雍道敬，祝帥，朱鳳蒙

（青島中達(dá)農(nóng)業(yè)科技有限公司，山東青島266316）

海洋菌株ZDC-03對番茄根結(jié)線蟲殺線活性及防效的初步研究

雍道敬，祝帥，朱鳳蒙

（青島中達(dá)農(nóng)業(yè)科技有限公司，山東青島266316）

本研究通過液體浸漬法和盆栽試驗(yàn)，分別測定了海洋菌株ZDC-03發(fā)酵液對番茄根結(jié)線蟲的室內(nèi)殺線活性和盆栽防治效果。室內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果表明，菌株ZDC-03發(fā)酵液對番茄根結(jié)線蟲二齡幼蟲具有較高的殺線活性，3d和5d的校正死亡率分別為81.4%和82.1%。盆栽試驗(yàn)結(jié)果顯示，菌株ZDC-03發(fā)酵液對番茄根結(jié)線蟲有較好的防治效果，且在試驗(yàn)期間防效隨著番茄幼苗移栽時間的延長而升高。番茄幼苗移栽45d后，施用菌株ZDC-03發(fā)酵液的防效為66.58%～72.78%，而1.8%阿維菌素乳油處理的防效為67.79%。

海洋菌株ZDC-03；番茄根結(jié)線蟲；殺線活性；盆栽試驗(yàn)

根結(jié)線蟲是危害番茄的主要病害之一，隨著保護(hù)地日光溫室數(shù)量的增加，加之復(fù)種及重茬現(xiàn)象嚴(yán)重，導(dǎo)致根結(jié)線蟲危害日趨嚴(yán)重，一般可造成減產(chǎn)10%～20%，嚴(yán)重時可達(dá)30%～40%，甚至絕產(chǎn)，造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失[1-3]。目前，根結(jié)線蟲的防治主要以輪作、化學(xué)防治等方法為主。其中輪作防病因一些特殊經(jīng)濟(jì)作物或特定地區(qū)無法達(dá)到合理輪作的要求，具有較大的局限性[4,5]。化學(xué)防治具有立竿見影的預(yù)期效果，所以被大家廣泛應(yīng)用。但化學(xué)藥劑的長期使用，易造成農(nóng)藥殘留、病蟲抗藥性增強(qiáng)等副作用，正逐步被限制使用。生物防治具有對人畜安全，不污染環(huán)境，不易產(chǎn)生抗藥性等特點(diǎn)越來越被大家重視。

海洋微生物具有遺傳和代謝的特殊性，能夠產(chǎn)生新型生物活性物質(zhì)，具有重要的開發(fā)價(jià)值，因此利用海洋微生物尋找新的生防資源成為了目前研究的熱點(diǎn)。MengQ H等[6]發(fā)現(xiàn)了一株顯著殺松材線蟲的海洋真菌（Acremoni umsp.）。于潔等[7]篩選出一株對松材線蟲具有較強(qiáng)殺線活性的海洋細(xì)菌G-23，用其發(fā)酵上清液處理松材線蟲24h后，線蟲的校正死亡率可達(dá)82%。黃敏等[8]研究認(rèn)為海洋枝頂孢霉BH0531對黃瓜根結(jié)線蟲活性較高，并且可以促進(jìn)細(xì)菌和放線菌生長，降低土壤真菌化程度，改善土壤微生態(tài)環(huán)境。本研究從山東省青島市紅島沿海灘涂的泥土中分離篩選出一株海洋細(xì)菌ZDC-03，經(jīng)鑒定該菌株為甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌（Bacillusmethylotrophicus），筆者對該菌株的室內(nèi)殺線活性及盆栽防效進(jìn)行了研究測定。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

供試菌株：甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌（Bacillusmethylotrophicus）ZDC-03保存于技術(shù)中心生物實(shí)驗(yàn)室。

供試培養(yǎng)基：2216E培養(yǎng)基（酵母提取物1g，蛋白胨5g，瓊脂粉20g，過濾后的海水1000mL，pH調(diào)至7.4～7.5），用于海洋細(xì)菌菌株的活化與保存。LB液體培養(yǎng)基（胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化鈉10g，蒸餾水1000mL，pH調(diào)至7.0～7.2），用于菌株ZDC-03的發(fā)酵培養(yǎng)。

供試線蟲：供試線蟲由番茄保護(hù)地的番茄病根上獲取。取番茄病根，用蒸餾水清洗表面土壤后，用解剖針挑取根結(jié)內(nèi)部卵塊，放入裝有無菌水的培養(yǎng)皿中，28℃靜置孵化24h；收集孵化的根結(jié)線蟲二齡幼蟲（J2），于三角瓶中輕輕混勻，獲得線蟲懸液（約100條/mL），4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

藥劑：1.8%阿維菌素乳油，陜西美邦農(nóng)藥有限公司，市場購買。

供試作物：番茄，品種為“大明星”。

供試土壤：供試沙壤土經(jīng)100℃高溫滅菌30min，經(jīng)檢查無線蟲存活后，向其中加入線蟲懸液，使土壤中根結(jié)線蟲濃度為5條/10g。加入線蟲懸液后的土壤稱為帶線土，每個花盆裝帶線土2kg。

1.2 方法

1.2.1 菌株ZDC-03的液體發(fā)酵

取實(shí)驗(yàn)室保存的菌株ZDC-03，在2216E培養(yǎng)基上進(jìn)行活化培養(yǎng)3d后，接種于LB液體培養(yǎng)基中，于30℃、180r/min振蕩培養(yǎng)72h，得到菌株ZDC-03種子液。按2%的初始接種量接種于98mL新鮮LB液體培養(yǎng)基中，按上述條件繼續(xù)培養(yǎng)72h，即為菌株ZDC-03發(fā)酵液。

1.2.2 菌株ZDC-03室內(nèi)殺番茄根結(jié)線蟲活性測定

以采集的番茄根結(jié)線蟲為供試線蟲，采用24孔板液體浸漬法[9]進(jìn)行殺線蟲活性室內(nèi)測定。在24孔板中分別加入100μL線蟲懸液，100μL發(fā)酵液和300μL無菌水，用移液器輕輕吹打均勻，試驗(yàn)設(shè)置3個重復(fù)，以空白發(fā)酵培養(yǎng)基代替發(fā)酵液作對照。于28℃放置1d、3d、5d后在倒置顯微鏡下觀察，蟲體僵直或卷曲的即視為死亡，計(jì)算線蟲校正死亡率。

1.2.3 菌株ZDC-03對番茄根結(jié)線蟲防效的盆栽試驗(yàn)

將番茄種子用1%NaClO表面消毒10min后，用無菌水沖洗3遍，于培養(yǎng)皿中催芽后播種。待番茄幼苗達(dá)到5葉齡時，將長勢一致的苗子移栽到裝有帶線土的花盆中，每盆3株。試驗(yàn)共有4處理，①加入50mL甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌ZDC-03發(fā)酵液；②加入100mL甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌ZDC-03發(fā)酵液；③加入50mL 1.8%阿維菌素乳油2000倍液；④加入50mL清水作為對照。每個處理3盆番茄幼苗，試驗(yàn)重復(fù)3次。

1.3 調(diào)查及計(jì)算方法

試驗(yàn)第30d和第45d檢查結(jié)果。檢查時將番茄苗與土全部取出，用流水緩緩沖洗根部，直至將泥土全部沖掉，每株番茄幼苗根部分東、西、南、北、中五個方位隨機(jī)采樣，每個方位選取2個完整根，共計(jì)10個。統(tǒng)計(jì)番茄根部根瘤發(fā)生的嚴(yán)重程度，進(jìn)行病情分級，計(jì)算防治效果。

番茄根結(jié)線蟲病情分級標(biāo)準(zhǔn)見表1。

表1 番茄根結(jié)線蟲病情分級標(biāo)準(zhǔn)

按下列公式計(jì)算病情指數(shù)和防治效果：

1.4 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS17.0進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，用Duncan氏新復(fù)極差法進(jìn)行差異顯著性分析（P＜0.05）。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌株ZDC-03室內(nèi)殺線活性測定

以無菌水作為對照（CK），對菌株ZDC-03發(fā)酵液進(jìn)行了殺線蟲活性的測定，結(jié)果見表2。菌株ZDC-03發(fā)酵液對番茄根結(jié)線蟲二齡幼蟲的殺線活性隨著時間的增加而升高，3d和5d的校正死亡率分別為81.4%和82.1%，兩者之間不存在顯著性差異，但均顯著高于1d的校正死亡率。

表2 菌株ZDC-03對番茄根結(jié)線蟲二齡幼蟲的殺線活性

2.2 菌株ZDC-03對番茄根結(jié)線蟲防效的盆栽試驗(yàn)

菌株ZDC-03發(fā)酵液對番茄根結(jié)線蟲有一定的防治效果，見表3。番茄幼苗移栽30d后，菌株ZDC-03發(fā)酵液對番茄根結(jié)線蟲的防效為63.53%～69.52%，且施用菌株ZDC-03發(fā)酵液100mL處理的防效與1.8%阿維菌素乳油處理的防效不存在顯著性差異。番茄幼苗移栽45d后，施用菌株ZDC-03發(fā)酵液50mL、100mL的處理防效比30d時均有升高，而1.8%阿維菌素乳油的處理防效下降至67.79%，顯著低于施用菌株ZDC-03發(fā)酵液100mL的處理。

表3 菌株ZDC-03發(fā)酵液對番茄根結(jié)線蟲的盆栽試驗(yàn)

3 討論

海洋來源的菌株ZDC-03是一株以番茄根結(jié)線蟲為靶標(biāo)篩選出的生防菌，具有較高的殺線活性。室內(nèi)活性測定結(jié)果表明，菌株ZDC-03發(fā)酵液對番茄根結(jié)線蟲二齡幼蟲3d和5d后的校正死亡率分別為81.4%和82.1%，并有持續(xù)升高的趨勢，表明該發(fā)酵液的殺線活性具有時間延續(xù)性，且能維持在較高水平。盆栽試驗(yàn)結(jié)果顯示菌株ZDC-03發(fā)酵液對番茄根結(jié)線蟲有一定的防治效果，且防效隨著番茄幼苗移栽時間的延長而升高。番茄幼苗移栽45d后，施用菌株ZDC-03發(fā)酵液的防效為66.58%～72.78%，1.8%阿維菌素乳油的處理與施用ZDC-03發(fā)酵液50mL的處理防效相當(dāng)，且顯著低于施用菌株ZDC-03發(fā)酵液100mL的處理。

[1]彭德良.蔬菜線蟲病害的發(fā)生和防治[J].中國蔬菜,1998,4:57-58.

[2]秦公偉,李文麗,王富.番茄根結(jié)線蟲的危害與防治[J].北方園藝,2006,(2):132-133.

[3]張春奇,李愛芳,查素娥,等.番茄根結(jié)線蟲病的研究概況[J].長江蔬菜,2003,8:41-43.

[4]董煒博,石延茂,遲玉成,等.穿刺巴氏桿菌防治植物根結(jié)線蟲病的研究現(xiàn)狀及其應(yīng)用前景[J].中國生物防治,1999,15(2):89-93.

[5]高淋淋,劉志明.植物根結(jié)線蟲生物防治研究進(jìn)展[J].廣西植保,2015,28(1):32-35.

[6]Meng QingHeng,Shi XiaoXun,Meng FanHuan,et al.Isolation of an Acremonium sp.from a screening of 52 seawater fungal isolates and preliminary characterization of its growth conditions and nematicidal activity[J].Biotechnol Lett,2012,34(10):1847-1850.

[7]于潔,李子,周長景,等.殺線蟲海洋細(xì)菌G-23的鑒定及培養(yǎng)條件研究[J].青島大學(xué)學(xué)報(bào)（工程技術(shù)版），2014,29(2):94-100.

[8]黃敏,劉曉霞,申佩娟,等.海洋枝頂孢霉BH0531對黃瓜根結(jié)線蟲防治的微生態(tài)效應(yīng)[J].China Brewing,2016,35(3):52-56.

[9]閆磊,肖婷,牛洪濤,等.15種植物源化合物對馬鈴薯莖線蟲的活性比較[J].植物保護(hù),2008,34(1):85-89.

Preliminary Study on the Nematicidal Activity and Control Efficiency of Marine Strain ZDC-03 on Tomato Root-knot Nematodes

YONG Dao-jing,ZHU Shuai,ZHU Feng-meng
(Qingdao Zhongda Agritech Co.,Ltd.,Qingdao 266316,China)

In this study,the nematicidal activity and control efficiency of fermented liquid of marine strain ZDC-03 on tomato root-knot nematodes were respectively determined by immersion test and pot experiment.The results showed that fermented liquid of marine strain ZDC-03 had high nematicidal activity on tomato root-knot nematodes,corrected mortality rates of 3d and 5d were 81.4%and 82.1%.Strain ZDC-03 had better control effect on tomato root-knot nematode,and the control effect increased with the transplanting time of tomato seedlings during the test.After the transplanting of tomato seedlings for 45 days,the control effect of the strain ZDC-03 was 66.58%～72.78%,while the 1.8%avermectin EC treatment was 67.79%.

Marine strain ZDC-03;tomato root-knot nematodes;nematicidal activity;pot experiment;

S436.412

A

1008-1038(2017)09-0016-03

10.19590/j.cnki.1008-1038.2017.09.005

2017-06-20

雍道敬（1987—），女，助理工程師，主要從事農(nóng)業(yè)病蟲害生物防治工作