普通肥皂和基于三氯卡班的抗菌皂殺菌效果對(duì)比

通過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了普通肥皂和殺菌皂的殺菌效果。普通皂和包含0.3%三氯卡班的殺菌皂在22℃和40℃條件下暴露20s后，在10種革蘭氏陽性菌和10種革蘭氏陰性菌上測(cè)試。除了一個(gè)特例（糞腸球菌ATCC 19433， 40℃條件下）外，在任一溫度下，兩種肥皂并沒有顯著區(qū)別?；谌瓤ò嗟姆试硎褂弥袑?duì)于細(xì)菌量的降低沒有明顯作用。

手洗是人們抵御病原體和感染最簡單也是性價(jià)比最高的方案。標(biāo)記“抗菌”或“抗微生物”的肥皂預(yù)計(jì)會(huì)繼續(xù)增長，大量的商品肥皂出現(xiàn)在各個(gè)工業(yè)的市場(chǎng)。抗菌皂指的是包含抗菌劑活性物質(zhì)的肥皂，普通皂指的是不包含抗菌劑（或者低含量）的肥皂。

三氯卡班是具有廣譜殺菌作用，常常用在大量的個(gè)人護(hù)理產(chǎn)品中，其在商品塊皂中的應(yīng)用尤其普遍。有報(bào)道稱，美國84%的抗菌皂包含三氯卡班。然而，三氯卡班有多種不良的環(huán)境和健康后果，例如，它會(huì)導(dǎo)致細(xì)菌的抗藥性，其中可能包含致癌的雜質(zhì)，可能會(huì)導(dǎo)致急性或慢性中毒，會(huì)擾亂內(nèi)分泌系統(tǒng)，三氯卡班本身是過敏原，同時(shí)是環(huán)境中難以消除的污染物。因此，人們擔(dān)心抗菌皂或三氯卡班的使用對(duì)健康有害。因此，美國食品和藥物管理局在2013年12月頒布了建議條款，宣稱沒有足夠的臨床數(shù)據(jù)證明抗菌皂在防治疾病方面的有效性比普通皂更好。在此份建議中，三氯卡班被分類為IIISE組，意味著需要更多的數(shù)據(jù)來證明其有效性和安全性。

殺菌劑的抗菌活性一般用最低抑菌濃度（MICs）來檢測(cè)，然而，F(xiàn)DA宣稱MICs對(duì)于證明抗菌皂的有效性并不適用，因?yàn)橄M(fèi)者暴露在抗菌產(chǎn)品中只有很短的時(shí)間，而MIC測(cè)試需要長時(shí)間完成（至少一天）。因此，接觸時(shí)間和濃度應(yīng)該代表真實(shí)生活中的情形。此外，抗菌劑有效成分的活性評(píng)估測(cè)試應(yīng)采用20種參考菌株或者有代表性的臨床分離菌。20種菌株應(yīng)包含10種革蘭氏陽性菌和10種革蘭氏陰性菌（表1和表2）。

到目前為止，還沒有關(guān)于含三氯卡班抗菌皂和普通肥皂在20種菌株中的殺菌效果對(duì)比。因此，本研究的目的是通過分別在室溫下（22℃）和溫水中（40℃）進(jìn)行短時(shí)間接觸20s（推薦的手洗方法和消費(fèi)者習(xí)慣）研究普通皂和含0.3%三氯卡班的皂對(duì)20種細(xì)菌的抗菌活性。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 實(shí)驗(yàn)方法

樣品皂的抗菌活性使用time-kill實(shí)驗(yàn)測(cè)定，該方法為臨床與實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)推薦（方法M26-A，殺菌劑殺菌活性劑測(cè)定方法），在本研究中稍作修改。

表1 初始菌數(shù)量和22℃條件下暴露于一般肥皂或含0.3%三氯卡班抗菌皂20s后恢復(fù)菌數(shù)量

表2 初始菌數(shù)量和40℃條件下暴露于一般肥皂或含0.3%三氯卡班抗菌皂20s后恢復(fù)菌數(shù)量

1.2 菌種培養(yǎng)和細(xì)胞懸浮液

本實(shí)驗(yàn)采用了FDA建議的20種菌株。每一種菌株分別通過以下過程活化，首先通過接種環(huán)將其轉(zhuǎn)移到10mL Mueller-Hinton培養(yǎng)基中，然后置于帶螺旋帽的試管中，最后將其放置到有利于細(xì)菌生長的最佳環(huán)境：對(duì)于單核細(xì)胞李斯特菌，30℃，24h；空腸彎曲桿菌，42℃，24h；其他菌種均為37℃，24h?？漳c彎曲桿菌用CampyPak Plus （Difco）在包含5%-12%二氧化碳的微氧環(huán)境中培養(yǎng)。其他菌株在好氧條件下培養(yǎng)。每種菌株的10mL培養(yǎng)液置于塑料離心管中，在3000倍重力加速度的條件下離心分離15min收集(Centra-CL2, IEC, Needham Heights,MA, USA)。

傾倒上清液后，菌片用0.9%的無菌鹽水洗滌兩次，最后被重新懸浮到0.9%無菌鹽水中。

1.3 測(cè)試普通皂和抗菌皂的抗菌性實(shí)驗(yàn)

外購普通皂（天然色澤白茶和維生素E甘油皂，Dial Corp., Scottsdale, AZ, USA）和包含0.3%三氯卡班的抗菌皂（抗菌除味皂，白色，Dial Corp），兩種皂的成分在其公司網(wǎng)站上均有注明。FDA已經(jīng)將非處方藥使用的抗菌劑分為了20種類型（包含三氯卡班，三氯生，和氯二苯酚），本研究里使用的普通皂不包含這20種成分中的任意一種。

本實(shí)驗(yàn)條件符合消費(fèi)者實(shí)際手洗的程序。醫(yī)療感染控制實(shí)踐咨詢委員會(huì)包括疾病預(yù)防控制中心、世界健康組織、韓國食品醫(yī)藥管理委員會(huì)。該委員會(huì)建議人們溫水洗手20s。雖然精確的溫水溫度難以模擬，一般大約40℃，這個(gè)溫度常常用來評(píng)估手洗和其他標(biāo)準(zhǔn)方法的有效性（American Society for Testing and Materials Standard E1174）。然而，由于許多消費(fèi)者習(xí)慣用自來水沖洗手，本實(shí)驗(yàn)采用兩個(gè)溫度：22℃（室溫）和40℃（溫水溫度），接觸時(shí)間分別為10、20和30s。

兩種樣品肥皂都為塊皂，樣品皂用經(jīng)過消毒的蒸餾水配成1:5的溶液（最低稀釋比，達(dá)到產(chǎn)生滿足初步實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定液體）。10mL稀釋的樣品皂液用無菌注射器轉(zhuǎn)移到消毒的試管中。試管于水浴中預(yù)先加熱達(dá)到22℃或者40℃。100uL的每種菌液轉(zhuǎn)移至上述皂液中，保持菌液濃度大約為6-7（等于log cfu/mL，cfu為菌落形成單位，colony-forming units）。接種后的樣品加熱到22℃或40℃，維持20s。如果觀察到任何普通皂和抗菌皂抗菌性能的差異，需要補(bǔ)做相應(yīng)條件下暴露10s或者30s額外實(shí)驗(yàn)。所有樣品分成3份，平行進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.4 分析

1.4.1 微生物分析

達(dá)到預(yù)期接觸時(shí)間后，將90mL Dey/Engley中性緩沖液（Difco）立刻加入到每一份處理過的樣品中以終止所有的殺菌活性。10倍稀釋的樣品在230r/min的勻質(zhì)器中混合均勻1min。然后樣品用0.9%無菌鹽液稀釋10倍。取0.1mL樣品在Mueller-Hinton瓊脂板中在上述每種條件下分散培養(yǎng)兩份。

1.4.2 統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)用SAS9,13版本中ANOVA模型來分析(SAS Institute Inc., Cary, NC, USA)。ANOVA測(cè)試顯示出顯著結(jié)果（P＜0.05），均值可用Tukey多范圍分析得到。

2 結(jié)果和討論

表1和表2顯示了暴露在普通皂和抗菌皂，22℃和40℃各20s后的恢復(fù)菌群數(shù)量。22℃時(shí)，暴露在樣品皂中菌種數(shù)量的降低根據(jù)目標(biāo)菌種的不同而有所差異：在普通皂中，降低范圍從0到3.2log cfu/mL（金黃色葡萄球菌， ATCC 29213），在抗菌皂中從0到3.5 log cfu/mL（金黃色葡萄球菌， ATCC 6538）。40℃的數(shù)據(jù)范圍在普通皂中從無到3.6 log cfu/mL（金黃色葡萄球菌， ATCC 29213），在抗菌皂中從無到3.8 log cfu/mL降低(糞腸球菌 ATCC 19433)。

不考慮皂的類型，對(duì)革蘭氏陽性菌（包括糞腸球菌、金黃色葡萄球菌、釀膿鏈球菌、李斯特菌）的抗菌活性優(yōu)于對(duì)革蘭氏陰性菌（如空腸彎曲桿菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、沙門氏菌、索氏志賀氏菌）(P＜0.05)。唯一例外的是糞腸球菌AATCC 19433在40℃的表現(xiàn)。這個(gè)例子中，抗菌皂比普通皂更有效（3.8 log 降低vs 2.5 log 降低）。更多的測(cè)試在細(xì)菌暴露在皂中10s和 30s的時(shí)候進(jìn)行。普通皂對(duì)于糞腸球菌 ATCC 19433抗菌效果低于抗菌皂(P＜0.05); 普通皂在10s和30s時(shí)候的log降低為2.0和3.0 log cfu/mL，抗菌皂的在10s和30s的log降低為3.4和5.3 log cfu/mL。

本研究的目的是經(jīng)驗(yàn)上檢測(cè)抗菌皂和普通皂的殺菌活性差異。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果看，除一個(gè)特例(糞腸球菌 ATCC 19433， 40℃條件下)外，殺菌皂一般對(duì)于20種細(xì)菌在常用溫度下并未更加有效。三氯卡班是最常應(yīng)用的殺菌活性成分，其殺菌活性在細(xì)菌懸浮液得到體現(xiàn)。然而，普通皂和包含三氯卡班的抗菌皂抗菌活性幾乎一致。一個(gè)可能的原因是暴露時(shí)間。三氯卡班的抑菌活性一般采用和MIC一樣的方式來測(cè)定，需要測(cè)試材料的連續(xù)暴露。這在真實(shí)情形下很難做到，人們的平均洗手時(shí)間非常短。這是為什么本研究中細(xì)菌暴露在皂中的時(shí)間非常短（最長30s）。因此，暴露時(shí)間太短以至于沒有明顯的效果。雖然短時(shí)間的體外測(cè)試沒有效果，洗手后手上三氯卡班的殘留還會(huì)起到殺菌的作用。然而，皮膚上的抗菌劑殘留在帶來潛在好處的同時(shí)，也可能會(huì)導(dǎo)致健康問題。

商品肥皂包含很多其他成分。關(guān)于三氯卡班的機(jī)理還不明確，但一般來說，認(rèn)為機(jī)理和三氯生相似（另一種殺菌活性成分，廣泛用于皂中），因兩者結(jié)構(gòu)相似。三氯生非特異吸附于細(xì)菌細(xì)胞膜，改變其滲透性能。三氯生的抗菌作用被肥皂中所包含的表面活性劑所影響。表面活性劑形成疏水鏈在內(nèi)，親水基在外的膠束。這種結(jié)構(gòu)從環(huán)境中隔離三氯生，在表面活性劑溶液中比在水溶液中顯著降低殺菌活性。三氯卡班的殺菌活性可能受到同樣的作用。本研究中的皂還包含其他成分，這些成分可能也降低三氯卡班的作用。

只有一種包含0.3%三氯卡班的產(chǎn)品被評(píng)估，也有必要評(píng)估一系列含不同三氯卡班的肥皂以確定三氯卡班的作用。另外，包含三氯卡班的皂的體內(nèi)去污效果評(píng)估是另一個(gè)潛在課題。

3 結(jié)論

據(jù)作者所知，這是第一篇根據(jù)消費(fèi)者通常的洗手習(xí)慣，測(cè)試抗菌皂對(duì)所有的推薦菌種的抗菌性的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。在模擬真實(shí)生活情形的實(shí)驗(yàn)條件下，結(jié)果顯示除了一種細(xì)菌（糞腸球菌 ATCC 19433）外，包含0.3%三氯卡班的抗菌皂并不比普通皂抗菌性能更好。

A Contract of Sterilizing Effect between Regular Soap and Triclocarban-based Antiseptic Soap

The experiment aims to testify the sterilizing effect of regular soap and antiseptic soap by measuring the effect on ten kinds of gram-positive bacteria and ten kinds of gram-negative bacteria after exposing regular soap and 0.3% triclocarban-based antiseptic soap to the condition with the temperature separately 22℃and 40℃ for 20 seconds.Nevertheless, except for an exception, which is, enterococcus faecalis ATCC19433 under 40℃, there is no distinct di ff erences between the two kinds of soaps under any above-mentioned temperatures. There is no obvious e ff ect of reducing the number of bacterium proved when triclocarban-based antiseptic soap is used.

（本文由中化化工科學(xué)技術(shù)研究總院李遵峰譯自《Jour of Hospital Infection 》942016276-280）