郭海燕+程國虎+李擁軍

摘要：長江三角洲白山羊是國內(nèi)外唯一以生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)筆料毛為特征的肉、皮、毛兼用型山羊品種，其所生產(chǎn)的優(yōu)質(zhì)筆料毛是制作高檔毛筆的獨特原料，由于其獨特的產(chǎn)毛性能，又有筆料毛山羊之稱。利用冷凍切片技術(shù)來比較生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)筆料毛型個體與非優(yōu)質(zhì)筆料毛型個體頸脊部及背部皮膚毛囊的結(jié)構(gòu)，旨在尋找2種性狀毛囊結(jié)構(gòu)的區(qū)別。結(jié)果表明，優(yōu)質(zhì)筆料毛型個體與非優(yōu)質(zhì)筆料毛型個體頸脊部及背部皮膚毛囊結(jié)構(gòu)無差異，但2種筆料毛型個體頸脊部初級毛囊密度顯著低于優(yōu)質(zhì)型個體背部初級毛囊密度。

關(guān)鍵詞：長江三角洲；白山羊；冷凍切片技術(shù)；筆料毛；毛囊結(jié)構(gòu)；毛囊密度

中圖分類號： S827.1文獻標志碼： A

文章編號：1002-1302（2017）14-0140-03

長江三角洲白山羊（別稱海門山羊）是我國唯一以生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)筆料毛為特征的肉、皮、毛兼用的山羊品種，其所產(chǎn)的筆料毛具有毛色潔白、挺直有峰、富有彈性等特點，是制湖筆的優(yōu)良原料。在生產(chǎn)加工中通常把筆料毛分為3類23個品種。其中，一類毛為低檔毛，主要有上爪峰、粗爪峰、中短峰、提短峰、揀南峰等；二類毛為中檔毛，主要有腳爪峰、細長峰、黃尖峰、白黃尖等；三類毛為高檔毛（即優(yōu)質(zhì)筆料毛），主要有細光峰、粗光峰、透爪峰、長蓋峰等，其中以三類毛里的細光峰最為名貴[1]。長江三角洲白山羊所生產(chǎn)的優(yōu)質(zhì)筆料毛是三類毛，其與一類毛、二類毛的主要區(qū)別是髓質(zhì)的分布，一類毛、二類毛髓質(zhì)分布于整個毛干，而三類毛毛干上段透明或呈點狀髓，中段髓質(zhì)少，下段充滿髓質(zhì)[2]。

所有哺乳動物的毛發(fā)都是由毛囊產(chǎn)生的，因此毛囊在毛纖維的生長發(fā)育中起決定性作用。毛纖維的生長發(fā)育依賴毛球中毛母質(zhì)細胞的增殖與分化，而毛母質(zhì)細胞的增殖與分化受控于毛乳頭[3]。毛干位于毛囊的中央，暴露在皮膚外的為毛發(fā)，在皮膚內(nèi)的為毛根。毛根由外向內(nèi)又分為真皮鞘（dermal sheath）、外根鞘（ORS）、內(nèi)根鞘（IRS）。內(nèi)根鞘決定毛干的性狀，它在外根鞘內(nèi)部向上增殖移動，支撐生長的纖維，到了皮脂腺層，內(nèi)根鞘細胞退化成碎片，最后消失，釋放出毛纖維[4]。筆料毛的生產(chǎn)具有季節(jié)性，這可能與毛囊的生長周期有關(guān)[5]，毛囊生長周期包括生長期（anagen）、退行期（catagen）和休止期（telogen）[6]，細胞因子在毛囊生長周期的調(diào)控中起重要作用。近年來，有人證明此調(diào)節(jié)主要來自毛囊干細胞，干細胞有一定的生活周期，隨毛囊進入退行期后，其分裂終止[7]。在針對濟寧青山羊、遼寧絨山羊、新疆絨山羊、內(nèi)蒙古絨山羊等毛纖維性狀研究過程中，研究者利用切片技術(shù)對各種山羊皮膚毛囊進行觀察研究[8-12]。而在對長江三角洲白山羊優(yōu)質(zhì)筆料毛性狀的研究中，目前尚未有研究者對其優(yōu)質(zhì)筆料毛和非優(yōu)質(zhì)筆料毛著生部位皮膚毛囊結(jié)構(gòu)進行觀察。

本試驗采用冷凍切片技術(shù)對優(yōu)質(zhì)筆料毛和非優(yōu)質(zhì)筆料毛著生部位皮膚毛囊進行觀察研究，探究長江三角洲白山羊優(yōu)質(zhì)筆料毛著生部位的皮膚毛囊與其他部位皮膚毛囊是否存在差異，為研究長江三角洲白山羊優(yōu)質(zhì)筆料毛性狀的形成機理提供參考。

1材料與方法

1.1試驗材料

1.1.1試驗樣品的準備

本試驗所用長江三角洲白山羊，購自江蘇省海門市國營海門山羊種羊場。隨機選擇6～8月齡的優(yōu)質(zhì)與非優(yōu)質(zhì)筆料毛型公羔各5只，刮毛后局部麻醉處理，在優(yōu)質(zhì)筆料毛型公羔的頸脊部、背部及非優(yōu)質(zhì)筆料毛型公羔的頸脊部分別割取2 cm2左右的皮膚樣品，共15塊皮膚樣品，放于4%甲醛中。24 h后換新的甲醛，4 ℃保存。

1.1.2儀器與設(shè)備

冰凍切片機[Leica CM1950，購自徠卡顯微系統(tǒng)（上海）貿(mào)易有限公司]、萬能視頻成像裝置（LY-WN-HP CCD，購自成都勵揚精密機電有限公司）、倒置顯微鏡[Leica DMIL-RF1，購自徠卡顯微系統(tǒng)（上海）貿(mào)易有限公司]。

1.1.3主要試劑和耗材

甲醛、液氮、無水乙醇、蘇木素（Beyotime）、鹽酸、伊紅、二甲苯、中性樹脂和OCT包埋劑。手術(shù)刀、鑷子、載玻片、蓋玻片、樣品托。

1.2試驗方法

1.2.1冷凍切片的制作

首先修整皮膚塊：如需做橫切，根據(jù)毛囊的生長方向，用手術(shù)刀將皮膚塊修整成長方體狀；如需做縱切，把皮膚塊毛囊生長面修整出來。然后制作冷凍切片及對切片進行蘇木精-伊紅染色（簡稱HE染色），具體步驟參見肖彥增的《制作優(yōu)良冷凍切片的方法》[13]。

1.2.2切片的觀察和拍照

把染色后的樣品放在顯微鏡下進行觀察，挑選合適的視野，使用ScopePhoto（×64）軟件在4倍物鏡下拍照，每組皮膚樣品選取20個視野。

1.2.3初級毛囊密度的計算

分別對3種類型橫切切片20個視野中初級毛囊進行計數(shù)，根據(jù)標準尺計算視野實際面積，進而求出3種類型各個視野中初級毛囊的密度。利用Excel計算各組數(shù)據(jù)的平均數(shù)、標準差和差異性。

2結(jié)果與分析

2.1皮膚毛囊縱切切片的觀察

通過觀察3種類型皮膚毛囊的縱切面，發(fā)現(xiàn)優(yōu)質(zhì)筆料毛型個體頸脊部、背部與非優(yōu)質(zhì)筆料毛型個體頸脊部皮膚毛囊結(jié)構(gòu)無差異（圖1）。

2.2皮膚毛囊橫切切片的觀察

觀察3種類型皮膚的橫切面可知，3種類型的毛囊群基本相似（圖2）。

2.3初級毛囊密度計算

根據(jù)標準尺計算出視野實際面積，為6.4 mm2，視野中3種類型的初級毛囊個數(shù)除以實際面積得到初級毛囊密度，3種類型的初級毛囊密度以及差異性如表1所示。

3討論

縱切切片圖結(jié)果顯示，優(yōu)質(zhì)筆料毛型個體頸脊部、背部與非優(yōu)質(zhì)筆料毛型個體頸脊部皮膚毛囊結(jié)構(gòu)無差異。3種類型毛纖維的毛根部均有髓質(zhì)層，而且髓質(zhì)層勻均分布，這與黃永宏等所描述的長江三角洲白山羊三大類毛纖維的組織學(xué)結(jié)構(gòu)[2]相吻合。

橫切切片圖結(jié)果顯示，長江三角洲白山羊的毛囊是成群分布的，毛囊群分布勻均，毛囊群界限明顯，每個毛囊群由 2～3個初級毛囊和10～15個次級毛囊組成。一些研究者研究發(fā)現(xiàn)，多數(shù)山羊毛囊的分布以三毛囊群（每個毛囊群由3個[CM（25]初級毛囊和若干次級毛囊構(gòu)成）為主[14-16]。本研究結(jié)果顯示，長江三角洲白山羊毛囊的分布也以三毛囊群為主。比較3種類型皮膚的初級毛囊密度，優(yōu)質(zhì)與非優(yōu)質(zhì)筆料毛型個體頸脊部初級毛囊密度差異不顯著（P>0.05），2種筆料毛型個體頸脊部與背部的初級毛囊密度差異顯著（P<0.05）（表1），其原因可能是在山羊不同皮膚部位，初級毛囊密度不相同，此結(jié)果與優(yōu)質(zhì)筆料毛性狀關(guān)聯(lián)性不大。

優(yōu)質(zhì)筆料毛與非優(yōu)質(zhì)筆料毛相比，最重要的區(qū)別是毛干上部的髓質(zhì)層呈點狀分布或無髓質(zhì)層。筆者認為，若想要進一步通過對比毛囊來探究優(yōu)質(zhì)筆料毛性狀的成因，應(yīng)利用電鏡技術(shù)對優(yōu)質(zhì)筆料毛型與非優(yōu)質(zhì)筆料毛型個體皮膚毛囊進行超微結(jié)構(gòu)的觀察，這樣有可能獲得毛囊結(jié)構(gòu)差異性信息，從而對優(yōu)質(zhì)筆料毛性狀形成的機理加以佐證。

4結(jié)論

優(yōu)質(zhì)筆料毛型個體與非優(yōu)質(zhì)筆料毛型個體頸脊部及背部皮膚毛囊結(jié)構(gòu)無差異，但2種筆料毛型個體頸脊部初級毛囊密度均顯著低于優(yōu)質(zhì)型個體背部初級毛囊的密度。

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