李彥飛，范東升，黃華樹，張小軍*

（1.中農(nóng)立華生物科技股份有限公司，北京 100052；2.中國農(nóng)藥工業(yè)協(xié)會，北京 100723）

20%噻呋·吡唑酯懸浮劑高效液相色譜分析

李彥飛1，范東升2，黃華樹2，張小軍1*

（1.中農(nóng)立華生物科技股份有限公司，北京 100052；2.中國農(nóng)藥工業(yè)協(xié)會，北京 100723）

采用高效液相色譜法，以甲醇＋水為流動相，在235 nm波長下對20%噻呋·吡唑酯懸浮劑中有效成分進行定量分析。吡唑醚菌酯和噻呋酰胺的標準偏差分別為0.045和0.030，變異系數(shù)分別為0.45%和0.30%，平均回收率均為99.7%，線性相關(guān)系數(shù)分別為0.999 9和1.000 0。

吡唑醚菌酯；噻呋酰胺；高效液相色譜；分析

Abstract:A method for separation and quantitative analysis of thifluzamide+pyraclostrobin 20%SC by HPLC was established,using methanol and water as mobile phase,with UV wavelength detector at 235 nm.The results showed that the standard deviations of pyraclostrobin and thifluzamide were 0.045 and 0.030,the coefficients of variation were 0.45%and 0.30%,the average recoveries were both 99.7%,the linear correlation coefficients were 0.999 9 and 1.000 0.

Key words:pyraclostrobin;thifluzamide;HPLC;analysis

吡唑醚菌酯（pyraclostrobin）是巴斯夫公司于2002年上市的甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑。其殺菌譜廣，對由子囊菌、擔子菌、半知菌以及卵菌引起的病害均有效。但與其他甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑品種一樣，吡唑醚菌酯作用位點單一，屬于高抗性風險品種[1]。噻呋酰胺（thifluzamide）為琥珀酸脫氫酶抑制劑（SDHI）。其具有內(nèi)吸性和傳導性，對絲核菌屬、柄銹菌屬、黑粉菌屬、腥黑粉菌屬等引起的病害有效，對紋枯病、立枯病有特效[2]。吡唑醚菌酯和噻呋酰胺二者復配，擴大了殺菌譜，能有效防治炭疽病、紅點病、黑星病、銹病、白絹病等眾多病害。目前尚未見吡唑醚菌酯、噻呋酰胺復配懸浮劑的高效液相色譜分析方法報道[3-5]。

本文采用高效液相色譜，對20%噻呋·吡唑酯懸浮劑中有效成分進行定性和定量分析。方法簡便、快速，靈敏度高，分離效果好，可以用于企業(yè)生產(chǎn)過程質(zhì)量控制和質(zhì)檢機構(gòu)質(zhì)量檢測。

1 試驗部分

1.1 儀器與試劑

Agilent 1220 Infinity液相色譜儀（具紫外可變波長檢測器）、Agilent1220工作站，美國安捷倫公司；TU-1901紫外分光光度儀。

甲醇（色譜純）、乙腈（色譜純）、新蒸2次蒸餾水；吡唑醚菌酯標樣（≥98%）、噻呋酰胺標樣（≥98%），北京勤誠亦信科技開發(fā)有限公司提供；20%噻呋·吡唑酯懸浮劑（10%噻呋酰胺＋10%吡唑醚菌酯），中農(nóng)立華生物科技股份有限公司制。

1.2 色譜條件

ODS-Cl8色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；檢測波長：235 nm；流動相：甲醇＋水（體積比70∶30）；流速：1.0 mL/min；進樣體積：5.0 μL；柱溫：30℃。在該色譜操作條件下，噻呋酰胺的保留時間約為5.2 min，吡唑醚菌酯的保留時間約為6.8 min。

1.3 溶液配制

1.3.1 標樣溶液的配制

稱取0.05 g吡唑醚菌酯標樣、0.05 g噻呋酰胺標樣，均精確至0.000 2 g，置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，搖勻，在超聲波清洗器上超聲30 min后脫氣10 min，使標樣全部溶解，用0.2 μm濾膜過濾，備用。

1.3.2 試樣溶液的配制

稱取0.5 g 20%噻呋·吡唑酯懸浮劑試樣，精確至0.000 2 g，置于100 mL容量瓶中配制試樣溶液。配制方法同標樣溶液的配制。

1.4 測定

在1.2色譜操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標樣溶液，計算各針相對響應(yīng)值。待相鄰2針標樣溶液的響應(yīng)值相對變化小于1.2%時，按一定順序進樣測定。標樣和試樣的高效液相色譜圖分別見圖1、圖2。

圖1 吡唑醚菌酯及噻呋酰胺標樣高效液相色譜圖

圖2 20%噻呋·吡唑酯懸浮劑高效液相色譜圖

試樣中吡唑醚菌酯或噻呋酰胺的質(zhì)量分數(shù)w（%）按下式計算。

式中：A1為標樣溶液中吡唑醚菌酯或噻呋酰胺峰面積平均值；A2為試樣溶液中吡唑醚菌酯或噻呋酰胺峰面積平均值；m1為標樣的質(zhì)量（g）；m2為試樣的質(zhì)量（g）；P為標樣中吡唑醚菌酯或噻呋酰胺的質(zhì)量分數(shù)（%）。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的選擇

采用不同比例的甲醇＋水、乙腈＋水作為流動相對試樣中的有效成分進行分離檢測。甲醇＋水作為流動相，在體積比為70∶30時，有效成分分離效果較好，出峰時間短，且色譜峰峰形尖銳。

對標樣溶液進行紫外掃描，確定檢測波長。當檢測波長為235 nm時，吡唑醚菌酯及噻呋酰胺吸收峰均較強，同時雜質(zhì)響應(yīng)值小，流動相無吸收。

2.2 分析方法的線性相關(guān)性

分別稱取不同質(zhì)量的吡唑醚菌酯、噻呋酰胺標樣于5個100 mL容量瓶中，配制不同質(zhì)量濃度的標樣溶液，按1.2色譜操作條件進行測定，結(jié)果見表1。以吡唑醚菌酯或噻呋酰胺的進樣質(zhì)量為橫坐標，相應(yīng)峰面積為縱坐標作圖，得吡唑醚菌酯和噻呋酰胺的線性相關(guān)曲線。吡唑醚菌酯線性方程為y=1 573.6 x-26.838，相關(guān)系數(shù)為0.999 9；噻呋酰胺線性方程為y=2 590.1 x-38.200，相關(guān)系數(shù)為1.000 0。該方法在測定范圍內(nèi)線性相關(guān)性良好。

表1 線性關(guān)系試驗結(jié)果

2.3 方法的精密度

在1.2色譜操作條件下，對20%噻呋·吡唑酯懸浮劑同一試樣平行測定5次，計算吡唑醚菌酯及噻呋酰胺的標準偏差和變異系數(shù)，結(jié)果見表2。吡唑醚菌酯變異系數(shù)為0.45%，噻呋酰胺變異系數(shù)為0.30%。方法精密度較高。

表2 20%噻呋·吡唑酯懸浮劑精密度測定結(jié)果

2.4 方法的準確度

在已知含量的20%噻呋·吡唑酯懸浮劑中分別加入一定量的吡唑醚菌酯和噻呋酰胺標樣，在上述操作條件下測定，并計算回收率，結(jié)果見表3。兩者平均回收率均為99.7%。方法具有較好的準確度。

表3 20%噻呋·吡唑酯懸浮劑回收率測定結(jié)果

3 結(jié)論

本文提出的測定20%噻呋·吡唑酯懸浮劑中有效成分質(zhì)量分數(shù)的高效液相色譜分析方法具有較高的準確度和精密度，且線性關(guān)系良好，適合用于產(chǎn)品質(zhì)量分析。

[1]楊麗娟,柏亞羅.甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑——吡唑醚菌酯[J].現(xiàn)代農(nóng)藥,2012,11(4):46-50;56.

[2]劉長令.世界農(nóng)藥大全:殺菌劑卷 [M].北京:化學工業(yè)出版社,2006:90-92.

[3]陳雅潔,王勇,謝健楊,等.25%呋蟲胺·吡唑醚菌酯懸浮種衣劑的HPLC分析[J].農(nóng)藥,2017,56(2):119-121.

[4]王芳,成妙金,李歐燕.45%唑醚·氟啶胺懸浮劑的高效液相色譜分析[J].現(xiàn)代農(nóng)藥,2015,14(2):37-39.

[5]郭利豐,丁佩,徐永.噻呋酰胺原藥的高效液相色譜分析[J].現(xiàn)代農(nóng)藥,2014,13(4):28-29.

（責任編輯：柏亞羅）

Analysis of Thifluzamide＋Pyraclostrobin 20%SC by HPLC

LI Yan-fei1,FAN Dong-sheng2,HUANG Hua-shu2,ZHANG Xiao-jun1*
(1.Sino-Agri Leading Biosciences Co.,Ltd.,Beijing 100052,China;2.China Crop Protection Industry Association,Beijing 100723,China)

TQ 450.7

A

10.3969/j.issn.1671-5284.2017.05.009

2017-06-22

李彥飛（1985—），男，呼和浩特市人，工程師，主要從事農(nóng)藥劑型研發(fā)與分析工作。E-mail：liyanfei@sino-agri-sal.com

張小軍（1977—），男，山西省交口縣人，博士，高級工程師，主要從事農(nóng)藥劑型研發(fā)及使用技術(shù)研究。E-mail：zhangxj369@sina.com