何彥春，魏玉明，哈 利，韓慶彥，李旭蓉，李 珊，王東輝，趙福堂，胡永彪，韋志翔，李 輝，李學(xué)虎，康 磊

（1. 張掖市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，甘肅張掖 734000；2. 甘肅省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，甘肅蘭州 730046；3. 甘州區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，甘肅省張掖 734000）

布魯氏菌病活疫苗（M5-90株）免疫綿羊試驗(yàn)

何彥春1，魏玉明1，哈 利2，韓慶彥2，李旭蓉1，李 珊1，王東輝3，趙福堂3，胡永彪3，韋志翔3，李 輝3，李學(xué)虎3，康 磊3

（1. 張掖市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，甘肅張掖 734000；2. 甘肅省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，甘肅蘭州 730046；3. 甘州區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，甘肅省張掖 734000）

為掌握布魯氏菌病活疫苗（M5-90株）免疫后的綿羊抗體水平、消長(zhǎng)情況和不良反應(yīng)發(fā)生情況，選擇育肥羊和懷孕母羊各100只，分別用皮下注射免疫和點(diǎn)眼免疫法，開(kāi)展了3個(gè)月的跟蹤觀察和定期檢測(cè)。結(jié)果表明：布魯氏菌病活疫苗（M5-90株）對(duì)育肥羊注射免疫后15 d 的平板凝集抗體轉(zhuǎn)陽(yáng)率達(dá)100.0%，90 d降至22.7%；點(diǎn)眼免疫后15 d的平板凝集抗體轉(zhuǎn)陽(yáng)率達(dá)85.4%，90 d日降至0；個(gè)別3月齡以下育肥羊?qū)ψ⑸涿庖吆忘c(diǎn)眼免疫均會(huì)發(fā)生一定程度不良反應(yīng)，甚至死亡。活疫苗（M5-90株）對(duì)懷孕母羊皮下注射免疫后15 d的平板凝集抗體轉(zhuǎn)陽(yáng)率達(dá)100%，90 d降至14%；點(diǎn)眼免疫后15 d的平板凝集抗體轉(zhuǎn)陽(yáng)率達(dá)95.9%，90 d降至6.4%；注射免疫和點(diǎn)眼免疫均能造成一定比例的母羊流產(chǎn)和其他不良反應(yīng)。因此，布魯氏菌病活疫苗（M5-90株）不宜用于3月齡以下羔羊和懷孕母羊的免疫。

布魯氏菌病活疫苗（M5-90株）；免疫；綿羊；試驗(yàn)

Abstract：In order to investigate the antibody level and changes in sheep immunized with live Brucellosis vaccine（M5-90 strain），and inspect the adverse reactions after immunization，100 fattening sheep and another 100 pregnant ewes were selected and immunized by subcutaneous injection and eye dropping，and a 3-month tracing observation and regular detection were carried out on the sheep. As for fattening sheep，it's indicated that the positive rate of anti-Brucella antibody detected by plate agglutination test could reach to 100.0% at the 15th day post inculation（dpi）and reduce to 22.7% at 90 dpi by subcutaneous injection，the whilst positive positive rate of anti-Brucella antibody could reach to 85.4% at 15 dpi and drop to 0.0% at 90 dpi by eye dropping vaccination strategies. Some fattening sheep less than 3-mouth old appeared adverse reactions after both subcutaneous injection and eye dropping of Brucellosis vaccine（M5-90 strain）. As for pregnant sheep，the positive rate of anti-Brucella antibody could reach to 100.0% at 15 day dpi and reduce to 14.0% at 90 dpi. The positive rate of anti-Brucella antibody by eye dropping could reach to 95.9% at 15 day dpi and reduce to 6.4% at 90 dpi. A definite proportion of pregnant ewes aborted or showed adverse reaction. In conclusion，live Brucellosis vaccine（M5-90 strain）should not be applied to sheep less than 3-month old and ewe in any pregnant stage.

Key words：live Brucellosis vaccine（M5-90 strain）；immunization；sheep；test

近年來(lái)，布魯氏菌?。ㄒ韵潞?jiǎn)稱布?。┮咔?在全國(guó)多地出現(xiàn)反彈，成為危害公共衛(wèi)生安全較為嚴(yán)重的人獸共患病。被劃為布病流行一類區(qū)的甘肅省在持續(xù)進(jìn)行了幾年的布病檢測(cè)、凈化后，由于畜群檢測(cè)面和檢測(cè)量不斷增大，檢測(cè)任務(wù)量和資金供需矛盾加劇，凈化工作難以為繼。為盡快遏制羊布病持續(xù)反彈的勢(shì)頭，保障人民群眾身體健康和養(yǎng)羊業(yè)持續(xù)發(fā)展，根據(jù)《國(guó)家布魯氏菌病防治計(jì)劃（2016—2020年）》要求，甘肅省防制重大動(dòng)物疫病指揮部及時(shí)制定下發(fā)了《關(guān)于推進(jìn)羊布病區(qū)域強(qiáng)制免疫工作的通知》，要求在免疫試點(diǎn)的基礎(chǔ)上，在全省布病流行一類區(qū)和區(qū)域內(nèi)聯(lián)片的二類區(qū)實(shí)施布病強(qiáng)制免疫。目前，對(duì)羊免疫常用的布病疫苗有S2、M5等，其均為弱毒活疫苗，各有優(yōu)缺點(diǎn)。S2疫苗安全性較好，不會(huì)造成懷孕母羊流產(chǎn)，但免疫原性較弱；M5疫苗免疫原性好，適用于皮下、肌注和口服等多種免疫途徑，但容易導(dǎo)致懷孕母羊流產(chǎn)。M5-90株疫苗是將M5株在雞成纖維細(xì)胞傳代90次后研發(fā)的減毒活疫苗。為驗(yàn)證布病活疫苗（M5-90株）對(duì)綿羊的免疫效果，開(kāi)展了本試驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 疫苗和免疫方法

布病活疫苗（M5-90株），每頭份含活菌數(shù)至少為10×109CFU，由某公司生產(chǎn)供應(yīng)，批號(hào)20160724，有效期1年。按照疫苗使用說(shuō)明書(shū)，將疫苗用稀釋液稀釋后，皮下注射組在頸部皮下注射1頭份；點(diǎn)眼組在一側(cè)眼結(jié)膜內(nèi)滴入1頭份。

1.2 試驗(yàn)綿羊分組及免疫方法

1.2.1育肥綿羊分組及免疫。選擇不同日齡育肥綿羊100只，隨機(jī)分為兩組，每組50只。其中，一組頸部皮下注射免疫，另一組點(diǎn)眼免疫。各組羊群均用耳標(biāo)編號(hào)。

1.2.2懷孕綿羊分組及免疫。選擇不同懷孕日齡綿羊100只，隨機(jī)分為兩組，每組50只。其中，一組頸部皮下注射免疫，另一組點(diǎn)眼免疫。各組羊群均用耳標(biāo)編號(hào)。

1.3 試驗(yàn)羊群飼養(yǎng)管理及觀察

試驗(yàn)羊白天放牧，晚上趕回圈舍并適當(dāng)補(bǔ)飼。免疫后，觀察各試驗(yàn)組羊群反應(yīng)，及時(shí)記錄死亡、流產(chǎn)和其他不良反應(yīng)情況，對(duì)發(fā)生不良反應(yīng)的羊只及時(shí)救治。

1.4 樣品采集方法

對(duì)各試驗(yàn)組羊群分別在免疫后1 d、15 d、30 d、60 d、90 d全群采血，將血清號(hào)與耳標(biāo)號(hào)對(duì)應(yīng)，無(wú)菌分離血清備檢。

1.5 檢測(cè)試劑和方法

1.5.1檢測(cè)試劑。布魯氏菌虎紅平板凝集試驗(yàn)抗原、陽(yáng)性血清、陰性血清，由青島易邦生物工程有限公司生產(chǎn)，批號(hào)20160017。

1.5.2檢測(cè)方法。采用虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBPT），按照《動(dòng)物布魯氏菌病診斷技術(shù)》（GB/T 18646—2002）的要求進(jìn)行。在玻片上加0.03 mL被檢血清，然后加入虎紅平板抗原0.03 mL，搖勻或用牙簽混勻，在4 min內(nèi)判定結(jié)果。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 各試驗(yàn)組死亡、流產(chǎn)和其他不良反應(yīng)發(fā)生情況

育肥羊共計(jì)死亡18只，平均死亡率為18%。懷孕母羊死亡3只，平均死亡率為6%；流產(chǎn)14只，平均流產(chǎn)率為14%（表1）。羊死前主要表現(xiàn)發(fā)燒、呼吸困難、食欲廢絕、不反芻、拉稀等癥狀。

表1 各試驗(yàn)組死亡和流產(chǎn)情況統(tǒng)計(jì)

2.2 虎紅平板抗體檢測(cè)結(jié)果

育肥羊注射組在免疫后15 d 100%出現(xiàn)抗體陽(yáng)性，60 d出現(xiàn)下降；育肥羊點(diǎn)眼組在免疫后30 d抗體陽(yáng)性率達(dá)到最高，90 d降至0。懷孕母羊注射組在免疫后15 d 100%出現(xiàn)抗體陽(yáng)性并保持15 d，60 d下降到68%；懷孕母羊點(diǎn)眼組在免疫后15 d抗體陽(yáng)性率達(dá)到95.9%，90 d下降到6.4%，試驗(yàn)期內(nèi)發(fā)生流產(chǎn)4只，均發(fā)生在免疫30 d以后（表2）。

3 討論與小結(jié)

用布病活疫苗（M5-90株）皮下注射育肥羊，15 d 后的平板凝集抗體轉(zhuǎn)陽(yáng)率達(dá)100%，而點(diǎn)眼免疫育肥羊的抗體上升較慢，在免疫后30 d才達(dá)到93.60%，但注射免疫組的死亡率較高。

表2 各試驗(yàn)組布病平板凝集抗體檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)（單位：只或%）

用活疫苗（M5-90株）皮下注射和點(diǎn)眼免疫的懷孕母羊，均在免疫后15 d達(dá)到抗體高峰，但注射免疫組在90 d試驗(yàn)期內(nèi)共發(fā)生流產(chǎn)10只，流產(chǎn)率達(dá)20%，高于點(diǎn)眼免疫組。這與王東輝[1]報(bào)道的用布病M5疫苗注射懷孕絨山羊的流產(chǎn)率（22.39%）接近，但遠(yuǎn)超過(guò)潘永紅等[2]報(bào)道的用布病M5疫苗注射懷孕羊的流產(chǎn)率（4.18%）。

試驗(yàn)結(jié)果表明：用布病活疫苗（M5-90株）對(duì)育肥羊進(jìn)行注射和點(diǎn)眼免疫均可達(dá)到預(yù)期免疫效果，其中注射免疫的抗體轉(zhuǎn)陽(yáng)率稍高于點(diǎn)眼免疫。育肥羊?qū)ψ⑸涿庖吆忘c(diǎn)眼免疫均會(huì)發(fā)生一定程度的不良反應(yīng)，甚至死亡，不建議對(duì)3月齡以下的羔羊用布病活疫苗（M5-90株）免疫。用活疫苗（M5-90株）對(duì)懷孕母羊皮下注射免疫和點(diǎn)眼免疫均能產(chǎn)生良好免疫效果，但均能造成一定比例的母羊流產(chǎn)和其他不良反應(yīng)，其中注射免疫造成的母羊流產(chǎn)情況明顯高于點(diǎn)眼免疫，不建議用布病活疫苗（M5-90株）對(duì)懷孕的母羊進(jìn)行免疫。

[1] 王東輝. 甘州區(qū)羊布病免疫試點(diǎn)工作現(xiàn)狀分析[J]. 甘肅畜牧獸醫(yī)，2016，32（17）：32-34.

[2] 潘永紅，李勇生，王子堅(jiān)，等. 羊同時(shí)注射布病M5菌苗與口蹄疫疫苗副反應(yīng)觀察[J]. 中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2017，36（1）：64-65.

（責(zé)任編輯：朱迪國(guó)）

Immunity Test of Live Brucellosis Vaccine（M5-90 strain）in Sheep

He Yanchun1，Wei Yuming1，Ha Li2，Han Qingyan2，Li Xurong1，Li Shan1，Wang Donghui3，Zhao Futang3，Hu Yongbiao3，Wei Zhixiang3，Li Hui3，Li Xuehu3，Kang Lei3
（1. Zhangye Animal Disease Prevention and Control Center，Zhangye，Gansu 734000；2. Animal Disease Prevention and Control Center of Gansu Province，Lanzhou，Gansu 730046；3. Ganzhou Animal Disease Prevention and Control Center，Zhangye，Gansu 734000）

S852.65

A

1005-944X（2017）10-0072-03

10.3969/j.issn.1005-944X.2017.10.020

哈 利