程慶兵，劉 靜，汪海宣，苗仁華，葉紅兵

（合肥市食品藥品檢驗(yàn)中心，安徽 合肥 230000）

遏云茶中當(dāng)歸的質(zhì)量研究

程慶兵，劉 靜，汪海宣，苗仁華，葉紅兵

（合肥市食品藥品檢驗(yàn)中心，安徽 合肥 230000）

目的以當(dāng)歸對(duì)照藥材和阿魏酸、蒿本內(nèi)酯為指標(biāo)，研究并完善處方中當(dāng)歸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法采用薄層色譜法（TLC）為定性鑒別方法；HPLC法測(cè)定其中阿魏酸含量。結(jié)果不同批次遏云茶中當(dāng)歸對(duì)照藥材和阿魏酸、蒿本內(nèi)酯斑點(diǎn)清晰，分離度好，結(jié)果一致。含量測(cè)定阿魏酸平均含量為40 ug·g-1，回收率為100.1%，RSD=1.8%。結(jié)論定量定性方法準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)、重復(fù)性好。

遏云茶；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；薄層色譜；高效液相色譜

遏云茶主要作用為疏風(fēng)清熱，利喉開音，其中當(dāng)歸、生地等藥材行血中之滯；去瘀生新之功效。中醫(yī)認(rèn)為當(dāng)歸主治咳逆上氣?，F(xiàn)已證明，當(dāng)歸成分正丁烯夫內(nèi)酯和藁本內(nèi)酯對(duì)氣管平滑肌具有松弛作用；適用于咽部粘膜肥厚，咽后壁淋巴細(xì)胞濾泡增生[1]。遏云茶作為安徽省中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院制劑室生產(chǎn)的院內(nèi)制劑，其質(zhì)量的主要環(huán)節(jié)沒有完整的理化和儀器檢驗(yàn)，由生產(chǎn)者憑經(jīng)驗(yàn)控制，增加了質(zhì)量的不可控性。查閱相關(guān)文獻(xiàn)和期刊，均沒有這方面的記載和報(bào)道，故建立遏云茶的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)有非常重要的意義。

1 材 料

戴安U-3000高效液相色譜儀（DAD檢測(cè)器，chrome leon7.2軟件）；超聲波清洗器（Fisherbrand FB15065）；XPE-205電子分析天平（Mettler Toledo）；CAMAG TLC VISUALIZER薄層成像系統(tǒng)（瑞士卡瑪）；CAMAG LIONMAT5半自動(dòng)點(diǎn)樣儀（瑞士卡瑪），IKA A11 basic中藥打粉機(jī)，硅膠G薄層板（Merck、青島海洋、煙臺(tái)信德）。

阿魏酸對(duì)照品（中檢院；110773-201614；含量為99.6%）；蒿本內(nèi)酯對(duì)照品（中檢院；111737-201507）；當(dāng)歸對(duì)照藥材（中國藥品生物制品檢定院；批號(hào)：120927-201516）；遏云茶（批號(hào)：20150806，20151016，20150526等）；甲醇（GR）；乙腈（GR）；重蒸餾水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜[2]

2.1.1 制備對(duì)照藥材溶液與對(duì)照品溶液

取當(dāng)歸（Chinese Angelica）對(duì)照藥材0.5 g置于干燥錐形瓶中，加乙醚20 mL，超聲10分鐘，濾過，取續(xù)濾液置蒸發(fā)皿中，水浴鍋上蒸干，殘?jiān)右掖? mL使其溶解，即得對(duì)照藥材溶液。

精密稱取阿魏酸對(duì)照品10 mg置10 mL量瓶中，加適量甲醇溶解，并用甲醇稀釋定容搖勻，制成濃度為1 mg/mL的溶液；取蒿本內(nèi)酯對(duì)照品0.1 mL置50 mL量瓶中，精密加入甲醇30 mL，搖勻。取阿魏酸對(duì)照品溶液5 mL、蒿本內(nèi)酯對(duì)照品溶液1 mL，混勻，作為混合對(duì)照品溶液。

2.1.2 制備供試品溶液

取遏云茶粉末（過藥典四號(hào)篩）5 g置于干燥錐形瓶中，加乙醚20 mL，超聲10分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右掖? mL使其溶解，作為供試品溶液1；另取遏云茶粉末（過藥典四號(hào)篩）5 g置于離心管中，加入1%碳酸氫鈉溶液50 mL，超聲10分鐘，離心，取上清液用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2～3，倒入分液漏斗中，用乙醚20 mL分別振搖提取2次，合并乙醚液于蒸發(fā)皿中，置水浴鍋上蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，即得供試品溶液2。

2.1.3 制備陰性供試品溶液

按遏云茶處方比例（除當(dāng)歸），制成陰性供試品，按2.1.2的方法來分別制備出陰性供試品溶液1和陰性供試品溶液2。

2.1.4 薄層色譜

照薄層色譜法（中國藥典2015年版四部 通則0502）試驗(yàn)分別進(jìn)行如下兩個(gè)薄層試驗(yàn)。

①吸取當(dāng)歸對(duì)照藥材溶液、供試品溶液1和陰性供試品溶液1各5 μL，點(diǎn)于同一硅膠G板（merk）上，以乙酸乙酯-正己烷（1：4）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。如圖1所示，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，供試品顯與之相同顏色的熒光斑點(diǎn)，而陰性供試品在相應(yīng)的位置上卻無相同顏色的熒光斑點(diǎn)，并且8批不同批號(hào)的遏云茶粉末與對(duì)照藥材比較均能出現(xiàn)相同Rf值斑點(diǎn)。

②吸取混合對(duì)照品溶液1 μL、陰性供試品溶液2和供試品溶液2各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G板（merk）上，以環(huán)己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（4：1：1：0.1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。如圖2所示，供試品色譜中，在與對(duì)照品相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性供試品則在相應(yīng)的位置上無相同顏色的熒光斑點(diǎn)，8批不同批號(hào)的遏云茶與對(duì)照品比較均能出現(xiàn)相同Rf值斑點(diǎn)。

圖1 遏云茶薄層鑒別1

圖2 遏云茶薄層鑒別2

注：9、10為同一批

2.2 阿魏酸含量測(cè)定

2.2.1 波長(zhǎng)的選擇[2]

參考中國藥典2015年版一部中當(dāng)歸的含量測(cè)定方法以及其他相關(guān)文獻(xiàn)資料，本次試驗(yàn)選擇316 nm作為液相色譜的檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.2.2 色譜條件

流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸（17：83）；波長(zhǎng)316 nm；WatersSunfier柱；柱溫設(shè)為30℃；流速1.0 ml/min；進(jìn)樣量10 μL；理論塔板數(shù)按阿魏酸素峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。見下圖1：

圖1 高效液相色譜圖

A：溶劑 B：對(duì)照品 C：陰性對(duì)照 D：樣品

2.2.3 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取阿魏酸對(duì)照品47.24 mg，加甲醇溶解制成對(duì)照品儲(chǔ)備液（941.021 μg·mL-1）。

2.2.4 供試品溶液的制備[3]

精密稱取遏云茶細(xì)粉5 g置于燒瓶中，精密加入20 mL 70%乙醇，密塞，稱定重量，加熱回流30分鐘，放冷，再稱定重量，并用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用濾紙濾過取續(xù)濾液，精密量取10 mL置蒸發(fā)皿中，蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，并用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2，傾入分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取4次（20，20，15，15 mL），合并提取液，蒸干，用甲醇溶解并定容至5 mL量瓶中，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.5 線性關(guān)系分析

精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液分別制成濃度為4.705、9.410、18.820、37.640、94.102μg·mL-1的系列濃度。按色譜條件方法進(jìn)行檢測(cè)，求得線形回歸方程：A=0.05469C-0.52266，相關(guān)系數(shù)r=0.9999。結(jié)果表明濃度在4.705 μg·mL-1～94.102 μg·mL-1，范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

2.2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取批號(hào)20150106的樣品，同供試品溶液的制備方法處理，測(cè)定阿魏酸峰面積A。重復(fù)性良好。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密量取阿魏酸對(duì)照品儲(chǔ)備液（941.021 μg·mL-1）1 mL置50 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，于室溫下分時(shí)段測(cè)定，結(jié)果顯示阿魏酸對(duì)照品溶液在8小時(shí)內(nèi)較穩(wěn)定。

2.2.8 計(jì)算加樣回收率

取樣品（批號(hào)為20150106），取9份，分別精密加入3個(gè)梯度量的對(duì)照品，再同2.3.2方法處理。結(jié)果：平均回收率為100.1%，RSD為1.73%（n=9），此結(jié)果表明使用本方法具有較高的準(zhǔn)確性。

2.2.9 樣品含量測(cè)定

取本品，按2.3.4方法處理，作為供試品溶液。按測(cè)定出的阿魏酸峰面積A，計(jì)算樣品中阿魏酸的含量，結(jié)果見表1。

表1 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討 論

3.1 本方法采用了不同廠家，不同批次的硅膠G板，采用上述兩種展開劑，國產(chǎn)普通硅膠G板和進(jìn)口Merk板在紫外光燈（365 nm）下檢視均斑點(diǎn)清晰明顯，陰性對(duì)照沒有干擾，且分離效果更好。選用薄層色譜法對(duì)遏云茶中當(dāng)歸進(jìn)行薄層定性鑒別，方法可行，斑點(diǎn)清晰，分離效果好，不失為遏云茶中當(dāng)歸的有效定性鑒別方法。

3.2 本文阿魏酸的含量測(cè)定，采用乙醇提取直接進(jìn)樣，干擾成分多，計(jì)算出的阿魏酸含量偏低?？赡苁怯捎诎⑽核釣橛袡C(jī)酸類，而中藥提取液的WM值多偏酸性，使其不易與其他化學(xué)成分產(chǎn)生作用而影響其提取轉(zhuǎn)移率。故采用調(diào)節(jié)pH值至酸性，再用乙醚提取，從而減少干擾，提高轉(zhuǎn)移率。

3.3 由于復(fù)方中藥成分多樣，而我們分析技術(shù)有限，在本文中我們僅對(duì)阿魏酸這個(gè)單一的成分進(jìn)行分析，并不能對(duì)復(fù)方的整體質(zhì)量進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，具有相當(dāng)?shù)钠嫘?。如果想把中藥整體的研究更加的科學(xué)合理，還必須結(jié)合處方中的其他味藥材以及藥理試驗(yàn)、臨床試驗(yàn)等進(jìn)行綜合性的評(píng)定。

本文建立了遏云茶中當(dāng)歸的質(zhì)量控制方法，得出最優(yōu)色譜條件。本法樣品處理簡(jiǎn)單、分析周期短、重現(xiàn)性好、準(zhǔn)確性高。

[1] 程樹玲，曾 莉，尹宏怡.利咽開咽茶與遏云茶治療聲音嘶啞251例報(bào)告[J].安徽中醫(yī)臨床雜志，2004，2(6):8-9.

[2] 中國藥典2015年版[s].一部，2015:133-134.

[3] 王淑美.馮素香，郭亞健，等.腦絡(luò)通不同提取工藝中阿魏酸含量變化的研究含量[J].《中藥新藥與臨床藥理》，2007，18(3):238-240.

R284.1

B

ISSN.2095-8242.2017.060.11866.03

本文編輯：劉帥帥