萬敏，楊勝晗

·論著·

AGR2在卵巢癌組織中表達(dá)及臨床意義

萬敏，楊勝晗

目的：通過分析人前梯度蛋白2(AGR2)在不同卵巢組織中的表達(dá)及其與卵巢癌各臨床病理參數(shù)間的關(guān)系，探討AGR2在卵巢癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。方法采用免疫組化SP法檢測AGR2在15例正常卵巢組織、20例卵巢良性腫瘤組織及50例卵巢癌組織中的表達(dá)情況，并結(jié)合卵巢癌各臨床病理參數(shù)進(jìn)行分析。結(jié)果AGR2在卵巢癌組織中的表達(dá)水平明顯高于卵巢正常組織和卵巢良性腫瘤組織(P<0.05)；AGR2在卵巢癌組織中表達(dá)水平與患者的年齡、文化程度及病理類型無關(guān)(P>0.05)，而與患者的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論AGR2有望成為卵巢癌早期診斷的一種新的腫瘤標(biāo)記物。

卵巢腫瘤； 人前梯度蛋白2； 免疫組織化學(xué)； 腫瘤標(biāo)志物

卵巢癌是女性生殖道常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率僅次于子宮頸癌和子宮內(nèi)膜癌而列居?jì)D科腫瘤第3位，但死亡率卻居第一位[1]。由于卵巢位于盆腔深部，發(fā)病隱匿，目前又缺乏有效的檢測手段，因此很難早發(fā)現(xiàn)和早診斷。大部分卵巢癌患者確診時(shí)已是晚期，僅有25%的患者早期被發(fā)現(xiàn)，而晚期卵巢癌患者的5年生存率較早期的95%降至20%～30%[2]。近年來隨著越來越多的腫瘤標(biāo)志物被發(fā)現(xiàn)，使得早期卵巢癌的診斷率逐漸升高。研究發(fā)現(xiàn)人前梯度蛋白2(anterior gradient 2，AGR2)與多種惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展相關(guān)[3]，被稱謂“一個(gè)新的癌癥診斷標(biāo)記”[4]，是目前研究的熱點(diǎn)之一。本資料旨在探討AGR2在卵巢癌組織中的表達(dá)情況及其臨床意義，以便為卵巢癌的早期診斷尋找新的分子生物學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 臨床標(biāo)本選自2013年10月-2015年10月蚌埠市第三人民醫(yī)院婦產(chǎn)科及蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院腫瘤婦科收治的85例患者的病歷資料，其中包括因其他原因切除正常卵巢組織的患者15例，卵巢良性腫瘤患者20例、卵巢癌患者50例，所有患者術(shù)前均未接受過任何治療，所選病例均有完整的臨床資料及存檔蠟塊。非卵巢癌患者年齡21～66歲，平均年齡38.55歲，50例卵巢癌患者年齡為28～65歲，平均年齡52.70歲，其中<52.70歲26例，≥52.70歲24例；根據(jù)UICC 2002版PTNM病理分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期，早期(FIGOⅠ/Ⅱ期)卵巢癌17例，中、晚期(FIGO Ⅲ/Ⅳ期)卵巢癌33例；中高分化28例，低分化22例；術(shù)后經(jīng)病理檢查證實(shí)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者23例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者27例；漿液性卵巢癌38例，其他類型的卵巢癌患者12例。

1.2 主要材料 試劑盒為Elivision，試劑是兔抗人AGR2單克隆抗體，其濃度為1∶20，克隆號：RB33772，購買于ABGENT公司。

1.3 方法

1.3.1 試驗(yàn)方法 所有組織均10%甲醛固定、常規(guī)脫水、石蠟包埋后，分別進(jìn)行HE和EnVsion兩步法免疫組化染色，染色方法按照說明書進(jìn)行操作。

1.3.2 判定標(biāo)準(zhǔn) AGR2蛋白染色以細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞。染色評分標(biāo)準(zhǔn)按照著色強(qiáng)度及著色細(xì)胞數(shù)綜合計(jì)算，每張切片均由病理科資深醫(yī)師，在相同條件下觀察判斷，陽性細(xì)胞的染色強(qiáng)度按無色、淺黃色、黃色、棕黃色分別計(jì)為0，1，2，3分；陽性細(xì)胞數(shù)計(jì)分：無陽性細(xì)胞為0分，1%～10%為1分，11%～50%為2分，51%～80%為3分，≥81%為4分；以上2項(xiàng)的乘積0～3分為陰性，4分及以上均為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料組間比較應(yīng)用Pearson χ2檢驗(yàn)和Fisher確切概率法，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 AGR2在卵巢正常組織、卵巢良性腫瘤組織及卵巢癌組織中表達(dá)情況 在正常卵巢組織中AGR2蛋白表達(dá)陽性率為20%(3/15)，在卵巢良性腫瘤組織中AGR2蛋白表達(dá)陽性率為35%(7/20)，卵巢癌組織中AGR2蛋白表達(dá)陽性率為72%(36/50)。3組間兩兩比較顯示，卵巢癌組織中AGR2表達(dá)陽性率明顯高于正常卵巢組織和卵巢良性腫瘤組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)；正常卵巢組織與卵巢良性腫瘤組織AGR2表達(dá)陽性率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 AGR2在不同卵巢組織中的表達(dá)

注：*與卵巢良性腫瘤組比較；△與卵巢癌組比較。

2.2 AGR2在卵巢癌組織中的表達(dá)及其與各臨床病理參數(shù)的關(guān)系 AGR2表達(dá)陽性率與卵巢癌患者的年齡、分化程度、病理類型無關(guān)(P>0.05)，而與手術(shù)-病理分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(P<0.05)，Ⅰ-Ⅱ期患者AGR2表達(dá)陽性率明顯低于Ⅲ-Ⅳ期患者(χ2=4.641，P=0.031<0.05)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者AGR2表達(dá)陽性率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者(χ2=5.062，P=0.024<0.05)。見表2。

3 討論

3.1 AGR2的生物學(xué)特性 人類AGR2基因是1998年美國斯坦福大學(xué)Weigel RJ博士在研究乳腺癌中首先發(fā)現(xiàn)并克隆獲得的[5]，現(xiàn)已證實(shí)AGR2分布較廣泛，可存在于細(xì)胞核、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和細(xì)胞外[6]。AGR2基因定位于染色體7p21，共有兩種mRNA，兩種亞型都包含8個(gè)外顯子和7個(gè)內(nèi)含子，有175個(gè)氨基酸[7]。AGR2N-端含有可以切除的分泌信號序列，切割位點(diǎn)位于Ala20/Lys21，C-末端的10個(gè)氨基酸可能對增強(qiáng)細(xì)胞存活有重要的作用[8]。AGR2被認(rèn)為是一個(gè)分泌蛋白[9]，但對于AGR2的功能及調(diào)控機(jī)制尚未完全明確，研究表明AGR2蛋白在許多生物系統(tǒng)中發(fā)揮作用，特別是在腫瘤的生長、侵潤、轉(zhuǎn)移及耐藥性等方面有重要作用。

表2 AGR2在卵巢癌組織中的表達(dá)及其與各臨床病理參數(shù)的關(guān)系

3.2 AGR2與腫瘤的關(guān)系 許多研究證實(shí)AGR2在乳腺癌中高表達(dá)。Barraclough等[10]研究結(jié)果得出AGR2與乳腺癌患者的存活時(shí)間成很強(qiáng)的負(fù)相關(guān)，AGR2表達(dá)越多病人的幸存時(shí)間越短，不表達(dá)AGR2的患者中約96%能生存20年，其研究結(jié)果還表明AGR2的表達(dá)不僅與雌激素受體相關(guān)還與S1004A、S100P等相關(guān)，而這些都是與腫瘤轉(zhuǎn)移關(guān)系密切的蛋白，因此AGR2可視為一個(gè)腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)的因子，與病人的差預(yù)后相關(guān)，其具體作用機(jī)制不詳。AGR2也被認(rèn)為是前列腺癌的標(biāo)記蛋白[11]，Zhang等[12]發(fā)現(xiàn)在前列腺癌中高表達(dá)，證明了AGR2可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和遷移，證實(shí)了AGR2在腫瘤轉(zhuǎn)移中起著重要作用。目前研究表明，AGR2在胰腺癌患者的胰液、血清及細(xì)胞中表達(dá)都非常高[13]，用共焦顯微鏡和流式細(xì)胞儀分析可得AGR2存在于細(xì)胞外表面，它的細(xì)胞表面定位，可作為一個(gè)細(xì)胞表面抗原被檢測到，為胰腺癌的早期診斷提供新的方法[14]。除上述腫瘤外，AGR2在其他惡性腫瘤組織內(nèi)也表達(dá)異常增高，如食管癌、肝癌、胃腸癌等[15]。

3.3 AGR2在卵巢癌中的表達(dá)及其與各臨床病理參數(shù)的關(guān)系 目前國內(nèi)外關(guān)于AGR2在卵巢癌中表達(dá)情況的報(bào)道甚少，Park等[16]研究表明在早期卵巢癌組織及血清中AGR2表達(dá)明顯高于正常女性，這與本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果相符，這一實(shí)驗(yàn)說明AGR2可能與卵巢癌的發(fā)生有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)正常卵巢組織中AGR2蛋白表達(dá)陽性率為20%，卵巢良性腫瘤組織中AGR2表達(dá)陽性率為35%，而卵巢癌組織中AGR2表達(dá)陽性率為72%，卵巢癌組織中AGR2陽性表達(dá)率明顯高于正常卵巢組織(P<0.05)，AGR2在正常卵巢組織、卵巢良性腫瘤組織及卵巢癌組織中的表達(dá)逐漸上調(diào)的現(xiàn)象，說明AGR2與卵巢癌的發(fā)展有關(guān)。白小英[3]采用ELISA法和電化學(xué)發(fā)光法檢測發(fā)現(xiàn)AGR2在卵巢癌患者外周血清及組織中表達(dá)均增高，其升高水平與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移正相關(guān)，而與患者的年齡、組織學(xué)分級、病理類型無關(guān)，這也與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果相符，說明了AGR2在卵巢癌的發(fā)生、侵襲及轉(zhuǎn)移進(jìn)展中可能起到一定的作用。

雖然AGR2在卵巢癌發(fā)生發(fā)展中作用機(jī)制還不完全明確，但在其他惡性腫瘤中研究已經(jīng)證實(shí)AGR2能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移，隨著研究的深入，AGR2有望成為卵巢癌早期診斷、病情評估、預(yù)測預(yù)后的一種新型的腫瘤標(biāo)記物。

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ExpressionandclinicalsignificanceofAGR2inovariancarcinoma

WANMin,YANGSheng-han.
(DepartmentofGynecologyandObstetrics,BengbuThirdPeople'sHospital,Anhui233000,China)

Objective:To investigate the expression of anterior gradient 2 (AGR2) in different ovarian tissues and its relationship with clinicopathological parameters, and to detect the role of AGR2 in the occurrence and development of ovarian cancer.MethodsImmunohistochemical SP method was used to detect the expression of AGR2 in 15 cases of normal ovarian tissue, 20 cases of benign ovarian tumor and 50 cases of ovarian cancer, and the clinical pathological parameters of ovarian cancer were analyzed.ResultsThe expression of AGR2 in ovarian cancer tissues was significantly higher than that in normal ovarian tissues and benign ovarian tumors (P<0.05).The expression level of AGR2 in ovarian cancer was not related to the age, degree of education and type of pathology (P>0.05), but was closely related to the clinical stage and lymph node metastasis (P<0.05).ConclusionAGR2 is expected to be a new tumor marker for early diagnosis of ovarian cancer.

Ovarian cancer; AGR2; Immunohistochemistry; Tumor marker

安徽省蚌埠市第三人民醫(yī)院 婦產(chǎn)科,233000

萬敏(1961-)，女，主任醫(yī)師，大學(xué)。

10.14126/j.cnki.1008-7044.2017.06.004

R 737.31

A

1008-7044(2017)06-0639-03

2017-06-02)