梁井林

（廣西上思縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，廣西上思縣 535599）

豬圓環(huán)病毒病與傳染性胸膜肺炎混合感染的診斷與分析

梁井林

（廣西上思縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，廣西上思縣 535599）

廣西上思縣某豬場(chǎng)育肥豬近期發(fā)生疫病，主要表現(xiàn)在病豬發(fā)熱、咳嗽、呼吸困難、體表發(fā)紺和急性死亡等癥狀。剖檢發(fā)現(xiàn)病豬氣管內(nèi)積聚血樣粘液，肺臟充血腫大，全身淋巴結(jié)腫大出血，脾臟腫大等典型病變。結(jié)合豬群臨床癥狀和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果最終確診該病例是由豬圓環(huán)病毒病和傳染性胸膜肺炎混合感染引起的。

豬圓環(huán)病毒??；傳染性胸膜肺炎；診斷；混合感染

豬圓環(huán)病毒病是由豬圓環(huán)病毒2型（Porcine circovirus type 2）引起的一種高度傳染性疫病。該病可以感染各年齡段的豬，在臨床上主要表現(xiàn)為斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征、豬皮炎腎病綜合癥、豬呼吸道疫病綜合征、母豬繁殖障礙、肉芽腫性腸炎和仔豬先天性震顫等多種癥狀[1]。豬圓環(huán)病毒感染的豬可以導(dǎo)致機(jī)體免疫系統(tǒng)受損，使其易于繼發(fā)其他病原，從而引發(fā)更為嚴(yán)重的臨床癥狀。該病的流行給我國(guó)養(yǎng)豬生產(chǎn)帶來(lái)巨大威脅。

豬傳染性胸膜肺炎（Porcine contagious pleuropneumia，PCP）是由豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌引起的一種細(xì)菌性呼吸道疫病。該病的急性型主要表現(xiàn)為急性出血性纖維素性肺炎，慢性型則以纖維素性壞死性胸膜肺炎為特征[2]。該菌可以感染各年齡段的豬，但是以2～5月齡的育肥豬最為多見(jiàn)。隨著現(xiàn)代養(yǎng)豬密度的增加以及免疫抑制性疫病的干擾，豬傳染性胸膜肺炎已經(jīng)成為阻礙我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的重要病原之一。

近年來(lái)，由于圓環(huán)病毒疫苗的廣泛使用，使豬圓環(huán)病毒病在大多數(shù)豬場(chǎng)中得到了較為有效的控制，但是部分豬場(chǎng)尤其是散養(yǎng)戶由于生物安全措施不健全以及疫苗免疫不合理等原因?qū)е聢A環(huán)病毒在豬群中循環(huán)傳播，豬群總體抗病能力低下，從而易于繼發(fā)細(xì)菌性疫病。筆者近期就診斷了一起豬圓環(huán)病毒病和傳染性胸膜肺炎混合感染的病例，現(xiàn)將診斷過(guò)程報(bào)告如下：

1 發(fā)病情況

2017年7月初，廣西上思縣某豬場(chǎng)育肥豬發(fā)生疫病。主要表現(xiàn)為育肥豬發(fā)熱，咳嗽，腹式呼吸，體表發(fā)紺等癥狀。急性發(fā)病豬在出現(xiàn)癥狀后半天內(nèi)即死亡，且死前鼻孔流出血樣液體。據(jù)養(yǎng)殖戶介紹，該豬場(chǎng)存欄育肥豬100頭，屬于自繁自養(yǎng)模式。在母豬配種前和仔豬斷奶后各免疫一次豬圓環(huán)滅活苗，豬傳染性胸膜肺炎沒(méi)有進(jìn)行免疫。待筆者前去豬場(chǎng)會(huì)診時(shí)，該豬場(chǎng)已有6頭育肥豬表現(xiàn)嚴(yán)重呼吸道癥狀，其中2頭豬已發(fā)病死亡。本次病例只波及4月齡的育肥豬，母豬和仔豬沒(méi)有出現(xiàn)臨床癥狀。

2 剖檢病變

病死豬臀部、腹部、耳根等部位發(fā)紺，鼻孔流血。剖檢發(fā)現(xiàn)病豬氣管積聚血樣泡沫樣液體。肺臟高度充血腫大，呈紫紅色，肺間質(zhì)增寬（圖1A）。胸腔積液，呈淡黃色。全身淋巴結(jié)腫大出血，尤其是腹股溝淋巴結(jié)腫大3倍左右。脾臟腫大（圖1B）。其他器官未見(jiàn)明顯病變。筆者采集病豬肺臟、淋巴結(jié)、脾臟等部位進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。

圖1 病豬典型病變照片

3 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

3.1 細(xì)菌分離鑒定

用無(wú)菌接種環(huán)采集病豬肺臟接種到含NAD（煙酰胺腺嘌呤二核苷酸）因子和5%犢牛血清的TSA培養(yǎng)基上，置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)約48h，觀察到光滑、半透明，針尖大小的菌落。無(wú)菌采集單個(gè)菌落進(jìn)行革蘭氏染色，在顯微鏡下看到革蘭氏陰性短小桿菌。參考張建新等[3]建立的豬胸膜肺炎放線桿菌PCR診斷方法對(duì)所分離的菌落進(jìn)行PCR鑒定。結(jié)果顯示，豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌陽(yáng)性（圖2）。

圖2 豬胸膜肺炎放線桿菌PCR檢測(cè)結(jié)果

3.2 病毒檢測(cè)

采集病豬肺臟、脾臟和淋巴結(jié)的少量組織進(jìn)行充分碾磨，加入適量的PBS后攪拌均勻并分裝到1.5mlEP管中，將組織勻漿反復(fù)凍融3次后置于普通離心機(jī)中進(jìn)行適當(dāng)離心，取離心后的上清液進(jìn)行病毒學(xué)檢測(cè)。分別參考羅廷榮等[4]建立的豬瘟病毒RT-PCR檢測(cè)方法、韋瑩等[5]建立的藍(lán)耳病病毒RT-PCR檢測(cè)方法和李瑩瑩等[6]建立的豬圓環(huán)病毒2型PCR檢測(cè)方法對(duì)組織病料進(jìn)行豬瘟、藍(lán)耳病和圓環(huán)病毒2型的檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果顯示，豬瘟和藍(lán)耳病陰性，豬圓環(huán)病毒2型陽(yáng)性（3）。

圖3 組織樣品病毒檢測(cè)結(jié)果

4 討論與小結(jié)

結(jié)合豬場(chǎng)發(fā)病情況、病豬剖檢病變以及實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果最終診斷出該病例是由豬圓環(huán)病毒2型和傳染性胸膜肺炎混合感染引起的。豬圓環(huán)病毒病是危害養(yǎng)豬業(yè)的一種重要免疫抑制性疫病，該病的病原感染機(jī)體后，可以在抗原遞呈細(xì)胞如樹突狀細(xì)胞和巨噬細(xì)胞上進(jìn)行復(fù)制，從而導(dǎo)致這些細(xì)胞的抗原遞呈能力下降，進(jìn)而影響T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞的充分激活[7]。同時(shí)有研究表明，PCV2可以上調(diào)機(jī)體IL-10的分泌[8]，而IL-10是一種強(qiáng)免疫抑制性細(xì)胞因子。因此，PCV2感染可以導(dǎo)致機(jī)體的先天性免疫和獲得性免疫全面受損，最終為其他病原的入侵提供了便利。

PCV2在豬群中普遍存在，一般情況下單獨(dú)感染不易引發(fā)臨床疫病，只有在其他刺激因素的影響下才能促進(jìn)疫病的發(fā)生。今年7月初，廣西普遍出現(xiàn)炎熱多雨的天氣，而該豬場(chǎng)并沒(méi)有采取有效的防濕降溫措施，導(dǎo)致豬出現(xiàn)高溫應(yīng)激，且豬舍潮濕易滋生細(xì)菌，豬群面臨巨大的感染壓力，導(dǎo)致豬體內(nèi)的PCV2活躍，從而引發(fā)臨床癥狀。PCV2感染機(jī)體后，豬群的抗病能力大大降低，使豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌乘虛直入，最終導(dǎo)致豬圓環(huán)病毒病和傳染性胸膜肺炎的混合感染。

當(dāng)前，防控豬圓環(huán)病毒病和豬傳染性胸膜肺炎主要依靠健全的生物安全措施和有效的疫苗免疫。豬場(chǎng)要采用自繁自養(yǎng)，全進(jìn)全出的養(yǎng)殖方式，若要引種或外購(gòu)仔豬，需將引進(jìn)的豬進(jìn)行隔離飼養(yǎng)，并做好各項(xiàng)血清學(xué)和病原學(xué)檢測(cè)，確保引進(jìn)豬群健康后方可入場(chǎng)。同時(shí)要做好豬場(chǎng)的日常消毒工作，防止病原的擴(kuò)散。豬場(chǎng)可以根據(jù)本場(chǎng)的實(shí)際情況選用合適的豬圓環(huán)病毒苗和豬傳染性胸膜肺炎菌苗，同時(shí)要定期檢測(cè)豬群抗體水平，從而制定合理的免疫程序。若暴發(fā)豬圓環(huán)病毒病和傳染性胸膜肺炎，應(yīng)及時(shí)將臨床健康豬進(jìn)行緊急免疫接種并隔離飼養(yǎng)，將發(fā)病嚴(yán)重或病死的豬進(jìn)行焚燒或深埋，同時(shí)對(duì)豬場(chǎng)環(huán)境和飼養(yǎng)工具進(jìn)行全面消毒，最后選用敏感藥物拌料飼喂一周，防止細(xì)菌的繼發(fā)感染，降低豬場(chǎng)損失。

[1]覃一峰，季程遠(yuǎn)，吳桂杰，等.豬圓環(huán)和偽狂犬混合感染引起育肥豬腸炎和呼吸道疫病的診斷與分析[J].廣西畜牧獸醫(yī)，2017，33（3）：137-139.

[2]鄧舜洲，張貽傳，全木華，等.豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌的分離鑒定[J].江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，25（6）：913-915.

[3]張建新，朱巖昆，馬金友，等.豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌PCR診斷方法的建立與應(yīng)用[J]. 中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2013，40（4）：69-72.

[4]羅廷榮，波丹，黃憲高，等.RT—PCR檢測(cè)豬瘟病毒初探[J].廣西農(nóng)業(yè)生物科學(xué)，2001，20（1）：17-20.

[5]韋瑩，洪紹鋒，覃艷然，等.一株Nsp2蛋白自然缺失123個(gè)氨基酸的PRRSV分離和鑒定[J]. 動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2015，36（10）：34-38.

[6]李瑩瑩.廣西陸川豬呼吸道疫病綜合征的流行病學(xué)調(diào)查及豬圓環(huán)病毒2型的分離鑒定[D]. 廣西大學(xué)，2014.

[7]林文君，黃明慶，殷海鵬.豬圓環(huán)病毒2型對(duì)豬的免疫抑制機(jī)理[J].畜牧獸醫(yī)科技信息，2010，（8）：17-18.

[8]史利軍，任林柱，李剛.豬圓環(huán)病毒2型免疫抑制機(jī)理研究進(jìn)展[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2009，30（3）：74-77.