常 杰,?;?,胡宗福,于建華,李樹國
(內蒙古民族大學動物科學技術學院,內蒙古通遼 028000)
細鱗鮭幼魚n-3HUFA需求量的研究
常 杰,?;溃诟?,于建華,李樹國
(內蒙古民族大學動物科學技術學院,內蒙古通遼 028000)
為確定細鱗鮭(Brachymystaxlenok)n-3 HUFA需求量以減少魚油使用和降低養(yǎng)殖成本,研究飼料中不同水平的n-3 HUFA對細鱗鮭的生長性能、體成分和肌肉脂肪酸組成的影響。以脫脂魚粉、脫脂豆粕、明膠和酪蛋白為主要蛋白源,通過調節(jié)飼料中的豬油和濃縮油EPA、DHA水平,使飼料n-3HUFA的含量分別達到0.25%、0.50%、0.75%、1.00%、1.25%、1.50%,配制出6種等氮等能的試驗飼料(D 0.25、D 0.50、D 0.75、D 1.00、D 1.25和D 1.50),分別投喂細鱗鮭幼魚(60.0 g± 2.8 g) 84 d。結果顯示:飼料中n-3HUFA不同水平對細鱗鮭成活率和飼料系數沒有顯著影響,但是顯著影響了其末重(FW)、增重率(WGR)和特定生長率(SGR)。隨著添加飼料中n-3HUFA水平的升高,FW、WGR和SGR有先升高后下降的趨勢,且3者在飼料中n-3HUFA水平為0.75%均最大。隨著飼料中 n-3 HUFA 水平的升高,魚肌肉18∶1n-9 的含量逐漸下降,而 22∶6n-3的水平相應升高。結果表明,以WGR為評價指標時,用二次曲線模型推測出細鱗鮭對飼料n-3 HUFA的需求量約為0.69%。
細鱗鮭(Brachymystaxlenok);n-3 HUFA;脂肪酸組成;營養(yǎng)需求量
脂肪和脂肪酸是魚類生長發(fā)育所必需的主要營養(yǎng)物質[1],其中的高不飽和脂肪酸(n-3 HUFA,主要包括二十碳五烯酸EPA和二十二碳六烯酸DHA)在魚類營養(yǎng)生理、代謝、免疫和抗病力過程中發(fā)揮著重要的作用[2]。不同魚類對n-3 HUFA的需求差別很大,一般對淡水魚而言,亞油酸(LA)、亞麻酸(LNA)、二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)是其必需脂肪酸(EFA)[3]。細鱗鮭(BrachymystaxlenokPallas)屬鮭科細鱗魚屬,主要分布于我國黑龍江、吉林、遼寧、河北、內蒙古、新疆和秦嶺一帶河流中,是一種具有較高經濟價值和營養(yǎng)價值的冷水性名貴魚類,已列入中國國家二級重點保護水生野生動物[4-6]。近幾年,我國各地如東北、秦嶺、河北等地區(qū)已相繼成功進行細鱗鮭人工繁殖和苗種培育,目前已在北方地區(qū)廣泛養(yǎng)殖和人工放流[7,8],但在其養(yǎng)殖飼喂過程中,大多投喂虹鱒魚飼料和小雜魚,嚴重影響了細鱗鮭的健康生長。因此,配制營養(yǎng)全面、優(yōu)質高效的配合飼料對其健康養(yǎng)殖具有重要的作用。在飼料中添加不同濃度的高不飽和脂肪酸(n-3 HUFA),研究HUFA水平對細鱗鮭生長、飼料利用、肌肉成分和脂肪酸組成的影響,確定細鱗鮭n-3 HUFA需求量,以期為選用適宜的脂肪源來配制生產細鱗鮭飼料提供理論依據。
1.1 實驗飼料配制
以脫脂魚粉、脫脂豆粕、明膠、酪蛋白為主要蛋白源,精制EPA油、精制DHA油和豬油為脂肪源,并調節(jié)EPA和DHA油和豬油含量,使飼料中n-3 HUFA的含量分別為0.25、0.50、0.75、1.00、1.25、1.50%,配制成6種等氮等能飼料。實驗飼料配方和營養(yǎng)成分如表1所示。將各原料進行混合和粉碎,使其全部通過80目篩;微量成分采取逐級擴大法添加,與各原料混合均勻后,用DS32-II型雙螺桿制粒機(濟南賽信膨化機械有限公司)擠壓成顆粒飼料(直徑2.5 mm,長4.0 mm),50 ℃烘干后放入-20 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>
1.2 飼養(yǎng)實驗
養(yǎng)殖實驗在內蒙古民族大學實驗樓冷水魚養(yǎng)殖室進行,室內設空調,使室內溫度恒定在(15±2)℃,循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)設有制冷機。實驗魚取自中國水產科學研究院黑龍江水產研究所實驗基地(遼寧丹東鳳城),室內馴化暫養(yǎng)12 d,選取規(guī)格均勻的細鱗鮭幼魚270尾,平均體質量為(60.0 ± 2.8 )g,隨機分成6個組,每組3個重復,每個重復15尾魚,放養(yǎng)在水體為150 L循環(huán)水系統(tǒng)養(yǎng)殖桶內,系統(tǒng)水流速度為80~100 L/h。養(yǎng)殖用水為經曝氣、消毒、制冷后的飲用自來水,水溫(16±2) ℃,DO > 7.5 mg/L,氨氮濃度< 0.25 mg/L,pH值7.6±0.2,每3 d換水或補水1/3的量。養(yǎng)殖周期為84 d。每天投喂3次(8:00、13:30、18:30),每次飽食投喂。
表1 實驗飼料配方及營養(yǎng)成分 Tab.1 Composition and nutrition levels of experimental diet %(dry weight)
1) 每千克飼料含有:VB125 mg,VB245 mg,VB620 mg,VB120.l mg,VK310 mg,肌醇800 mg,VB360 mg,煙酸200 mg,葉酸20 mg,生物素1.2 mg,VA 32 mg,VD36.7 mg,VC 2 150 mg,乙氧基喹啉150 mg,次粉16 480 mg。
2) 每千克飼料含有:NaF 2 mg,KI 8 mg,CoCl2·6H2O(1%) 50 mg,CuSO4·5H2O 10 mg,FeSO4· H2O 80 mg,ZnSO4· H2O 50 mg,MnSO4·H2O 60 mg,MgSO4·7H2O 1 200 mg,Ca (H2PO4)2·H2O 3 000 mg,NaCl 10 mg,沸石粉 5 530 mg。
1.3 采樣及分析
實驗結束停喂24 h后,用濃度為100 mg/L 的MS-222麻醉,對魚計數、量體長和稱重;每桶隨機取5尾魚解剖,分別剝離出各自肌肉,合并后放在標號的封口袋中,置于-20 ℃冰箱保存,備測肌肉常規(guī)成分和脂肪酸含量。
1.3.1 生長性能
成活率 = (Nt/N0)×100%;
增重率(WGR) =[(Wt-W0)/W0]×100%;
特定生長率(SGR) =[(lnWt- lnW0)×100%]/t;
飼料系數(FCR) =FI/(Wt-W0);
蛋白質效率(PER) =[(Wt-W0)/PI]×100
上述公式中Nt和N0分別代表試驗初魚總尾數和試驗后魚尾數,Wt和W0分別是魚體末均濕重和初始均濕重,t為養(yǎng)殖天數,FI代表飼料攝食量,PI代表蛋白攝食量。
1.3.2 營養(yǎng)成分和脂肪酸測定
飼料和肌肉水分、粗蛋白、粗脂肪和粗灰分按國際標準 AOAC(1995)方法分析測定[9]。取部分已制備好的肌肉樣品冷凍干燥后用于脂肪酸分析。脂肪酸:抽提總脂肪酸采用Folch等[10]的測定方法,分別用1 mol/L KOH-甲醇和0.5 mol/L硫酸甲醇溶液使脂肪酸甲酯化,再用正庚烷萃取脂肪酸甲酯。樣品皂化甲酯化后,用Thermo ScientificTMTRACE 1310 氣相色譜儀(Thermo Fisher Scientific,U.S.A)進行分析。
1.4 數據處理
結果以平均值±標準差(Mean ± SD)表示,數據處理與分析采用SPSS17.0分析軟件進行ANOVA單因子方差分析和采用t檢驗進行顯著性檢驗,采用Duncan’s法進行多重比較分析,以P<0.05作為差異顯著性判斷標準,同時采用二次回歸曲線模型來確定細鱗鮭幼魚對飼料中n-3 HUFA的需要量。
2.1 飼料中n-3 HUFA水平對細鱗鮭生長性能、成活率和飼料利用的影響
飼料n-3 HUFA對細鱗鮭生長性能、成活率和飼料利用的影響見表2。細鱗鮭的末均質量(FW)、增重率(WGR)和特定生長率(SGR)均隨n-3 HUFA水平的升高有先升高后降低的趨勢。D 0.75組細鱗鮭FW顯著高于D 0.25、D 1.25、D 1.50組,分別提高了7.54%、12.85%和14.88%,但與D 0.50和D 1.00組沒有顯著性差異。D 0.75組細鱗鮭WGR和SGR顯著高于D 0.25、D 1.25和D 1.50組,WGR分別提高了13.73%和8.13%、22.70%和14.66%,32.45%和19.82%,但與其他各組沒有顯著性差異。飼料不同n-3 HUFA水平對細鱗鮭成活率、飼料系數和蛋白質效率沒有顯著影響。在飼料脂肪為18%水平下,通過飼料n-3 HUFA水平與細鱗鮭增重率之間的關系,采用二次曲線模型評價了細鱗鮭n-3 HUFA最適需求量為0.69%。以增重率為評價指標之間的關系,采用二次曲線模型擬合后得到細鱗鮭n-3 HUFA最適需求量為0.69%。
表2 飼料n-3 HUFA水平對細鱗鮭幼魚生長、存活和飼料利用的影響Tab.2 Effect of dietary n-3 HUFA on the growth performance,survival and feed utilization of juvenile B.lenok
圖1 飼料中n-3 HUFA水平對細鱗鮭增重率的影響Fig.1 Effect of dietary n-3 HUFA on weight gain rate of B.lenok
2.2 飼料中n-3 HUF水平對細鱗鮭肌肉常規(guī)成分的影響
如表3所示,細鱗鮭肌肉水分含量在73.87%~74.96%,粗蛋白含量在16.94%~17.85%,粗脂肪含量在3.17%~3.70%,灰分含量在1.33%~1.41%。各飼料n-3 HUF水平對細鱗鮭肌肉水分、粗蛋白、粗脂肪和灰分含量沒有顯著性影響。
2.3 飼料中n-3 HUF水平對細鱗鮭肌肉脂肪酸組成的影響
細鱗鮭肌肉脂肪酸含量較高的是C16∶0、C18∶1n-9、C18∶2n-6、C22∶6n-3、C18∶0、C18∶3n-3和C20∶5n-3。在表4細鱗鮭肌肉脂肪酸組成中,飼料n-3 HUFA水平對C16∶0、C18∶1n-9、C18∶3n-3、C20∶5n-3、C22∶6n-3、n-3 HUFA含量和DHA/EPA比值有顯著性影響,而對其他脂肪酸含量沒有顯著性影響。隨著飼料n-3 HUF水平的升高,肌肉中C20∶5n-3含量也在顯著增加,而C22∶6n-3含量先升高至18.51%再降低。肌肉中n-3 HUFA含量在D1.25組達到最大,除D 1.50組外,顯著高于其他各組,此外,飼料中n-3 HUFA含量與肌肉中n-3 HUFA含量存在二次曲線y=-10.793x2+28.928x+ 1.147 4,R2=0.981 2(圖 2),表明隨著飼料中n-3 HUFA含量升高,肌肉中n-3 HUFA含量逐漸升至最高,再降低。
表3 飼料中n-3 HUFA水平對細鱗鮭肌肉營養(yǎng)成分的影響Tab.3 Effect of dietary n-3 HUFA on the muscle composition of B.lenok
表4 飼料n-3 HUFA水平對細鱗鮭肌肉脂肪酸組成的影響Tab.4 Effect of dietary n-3 HUFA on fatty acids composition of muscle in B.lenok
續(xù)表4
圖2 飼料中n-3 HUFA水平與細鱗鮭肌肉中n-3 HUFA含量的關系Fig.2 Relationship between dietary n-3 HUFA levels and muscle n-3 HUFA content of B.lenok
3.1 細鱗鮭對n-3 HUFA需求量的特性
已有研究表明,魚類對飼料中脂肪含量、脂肪種類及其比例要求不同,魚類對脂肪酸尤其n-3 HUFA需求量也不同[11]。一般認為,淡水魚的EFA有LA、LNA、EPA和DHA 4種,但對不同種類的淡水魚來說,這4種EFA的添加效果卻有差異[3]。本研究在飼料脂肪水平18%和DHA/EPA比例1.5的情況下,添加不同水平的n-3 HUFA,對細鱗鮭生長性能具有重要影響。在84 d的生長養(yǎng)殖實驗中,不同含量的n-3 HUFA可提高細鱗鮭增重率和特定生長率,當飼料中 n-3 HUFA水平為0.75%(D 0.75組)時,細鱗鮭的FW、WGR和SGR最大,顯著高于D 0.25組和D 1.50組,與其他各組間沒有顯著性差異。這說明 n-3 HUFA是細鱗鮭生長所必需的脂肪酸。以WGR為評價指標,通過二次曲線模型評估出了細鱗鮭n-3 HUFA的適宜需要量為0.69%。這與在馬蘇大馬哈魚(Oncorhynchusmasou)[12]、虹鱒(Oncorhynchusmykiss)[13]、陸封型大西洋鮭(Salmosalar)[14]等冷水性淡水魚類中取得的結果相似,略低于黃鰭鯛(Sparusauratd)[15]、大菱鲆(Scophthalmusmaximus)[16]、軍曹魚(Rachycentroncanadum)[17]、黑鯛(Sparusmacrocephlus)[18]、斜帶石斑魚(Epinephluscoioides)[19]等一些海水魚類。
生存環(huán)境(淡水、河口、海洋)可能是影響魚類EFA需求差異的主要因素[20],如黃斑藍子魚(Siganuscanaliculatus)[21]、金錢魚(Scatophagusargus)[22]。EFA在滲透調節(jié)中的作用機制揭示了這些營養(yǎng)素如何影響不同水生環(huán)境的魚類[20]。也有研究表明陸封型淡水養(yǎng)殖大西洋鮭魚對n-3 LC-PUFA需求低于在海水養(yǎng)殖中同類的需要[14]。本實驗研究對象細鱗鮭是陸封型的一種鮭科魚類,其EFA的需求及其脂肪酸合成能力可能與洄游性鮭科魚類有區(qū)別。
飼料中過量的 n-3 HUFA 會抑制淡水魚[23]和部分海水魚的生長[24],在本實驗中飼料中含0.69%的n-3 HUFA對細鱗鮭生長性能最好,超過該水平時則發(fā)現抑制了細鱗鮭的生長,這與在草魚(Ctenopharyngodonidellus)[23]、星斑川鰈(Platichthysstellatus)[24]中的研究結果相似。適量的n-3 HUFA對大西洋鮭線粒體和肌肉組織氧化保護較好,過多會增加其機體的氧化損傷[25]。本研究表明,飼料中添加高含量的n-3 HUFA(>0.69%)影響了細鱗鮭的生長,其影響機理和機體代謝機制有待于進一步的研究。
3.2 飼料中n-3 HUF水平對細鱗鮭肌肉營養(yǎng)成分的影響
隨飼料中n-3 HUFA含量的升高,魚肌肉水分幾乎沒有變化,粗蛋白質含量略有逐漸增加的趨勢,粗脂肪和灰分含量則呈現先升高后下降趨勢,但各組之間并沒有顯著性差異。牙鲆肌肉中粗脂肪隨著飼料中EPA和DHA的升高增加,但更高的EPA、DHA含量并沒有進一步增加其肌肉的粗脂肪含量[26],與本實驗結果一致。細鱗鮭粗脂肪含量隨著飼料中n-3 HUFA含量的升高有先升高后下降的趨勢,D 0.75組(0.75%)含量最高, 但與其他各組并沒有產生顯著差異。這說明飼料中的n-3 HUFA水平在一定范圍內,對細鱗鮭肌肉粗脂肪含量的影響不顯著。有大量研究表明,飼料n-3 HUFA水平對魚機體的脂肪代謝產生一定的作用[27,28],而對細鱗鮭的影響機制有待進一步研究。
3.3 飼料中n-3 HUFA水平對細鱗鮭肌肉脂肪酸組成的影響
諸多研究表明,飼料中脂肪酸水平和組成對魚體組織(如肝臟和肌肉)中脂肪酸組成有顯著的影響[25,29]。在本實驗中,飼料脂肪源以豬油為主體,添加精制EPA和DHA來調節(jié)飼料中n-3 HUFA的水平,因此飼料中脂肪酸組成及含量主要體現在豬油脂肪酸組成和EPA、DHA水平上,由于豬油作為主要飼料的脂肪源,飼料脂肪酸主要含有C16∶0、C18∶0、C18∶1n-9和C18∶2n-6。飼料對細鱗鮭肌肉C16∶0、C18∶1n-9和C18∶2n-6的影響較為顯著,而對C18∶0影響不明顯,表明肌肉中C18∶0含量較為穩(wěn)定。飼料中飽和C16∶0、18∶0脂肪酸和單不飽和脂肪酸不僅可作為機體的能量物質,而且也是細胞膜磷脂的組成成分,一定程度上受飼料脂肪酸含量的影響[15]。本實驗結果顯示,隨著投喂n-3 HUFA水平逐漸升高的飼料,可使細鱗鮭肌肉EPA和DHA的含量逐漸升高。這與在大西洋鮭[30]、虹鱒[31]、馬蘇大馬哈魚[13]和真鯛[16]的研究報道一致。同時,細鱗鮭肌肉中的EPA含量隨著飼料中n-3 HUFA水平的升高而不斷積累,而當飼料n-3 HUFA水平高于0.75%時,肌肉DHA水平保持在一個相對穩(wěn)定的水平,這與朱慶國等[19]斜帶石斑魚幼魚的研究一致,然而與劉興旺等[8]的關于軍曹魚肌肉EPA積累的結果有些差異,其原因與飼料中EPA與DHA的比例及不同魚類對EFA的需求和利用效能的不同所致。因此,細鱗鮭飼料中適宜的EFA種類(LA、LNA、EPA和DHA)及比例有待研究。從飼料中n-3 HUFA含量與肌肉中n-3 HUFA含量存在二次曲線y=-10.793x2+28.928x+1.1474,R2=0.9812關系來看,隨著飼料中n-3 HUFA水平的升高,細鱗鮭肌肉n-3 HUFA的含量積累到一定的含量,并不再升高,這與肌肉中DHA的積累是一致的,并與EPA不同。同時,飼料中DHA/EPA比恒定約為1.5,隨著飼料中n-3 HUFA含量的升高,肌肉中DHA/EPA比顯著下降,其比值大于飼料中的比值,也大于本課題組測定的野生細鱗鮭肌肉中DHA/EPA比值(2.34)[6],但D1.5組與養(yǎng)殖的比值類似(4.94)[6]。因此,如何在細鱗鮭飼料中添加合理的EPA和DHA比例及其對飼料中n-3 HUFA需求和肌肉DHA/EPA的影響,也需進一步研究。
飼料中添加適量的n-3 HUFA增加細鱗鮭的生長性能和改善肌肉的脂肪酸組成,尤其是EPA和DHA的含量。以增重率為評價指標,根據二次曲線模型,細鱗鮭對n-3 HUFA適宜需要量為0.69%。
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Requirementofdietaryn-3highlyunsaturatedfattyacidsforjuvenileBrachymystaxlenok
CHANG Jie,NIU Hua-xin,HU Zong-fu,YU Jian-hua,LI Shu-guo
(CollgeofAnimalScienceandTechnology,InnerMonglliaUniversityfortheNationalties,Tongliao,028000InnerMongllia,China))
In order to determine the demand of n-3 highly unsaturated fatty acids (HUFA),to reduce fish oil content in feed and reduce the cost of culture,the experiment was evaluated to the effects of different dietary levels n-3 HUFA on growth performance,body composition and fatty acid composition of muscle.The content of n-3HUFA in feed were 0.25,0.50,0.75,1.00 and 1.25% by adjusting the contents of EPA and DHA in feedstuff and defatted fishmeal,defatted soybean meal,gelatin and casein as the main protein source (D 0.25,D 0.50,D 0.75,D 1.00,D 1.25,and D 1.50).Fish were fed on six experimental feeds (60.0 ± 2.8 g) for 84 d.The results showed that n-3HUFA had no significant effect on survival rate and feed conversion rate (P>0.05),but had significant effects on final weight (FW),weight gain rate (WGR) and specific growth rate (SGR).FW,WGR and SGR increased firstly and then decreased with increasing dietary n-3HUFA levels,and maximum value of FW,WGR and SGR were obtain at D 0.75 group.The content of muscle 18∶1n-9 gradually decreased,while the level of 22∶6n-3 increased accordingly.In summary,WGR as an evaluation index,the requirement for n-3 HUFA of trout is about 0.69% of diet by the second-order polynomial regression analysis.
Brachymystaxlenok;n-3 HUFA;fatty acids composition;nutrient requirement
2017-04-29 ;
2017-08-29
國家自然科學基金(31260638,31360640和31460692);內蒙古自治區(qū)高等學?!扒嗄昕萍加⒉刨Y助計劃”項目(NJYT-14-B13)
常 杰(1980-),女,教授,主要從事水產動物營養(yǎng)與免疫研究。E-mail:changjieouc@163.com
牛化欣。E-mail:niuhx@imun.edu.cn
S963.16
A
1000-6907-(2017)06-0081-07