高華榮++++++孫相民

[摘要]目的 建立測(cè)定強(qiáng)力感冒片中綠原酸和對(duì)乙酰氨基酚的含量測(cè)定方法。方法 采用高效液相色譜-紫外光譜法（HPLC-UC法）測(cè)定綠原酸和對(duì)乙酰氨基酚含量，色譜柱為Inertsil ODS-SP（5 μm，4.6×250 mm），流動(dòng)相為甲醇與乙腈的混合溶液（體積比為1：2）-0.1%磷酸=20：80，柱溫：35.0℃，流速：1.0 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)分別為329 nm和243 nm。結(jié)果 對(duì)乙酰氨基酚測(cè)定的線性范圍為0.7～112 μg/ml（r=0.9999），含量為195.8 mg/片；綠原酸測(cè)定的線性范圍為0.51～102 μg/ml（r=0.9995），含量為2.23 mg/片。結(jié)論 該方法用于強(qiáng)力感冒片中綠原酸和對(duì)乙酰氨基酚含量的測(cè)定較為簡(jiǎn)便準(zhǔn)確。

[關(guān)鍵詞]高效液相色譜法；綠原酸；對(duì)乙酰氨基酚；含量測(cè)定

[中圖分類(lèi)號(hào)] R927.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2017）11（c）-0013-04

Determination of Paracetamol and Chlorogenic Acid in Qiangli Ganmao Tablets by HPLC-UV

GAO Hua-rong SUN Xiang-min

Department of Pharmacy，Peking University Medical Luzhong Hospital，Shandong Province，Zibo 255400，China

[Abstract]Objective To establish a method for determination of Paracetamol and Chlorogenic Acid in Qiangli Ganmao Tablets.Methods By high performance liquid chromatography with ultraviolet spectrometry （HPLC-UC） method，the content of Chlorogenic Acid and Paracetamol were determined.The column was Inertsil ODS-SP （5 μm，4.6×250 mm），the mobile phase was the mixture of methanol-acetonitrile （the volume ratio was 1：2）-0.1% phosphoric acid （20：80）.The column temperature was 35.0℃，the flow velocity was 1.0 ml/min，the wavelength was 329 nm and 243 nm respectively.Results The linear range of Paracetamol and Chlorogenic Acid were at 0.7-112 μg/ml （r=0.9999） and 0.51-102 μg/ml （r=0.9995） respectively.The content of Paracetamol and Chlorogenic Acid was 195.8 mg and 2.23 mg respectively.Conclusion The method used for the simultaneous determination of Paracetamol and Chlorogenic Acid in Qiangli Ganmao Tablets is simple and accurate.

[Key words]HPLC；Paracetamol；Chlorogenic Acid；Determination

強(qiáng)力感冒片中含有對(duì)乙酰氨基酚和金銀花、牛蒡子、連翹等9味中藥，具有辛涼解表、清熱解毒、解熱鎮(zhèn)痛的功效。臨床上用于治療傷風(fēng)感冒、發(fā)熱頭痛、口干咳嗽、咽喉疼痛等癥狀。由于強(qiáng)力感冒片是中西藥復(fù)方制劑，成分復(fù)雜，近年來(lái)，對(duì)乙酰氨基酚在使用過(guò)程中導(dǎo)致的不良反應(yīng)時(shí)常有報(bào)道。強(qiáng)力感冒片的現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)WS3-B-4017-98中[1]，在含量測(cè)定項(xiàng)下，僅采用紫外分光光度法測(cè)定對(duì)乙酰氨基酚的含量，該方法在使用過(guò)程中復(fù)雜繁瑣，干擾因素較多，存在較大的偏差[2]，對(duì)主要成分金銀花中綠原酸的含量未有含量要求。本文通過(guò)建立高效液相色譜法，同時(shí)測(cè)定強(qiáng)力感冒片中對(duì)乙酰氨基酚和金銀花中綠原酸的含量，以便更好地對(duì)該藥進(jìn)行質(zhì)量監(jiān)控，同時(shí)也為提高該藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)打下基礎(chǔ)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1儀器與試藥

1.1儀器

高效液相色譜儀（日本島津公司，包括LC-20AT泵，DGU-20A3在線脫氣機(jī)，CTO-10AS VP柱溫箱，SPD-20A紫外檢測(cè)器），AL-104電子天平[梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司]，KH-400KDV型高功率數(shù)控超聲波清洗器（上海星堯科學(xué)儀器有限公司）。

1.2試藥

對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品（批號(hào)71302229，中國(guó)藥品生物制品檢定所）；綠原酸對(duì)照品（批號(hào)141215，含量≥99%，中國(guó)藥品生物制品檢定所）；強(qiáng)力感冒片（批號(hào)150960，武漢中聯(lián)藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司）；甲醇、乙腈為色譜純，其余試劑為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1對(duì)照品和供試品溶液的制備

2.1.1對(duì)照品溶液的制備 準(zhǔn)確稱(chēng)取對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品0.0140 g于100 ml容量瓶中，加50%的甲醇超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻，得濃度為140 μg/ml的對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品貯備液。同時(shí)準(zhǔn)確稱(chēng)取綠原酸對(duì)照品0.0102 g于100 ml容量瓶中，加50%的甲醇超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻，得濃度為102 μg/ml的綠原酸對(duì)照品貯備液。endprint

2.1.2供試品溶液的制備 取強(qiáng)力感冒片20片，除去包衣，精密稱(chēng)定，研細(xì)。準(zhǔn)確稱(chēng)取80 mg，置100 ml容量瓶中，加50%甲醇超聲溶解并定容至刻度，搖勻，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，即得測(cè)定綠原酸含量的供試品溶液。準(zhǔn)確移取該供試品溶液1 ml置10 ml容量瓶中，加50%甲醇溶液稀釋至刻度即得測(cè)定對(duì)乙酰氨基酚含量的供試品溶液。

2.2色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

色譜柱：Inertsil ODS-SP（5 μm，4.6×250 mm）；流動(dòng)相：甲醇與乙腈的混合溶液（體積比為1：2）-0.1%磷酸=20：80；柱溫：35.0℃；流速：1.0 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)分別為：對(duì)乙酰氨基酚243 nm和綠原酸329 nm[3-4]；進(jìn)樣體積：20 μl。分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液注入色譜儀，色譜圖見(jiàn)圖1～4，對(duì)照品與供試品具有相同的保留時(shí)間，對(duì)乙酰氨基酚、綠原酸理論塔板數(shù)均不低于4000，分離度>1.5。

2.3線性關(guān)系的考察

分別取對(duì)照品貯備液0.05、0.1、0.2、0.3、0.5、1、2、4、6、8 ml于10 ml容量瓶中，加50%甲醇定容至刻度，搖勻，得系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。以對(duì)照品溶液濃度（X，μg/ml）為橫坐標(biāo)，峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果，對(duì)乙酰氨基酚的回歸方程為：Y=98288X+9139.9，相關(guān)系數(shù)r=0.9999，在濃度0.7～112.0 μg/ml的范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系；綠原酸的回歸方程為：Y=75266X-42939，相關(guān)系數(shù)r =0.9995，在濃度0.51～102.00 μg/ml的范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.4精密度試驗(yàn)

分別取“2.1.1”項(xiàng)下的對(duì)乙酰氨基酚標(biāo)準(zhǔn)溶液和綠原酸對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，結(jié)果對(duì)乙酰氨基酚峰面積的RSD為1.1%（表1），綠原酸峰面積的RSD為1.4%（表2），精密度均良好。

表1 對(duì)乙酰氨基酚精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=6）

表2 綠原酸精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.5穩(wěn)定性試驗(yàn)

按“2.1.2”制備對(duì)乙酰氨基酚和綠原酸的供試品溶液，室溫下，分別于0、2、4、6、12、12 h進(jìn)樣，結(jié)果對(duì)乙酰氨基酚在12 h內(nèi)的峰面積的RSD為0.5%，綠原酸在6 h內(nèi)的峰面積的RSD為1.8%，對(duì)乙酰氨基酚和綠原酸供試品溶液分別室溫放置12 h和6 h穩(wěn)定。

2.6重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批研細(xì)的樣品粉末5份，按“2.1.2”分別平行制備對(duì)乙酰氨基酚和綠原酸的供試品溶液，并分別進(jìn)樣，根據(jù)峰面積計(jì)算樣品含量，結(jié)果樣品中對(duì)乙酰氨基酚的含量為402.53 mg/g，RSD為1.2%（n=5）；綠原酸的含量為4.75 mg/g，RSD為1.4%（n=5），重復(fù)性均良好。

2.7樣品含量測(cè)定

取強(qiáng)力感冒片，按“2.1.2”制備供試品溶液，按“2.2”色譜條件進(jìn)樣，按外標(biāo)法由峰面積計(jì)算綠原酸和對(duì)乙酰氨基酚的含量。結(jié)果綠原酸含量為2.23 mg/片，對(duì)乙酰氨基酚含量為195.8 mg/片。

2.8回收率試驗(yàn)

根據(jù)樣品測(cè)定結(jié)果，取同一批研細(xì)的樣品粉末80 mg（共10份）分別至100 ml容量瓶中，其中9份分別按綠原酸含量的80%、100%、120%加入綠原酸對(duì)照品溶液（各平行3份），加50%甲醇溶液超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻，進(jìn)樣，根據(jù)峰面積計(jì)算綠原酸的回收率。同時(shí)，在另外1份中，加50%甲醇超聲溶解并稀釋至刻度，然后準(zhǔn)確移取該溶液1 ml至10 ml容量瓶中，按對(duì)乙酰氨基酚含量的80%、100%、120%分別加入對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品溶液（各平行3份），并加50%甲醇溶液至刻度，搖勻，進(jìn)樣，根據(jù)峰面積計(jì)算對(duì)乙酰氨基酚的回收率。結(jié)果綠原酸的平均回收率為97.8%，RSD為1.5%（表3），對(duì)乙酰氨基酚的平均回收率為99.5%，RSD為0.7%（表4）。

表3 綠原酸回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=9）

表4 對(duì)乙酰氨基酚的回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=9）

3討論

在色譜流動(dòng)相條件摸索中，參考相關(guān)文獻(xiàn)[5-15]分別以甲醇-NaH2PO4（pH 2.7），甲醇-0.4%磷酸，甲醇-0.1%磷酸，乙腈-0.4%磷酸，乙腈-0.3%磷酸，乙腈-0.2%磷酸，乙腈-0.1%磷酸等為流動(dòng)相比較不同比例下的色譜圖，考慮出峰時(shí)間、分離度和拖尾因子，最終確定甲醇與乙腈的混合溶液（體積比為1：2）-0.1%磷酸=20：80為流動(dòng)相。

由于樣品中含有對(duì)乙酰氨基酚和綠原酸的量相差大約100倍，供試品溶液不經(jīng)過(guò)稀釋直接同時(shí)測(cè)定二者的含量時(shí)，會(huì)導(dǎo)致樣品中對(duì)乙酰氨基酚的濃度超出線性范圍，遂采取先測(cè)定綠原酸的含量然后再對(duì)樣品稀釋以測(cè)定對(duì)乙酰氨基酚含量的測(cè)定方法。

高效液相色譜法測(cè)定強(qiáng)力感冒片中綠原酸和對(duì)乙酰氨基酚的含量，方法應(yīng)用簡(jiǎn)單、可靠、專(zhuān)屬性強(qiáng)[8-9]，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，精密度、重復(fù)性及穩(wěn)定性均良好，可用于藥品質(zhì)量檢測(cè)，提高了藥品使用的安全性。

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（收稿日期：2017-09-23 本文編輯：孟慶卿）endprint