/kg，連續(xù)給藥10 d，空白對照組大鼠不做任何特殊處理。四組大鼠于給藥第9日晚8時開始禁食，但不禁水；于第10日最后1次給藥結束后10 min，尾靜脈注射相同劑量的多西他賽13.5 mg/kg。

2.2 色譜條件

色譜柱為Hypersll BDS C18柱(2.1 mm×100 mm，3 μm)，檢測波長為230 nm，流動相為甲醇-超純水(V∶V=55 ∶45)，流速為0.4 ml/min，柱溫為30 ℃，進樣量為10 μl。

2.3 溶液的制備

精密稱取多西他賽標準品適量和內標紫杉醇標準品適量，分別置于10和20 ml容量瓶中，以甲醇定容至刻度，分別制得質量濃度為100 μg/ml的多西他賽儲備液和紫杉醇儲備液。

2.4 樣品預處理

取四組大鼠血漿100 μl，置于1.5 ml離心管中(已肝素化)，加入內標紫杉醇儲備液15 μl，再加入甲醇300 μl，渦旋振蕩3 min后，于14 000 r/min下高速離心10 min，精密吸取上清液200 μl，通過0.22 μm微孔濾膜，即得。

2.5 專屬性考察

多 西他賽和內標紫杉醇的保留時間分別為8.75、6.59 min，血漿中的內源性物質不干擾測定，見圖1。

A.空白血漿；B.空白血漿+多西他賽；C.空白血漿+紫杉醇；D.空白血漿+多西他賽+紫杉醇；E.尾靜脈注射多西他賽后的血漿樣本 A.blank plasma; B.blank plasma+docetaxel; C.blank plasma+paclitaxel; D.blank plasma+docetaxel+paclitaxel; E.plasma sample after the tail venous injection of docetaxel圖1 高效液相色譜圖Fig 1 High performance liquid chromatography

2.6 標準曲線及定量下限

將多西他賽儲備液分別稀釋并加入至空白血漿中，制得10.00、5.00、2.00、1.00、0.50、0.20、0.10和0.05 μg/ml的多西他賽工作液，按照“2.4”項下方法處理，再按“2.2”項下色譜條件進樣分析，以大鼠血漿中多西他賽質量濃度為橫坐標(X，mg/L)，以多西他賽與內標紫杉醇的峰面積比為縱坐標(Y)，得回歸方程為Y=0.092X+0.008 2，R2=0.999 2。結果表明，多西他賽在0.05～10 μg/ml范圍內線性關系良好，大鼠血漿中多西他賽的定量下限(S/N=10)為0.05 μg/ml。

2.7 精密度試驗

在大鼠空白血漿中加入適量多西他賽儲備液，制得0.1、0.5和10.0 μg/ml的樣品，每個質量濃度5份，按“2.2”項下色譜條件進樣分析。連續(xù)測定3 d，進行日內和日間精密度驗證。結果表明，日內精密度低、中及高質量濃度的RSD分別為10.41%、5.62%及3.14%，日間精密度低、中及高濃度的RSD分別為11.31%、6.45%及3.14%，儀器精密度良好。

2.8 回收率測定

空白血漿中加入適量多西他賽質量和內標紫杉醇，制成多西他賽質量濃度為0.1、0.5和10.0 μg/ml的樣品，每個質量濃度平行配制6份，按照“2.4”項下方法處理，再按“2.2”項下色譜條件進樣分析，記錄多西他賽峰面積C1。另取大鼠空白血漿適量，加入3倍體積甲醇后，再加入適量的多西他賽和紫杉醇標準品溶液，制得多西他賽質量濃度為0.1、0.5和10.0 μg/ml的樣品，每個質量濃度平行配制6份，按照“2.4”項下方法處理，再按“2.2”項下色譜條件進樣分析，記錄多西他賽峰面積C2。大鼠血漿中多西他賽提取回收率=C1/C2。結果表明，低、中及高質量濃度的多西他賽提取回收率分別為(87.65±3.12)%、(91.25±2.31)%及(92.53±4.27)%。

2.9 穩(wěn)定性試驗

在大鼠空白血漿中加入適量多西他賽儲備液，制得0.1、0.5和10.0 μg/ml的樣品，每個質量濃度平行制備5份，分別于-80 ℃反復凍融3次和室溫(25 ℃)下放置24 h后依次進樣測定。結果顯示，低、中及高質量濃度的質控樣品在-80 ℃凍融和室溫放置24 h后的RSD分別為3.5%、4.7%及5.8%和3.1%、2.9%及4.3%，表明多西他賽的穩(wěn)定性良好。

2.10 藥動學研究

(1)四組大鼠于注射多西他賽后2、5、10、20、30、60、120、240、480和600 min從眼框靜脈叢取血約0.4 ml，置于涂有肝素的離心管中，低速離心(3 000 r/min)10 min后取上層血漿，按“2.4”項下方法處理，再按“2.2”項下色譜條件進樣分析，得到多西他賽峰面積，計算血藥濃度。四組大鼠的平均藥時曲線見圖2。(2)根據血藥濃度數據，采用WinNonlin 5.2軟件以非房室模型計算多西他賽的藥動學參數，結果采用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計學檢驗(采用Students’t-test)。結果表明，與空白對照組相比，艾迪注射液中劑量組大鼠的血漿半衰期(t1/2)、藥時曲線下面積(AUC0～∞)和表觀分布容積(Vd)明顯降低，血漿清除率(CLz)明顯升高，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；與空白對照組相比，艾迪注射液高劑量組大鼠的t1/2、Vd明顯降低，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；艾迪注射液低劑量組大鼠的各藥動學參數與空白對照組的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),見表1。

圖2 四組大鼠的多西他賽藥時曲線(n=6)Fig 2 Blood concentration-time curve of docetaxel of four groups (n=6)

表1 四組大鼠的多西他賽藥動學參數Tab 1 Pharmacokinetics parameters of docetaxel of four groups (±s, n=6)

3 討論

多西他賽的藥動學研究較多，研究認為其主要通過CYP3A4(對應大鼠Cyp3a1)酶進行代謝[9]。而艾迪注射液對CYP3A4的活性無影響或有較弱的抑制作用[10-12]，未見其有誘導CYP3A4活性的報道，故其誘導多西他賽的清除可能是通過誘導CYP3A4的蛋白表達來實現的。除CYP3A4外，其他CYP酶亞型[13]、P-糖蛋白[14]和有機陰離子轉運多肽[15]等轉運蛋白也會對多西他賽的清除產生影響，艾迪注射液可能影響上述一個或多個蛋白而誘導多西他賽的清除；還可能誘導多西他賽的排泄，從而誘導多西他賽的清除。

本研究結果顯示，與空白對照組比較，艾迪注射液中劑量組大鼠的t1/2、AUC0～∞和Vd明顯降低，CLz明顯升高，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；與空白對照組比較，艾迪注射液高劑量組大鼠的t1/2、Vd明顯降低，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；艾迪注射液低劑量組大鼠的各藥動學參數與空白對照組的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。表明中劑量艾迪注射液可能誘導了多西他賽的體內清除；高劑量艾迪注射液對多西他賽的代謝也有一定的誘導作用，但比中劑量弱；低劑量艾迪注射液對多西他賽的清除無顯著影響。

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EffectsofThreeDosagesofAidiInjectiononthePharmacokineticParametersofDocetaxelinRatsΔ

LIU Yan1, XU Jian1, XING Yaqun2, CHEN Weidong3

(1.Dept.of Pharmacy, the First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College, Anhui Bengbu 233000, China; 2.Dept.of Pharmacy, the Second Affiliated Hospital of Bengbu Medical College, Anhui Bengbu 233000, China; 3.College of Pharmacy, Anhui University of Chinese Medicine, Anhui Hefei 230012, China)

OBJECTIVE: To probe into the effects of three dosages of Aidi injection on the pharmacokinetic parameters of docetaxel in rats. METHODS: 24 SD rats were randomly divided into low dose group, medium dose group, high dose group and blank control group, with 6 SD rats in each. The low dose group, medium dose group and high dose group were respectively given tail intravenous injection of 5, 10 and 20 ml/kg of Aidi injection for 10 consecutive days, rats in blank control group

no process; all the four groups of rats were given same dose of docetaxel for 13.5 ml/kg at 10 min after the last administration at the 10th day. Each 0.4 ml blood was obtained from orbital venous plexus of four groups of rats at 2, 5, 10, 20, 30, 60, 120, 240, 480 and 600 min after the injection of docetaxel, and then was analyzed after pre-processing, the pharmacokinetic parameters were calculated according to the blood concentration. RESULTS: Compared with the blank control group, the plasma half-time (t1/2) and apparent volume of distribution (Vd) of high dose group were significantly decreased; thet1/2, area under curve of blood concentration-time andVdof medium dose group were significantly decreased, the plasma clearance rate was significant increased, with statistically significant differences (P<0.05). CONCLUSIONS: 10ml/kg of Aidi injection can accelerate the clearance of docetaxel in rats, which presented a strong induction.

Docetaxel; Aidi injection; Pharmacokinetic parameters

R969.1

A

1672-2124(2017)11-1471-03

DOI 10.14009/j.issn.1672-2124.2017.11.009

安徽省教育廳一般項目(No.KJ2015B067by)

2017-06-13)