李 迎，崔曉霞，尚世臣，趙 權(quán)，李桂軍，王冬平*，陳振文

(1.軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，北京 100071； 2.首都醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部，北京 100069； 3.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，長(zhǎng)春 130118)

研究報(bào)告

不同樣本和方法對(duì)測(cè)定大鼠血液生化指標(biāo)的影響

李 迎1,3，崔曉霞1，尚世臣1，趙 權(quán)3，李桂軍1，王冬平1*，陳振文2*

(1.軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，北京 100071； 2.首都醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部，北京 100069； 3.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，長(zhǎng)春 130118)

目的比較血清和血漿兩種不同樣本和不同測(cè)試方法對(duì)大鼠血液生化指標(biāo)測(cè)定值、血糖測(cè)定值的影響。方法用血糖儀測(cè)定來(lái)源相同大鼠的全血血糖值，然后對(duì)其血清和血漿樣本進(jìn)行常規(guī)生化指標(biāo)檢測(cè)。結(jié)果在血清與血漿樣本進(jìn)行19個(gè)常規(guī)生化項(xiàng)目檢測(cè)中，ALB、TP、ALP、CHOL、URIC、GLU、Mg、LD、Ca差異有顯著性(P< 0.05),在其余10項(xiàng)血清與血漿檢測(cè)值比較中，差異無(wú)顯著性(P> 0.05)。不同樣本和不同方法對(duì)血糖的檢測(cè)結(jié)果分析差異有顯著性(P< 0.05)。結(jié)論不同樣本和方法對(duì)血清與血漿中部分生化項(xiàng)目檢測(cè)時(shí)存在差異，不同方法和樣本檢測(cè)血糖結(jié)果也存在差異。

生化指標(biāo)；血清；血漿；大鼠

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血液生化參考值的建立是判斷動(dòng)物健康狀況和選擇合格動(dòng)物的標(biāo)準(zhǔn)，是臨床醫(yī)療和生物醫(yī)學(xué)研究中的重要基礎(chǔ)數(shù)據(jù)[1]。隨著科學(xué)技術(shù)不斷發(fā)展，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的血液生理生化指標(biāo)的檢測(cè)方法和儀器發(fā)生了很大的變化，檢測(cè)數(shù)據(jù)與傳統(tǒng)的方法有一定的差異。為確定檢測(cè)數(shù)據(jù)的可比性，本實(shí)驗(yàn)采用全自動(dòng)生化儀和血糖儀對(duì)同一來(lái)源成年大鼠的血清和血漿進(jìn)行常規(guī)生化指標(biāo)測(cè)定，探討血清和血漿對(duì)常規(guī)生化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果的影響以及不同的檢測(cè)方法和樣本對(duì)血糖檢測(cè)指標(biāo)的影響。

1 材料和方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

清潔級(jí)Wistar雌性大鼠29只，8周齡，體重180～220 g。軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供[SCXK(軍)2012—0004]，動(dòng)物飼養(yǎng)于屏障環(huán)境內(nèi)，日常飼喂以60Co照射消毒飼料及飲用消毒用水，實(shí)驗(yàn)于軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行[SYXK(軍)2012—0021]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)首都醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(No.AEEI-2017-032)。

1.2主要試劑與儀器

Beckman公司提供的原裝配套試劑；乙二胺四乙酸二甲(EDTA-K2)作為抗凝劑；羅康全活力型血糖試紙、羅康全活力型血糖儀(型號(hào)：Accu-Chek Active、廠家：德國(guó)羅氏診斷有限公司)；Beckman全自動(dòng)生化分析儀(型號(hào)：CX5PRO、廠家：美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司)；低溫離心機(jī)(型號(hào)：CF16RX、廠家：HITACHI)。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 血液標(biāo)本的采集和處理

Wistar大鼠空腹12～24 h后，眼眶靜脈取血，靜止30 min，5000 r/min離心10 min制備血清，同時(shí)在抗凝管加入血液顛倒混勻(抗凝劑枸櫞酸鈉和血液的比例為1∶9)，離心(離心條件同上)后所得的上清液即為血漿。

1.3.2 血糖儀的檢測(cè)

采血即時(shí)應(yīng)用血糖儀測(cè)定血糖值。

1.3.3 樣品檢測(cè)指標(biāo)

應(yīng)用Beckman全自動(dòng)生化分析儀CX5的血清和血漿兩種檢測(cè)模式檢測(cè)，檢測(cè)項(xiàng)目包括：鎂(Mg)、鈣(Ca)、磷(PO4)、葡萄糖(GLU)、總膽固醇(CHOL)、甘油三酯(TG-B)、高密度脂蛋白膽固醇(HDLD)、總膽紅素(TBIL)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、乳酸脫氫酶(LD)、肌酸激酶(CK)、淀粉酶(AMY7)、尿素氮(BUN)、肌酐(CR-S)、尿酸(URIC)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1檢測(cè)結(jié)果及統(tǒng)計(jì)分析

19項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)的結(jié)果：ALB、CHOL、URIC、GLU差異有顯著性(P< 0.05)，TP、ALP、Mg、LD、Ca差異有顯著性(P< 0.01)，其它指標(biāo)差異無(wú)顯著性。(見(jiàn)表1)。

2.2不同的檢測(cè)方法和介質(zhì)對(duì)血糖檢測(cè)的影響

血糖儀直接測(cè)定的血糖值與生化儀測(cè)定的血清和血漿中葡萄糖值(見(jiàn)圖1)。不同介質(zhì)對(duì)常規(guī)生化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果的比較使用ANOVA單因素方差分析，同時(shí)進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊時(shí)使用LSD統(tǒng)計(jì)方法進(jìn)行組間兩兩比較，P< 0.05為差異有顯著性(見(jiàn)表2)。

表1 血清與血漿19項(xiàng)生化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果比較

注：與血清比，*P< 0.05，**P< 0.01。

Note.*P< 0.05，**P<0.01，vs. the serum.

表 2 不同的檢測(cè)方法和介質(zhì)對(duì)血糖檢測(cè)的結(jié)果

注：括號(hào)內(nèi)的數(shù)據(jù)為動(dòng)物數(shù)。與血糖儀值比較，*P< 0.05。

Note.The data in parentheses are number of animals. Compared with the results detected with blood gluometer showing a significant difference(P<0.05).

圖1 三者血糖值比較圖Fig.1 Comparison of the serum and plasma glucose levels detected with a glucometer

3 討論

國(guó)內(nèi)外關(guān)于血漿與血清檢測(cè)結(jié)果比較分析的報(bào)道較多，但說(shuō)法各不相同[2]。血漿標(biāo)本具有無(wú)需等待血液凝固，縮短檢驗(yàn)時(shí)間和提高檢驗(yàn)效率等優(yōu)點(diǎn)，因此成為血常規(guī)生化檢驗(yàn)的理想研究標(biāo)本，但血漿和血清兩者自身成分差異決定了檢查結(jié)果存在必然差異[3]。我們通過(guò)對(duì)血清和血漿19項(xiàng)生化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較，在常規(guī)生化指標(biāo)檢測(cè)中ALB、TP、ALP、CHOL、URIC、GLU、Mg、LD、Ca差異均有顯著性(P< 0.05)。在血糖儀和生化儀中血清血漿三者的方差分析中，P值為0.000(P<0.05),差異有顯著性。因此在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中，血液生化指標(biāo)檢測(cè)有必要進(jìn)行方法的一致性檢測(cè)并加以標(biāo)注，以確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。

實(shí)驗(yàn)表明，不同介質(zhì)對(duì)常規(guī)生化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果有影響，而且不同的檢測(cè)方法和介質(zhì)對(duì)血糖檢測(cè)影響較大。在檢查特定生化項(xiàng)目時(shí)，張正云等[4]報(bào)道血漿標(biāo)本檢測(cè)中Ca、TP、ALT、AST存在顯著差異，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果ALT、AST差異不顯著。

羅氏血糖試紙說(shuō)明書(shū)標(biāo)明血糖儀測(cè)定值是應(yīng)用血漿進(jìn)行測(cè)試，但在本實(shí)驗(yàn)結(jié)果中，雖然血糖的不同介質(zhì)和方法測(cè)試結(jié)果差異顯著，但是血糖儀測(cè)定值卻與血清測(cè)定的葡萄糖值相近。

綜上所述，各實(shí)驗(yàn)室在采集標(biāo)本的過(guò)程中應(yīng)根據(jù)測(cè)定的項(xiàng)目來(lái)選擇合適的標(biāo)本和適當(dāng)?shù)姆椒?，這樣才不會(huì)影響檢查結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，不同的檢測(cè)方法和檢測(cè)標(biāo)本所獲得的生化和血糖指標(biāo)存在較大差異。

[1] 王冬平,隋麗華,尚世臣,等.清潔級(jí)SD大鼠血液生理生化指標(biāo)的測(cè)定[J].中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志,2009,19(9):44-46.

[2] 梁吉平,孫振濤.在生化項(xiàng)目檢測(cè)中不同血液樣本的檢測(cè)結(jié)果比較[J].中國(guó)保健營(yíng)養(yǎng),2012,22(9):3538.

[3] 姚維菊.不同血液樣本在常規(guī)生化項(xiàng)目檢測(cè)中的結(jié)果比較[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2013,10(4):468-469.

[4] 張正云,何清.急診患者三種血液標(biāo)本檢測(cè)電解質(zhì)的可比性[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2013，10(6):734-735.

Effectsofdifferentsamplesandmethodsonthedeterminationofbloodbiochemicalindexesinrats

LI Ying1,3， CUI Xiao-xia1， SHANG Shi-chen1， ZHAO Quan3， LI Gui-jun1， WANG Dong-ping1*， CHEN Zhen-wen2*

(1.Military Academy of Medical Sciences Laboratory Animal Center，Beijing 100071,China； 2.Capital University of Medical Sciences Laboratory Animal Department，Beijing 100069； 3.Jilin Agricultural University College of Animal Science and Technology，Changchun 130118)

ObjectiveTo compare the effects of two different samples and different test methods on blood biochemical indexes and blood glucose values in rats.MethodsGlucose levels in the serum and plasma samples were detected with a blood glucometer, and the biochemical parameters in the serum and plasma were determined by routine blood biochemistry.The data were statistically compared and analyzed to determine if there are some significant differences.ResultsAmong the 19 biochemical indexes of serum and plasma specimens, nine parameters, i.e., ALB,TP,ALP,CHOL,URIC,GLU,Mg,LD,Ca showed significant differences(P< 0.05),while the other 10 indexes showed no significant difference (P> 0.05).Different samples and different methods had significant differences in the detection of blood glucose (P< 0.05).ConclusionsDifferent method and samples impact on the detection of blood glucose and some other serum and plasma biochemical indexes.

Routine biochemical test; Serum; Plasma; Rat

R-33

A

1671-7856(2017) 10-0007-03

10.3969.j.issn.1671-7856. 2017.10.002

2016-12-05

國(guó)家科技支撐計(jì)劃課題(2015BA109B01-04)；國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(3137227)。

李迎(1993-)，女，碩士，研究方向：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生物學(xué)特性研究。E-mail: 651998038@qq.com

王冬平(1964-)，女，副研究員，研究方向：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生物學(xué)特性研究。E-mail: Wangdp6493@126.com。

陳振文(1959-)，男，教授，研究方向：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遺傳學(xué)。E-mail: czwen@ccmu.edu.cn。*共同通訊