周珊珊，王偉定，豐美萍，畢遠(yuǎn)新，梁 君，張洪亮

（浙江海洋大學(xué)海洋與漁業(yè)研究所，浙江省海洋水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)部重點(diǎn)漁場(chǎng)漁業(yè)資源科學(xué)觀測(cè)實(shí)驗(yàn)站，浙江省海洋漁業(yè)資源可持續(xù)利用技術(shù)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江舟山 316021）

貝類標(biāo)志技術(shù)的研究進(jìn)展

周珊珊，王偉定，豐美萍，畢遠(yuǎn)新，梁 君，張洪亮

（浙江海洋大學(xué)海洋與漁業(yè)研究所，浙江省海洋水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)部重點(diǎn)漁場(chǎng)漁業(yè)資源科學(xué)觀測(cè)實(shí)驗(yàn)站，浙江省海洋漁業(yè)資源可持續(xù)利用技術(shù)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江舟山 316021）

貝類標(biāo)志技術(shù)已在貝類種群密度、死亡與資源補(bǔ)充、生長(zhǎng)和遺傳等研究中廣泛應(yīng)用，并已成為貝類種群估算、資源評(píng)估及分布調(diào)查的重要手段。目前，貝類標(biāo)志技術(shù)的研究仍相對(duì)較少，且由于貝類多變的形態(tài)結(jié)構(gòu)和復(fù)雜的生存環(huán)境，造成了標(biāo)志技術(shù)的應(yīng)用仍存在問(wèn)題。本文對(duì)近年來(lái)國(guó)內(nèi)外在貝類標(biāo)志技術(shù)方面已取得的進(jìn)展進(jìn)行了綜述，并比較分析了幾種標(biāo)志方法的優(yōu)缺點(diǎn)，以期為我國(guó)貝類標(biāo)志技術(shù)的應(yīng)用與研究提供依據(jù)。

貝類；標(biāo)志方法；物理標(biāo)志；化學(xué)標(biāo)志；生物標(biāo)志；分子標(biāo)志

世界上現(xiàn)存貝類11萬(wàn)多種，其中大部分為海洋貝類，而我國(guó)目前已知的貝類約4 000余種，其中重要的經(jīng)濟(jì)貝類包括皺紋盤鮑Haliotis discus hannai、文蛤Meretrix meretrix、魁蚶Anadara broughtonii、縊蟶Sinonovacula constricta、扇貝Pecten maximus等[1-2]。自上世紀(jì)50年代，英國(guó)的HANCOCK et al開展螺類的標(biāo)志研究后，國(guó)內(nèi)外學(xué)者分別開展了多種貝類標(biāo)志方法的研究[3]。貝類標(biāo)志是指在貝類內(nèi)部或外部通過(guò)懸掛、卡入或染色等方式產(chǎn)生某種標(biāo)識(shí)，從而進(jìn)行標(biāo)志個(gè)體間、標(biāo)志種群與野生種群等進(jìn)行區(qū)分，進(jìn)而開展貝類生長(zhǎng)、行為、死亡、種群動(dòng)態(tài)、遺傳學(xué)等領(lǐng)域的后續(xù)研究。隨著近年來(lái)海洋牧場(chǎng)建設(shè)的興起，標(biāo)志技術(shù)也作為貝類增殖放流效果評(píng)價(jià)的重要手段[4-5]。由于貝類種類多樣，存在貝殼形態(tài)、行為學(xué)、棲息環(huán)境的差異，且不同研究目的需要的標(biāo)志保持時(shí)間不同，造成貝類標(biāo)志技術(shù)的應(yīng)用仍存在較大的問(wèn)題。近年來(lái)，在浙江、山東、遼寧等地開展了文蛤、魁蚶、縊蟶、皺紋盤鮑等貝類的增殖放流,并已取得了明顯的經(jīng)濟(jì)和生態(tài)效益[6-8]，但尚缺乏貝類標(biāo)志技術(shù)的系統(tǒng)研究。

目前，國(guó)內(nèi)外貝類常用的標(biāo)志技術(shù)可以分為四類：（1）物理標(biāo)志法（a.外部標(biāo)志法，b.內(nèi)部標(biāo)志法）；（2）化學(xué)標(biāo)志法；（3）生物標(biāo)志法；（4）分子標(biāo)志法。本文綜述了國(guó)內(nèi)外四種標(biāo)志方法的相關(guān)研究，并對(duì)其優(yōu)缺點(diǎn)進(jìn)行了比較，以期為今后貝類增殖放流標(biāo)志技術(shù)的選擇提供依據(jù)，為貝類標(biāo)志技術(shù)的研究奠定基礎(chǔ)。

1 物理標(biāo)志法

1.1 外部標(biāo)志法

掛牌標(biāo)志方法是應(yīng)用最廣泛的貝類標(biāo)志技術(shù)，主要利用在殼上打孔或粘結(jié)劑黏貼等方式，將印有編碼的塑料標(biāo)志掛于或粘貼于貝殼表面。JEREMY[9]最早利用鉚釘將編碼的塑料圓盤掛于鮑魚Haliotis rubra殼上，1 a后的脫簽率為4%～35%，標(biāo)志易操作，對(duì)鮑魚刺激小，可作為鮑魚的有效標(biāo)志方法。KIM et al[10]比較鉆孔標(biāo)志、金屬線碼（銅絲）標(biāo)志、螺母標(biāo)志（圍鰓腔）、殼面粘貼螺母四種標(biāo)志方法對(duì)鮑魚的標(biāo)志效果，研究表明螺母標(biāo)志法的標(biāo)志率達(dá)96.6%，且對(duì)生長(zhǎng)存活影響較小，是鮑魚的有效標(biāo)志方法。利用貝類部分突出部位進(jìn)行打孔掛牌標(biāo)志，主要應(yīng)用于扇貝、螺類等殼上具有突起的貝類的標(biāo)志活動(dòng)中[11,12]。通過(guò)在扇貝翼狀突起上打孔，將帶有編碼信息的lock塑料標(biāo)簽穿于孔中，6個(gè)月的脫簽率為10%，這種標(biāo)志方法俗稱為“打耳標(biāo)志”[11]；在蛾螺Buccinum undatum螺殼邊緣打孔掛牌，也獲得了100%的標(biāo)志保持率[12]。利用黏貼劑粘貼標(biāo)志牌也是較常用的掛牌方法，其中常用的黏貼劑有氰基丙烯酸酯膠粘劑、環(huán)氧樹脂、牙粘固粉等[13]。LEMARIE et al[13]利用氰基丙烯酸酯膠粘劑進(jìn)行珠蚌科貝類的貼牌標(biāo)志，2年內(nèi)的脫簽率僅為0.46%。ROSS et al[14]比較了刻畫標(biāo)志、微型金屬絲、貼牌標(biāo)志3種標(biāo)志方法標(biāo)志扇貝的標(biāo)志效果，發(fā)現(xiàn)貼牌標(biāo)志效果較好，且6種粘貼劑（標(biāo)準(zhǔn)環(huán)氧樹脂、快速環(huán)氧樹脂、防水環(huán)氧樹脂、牙粘固粉、氰基丙烯酸鹽粘合夜、氰基丙烯酸鹽粘合膠）中，快速環(huán)氧樹脂、氰基丙烯酸鹽粘合夜、氰基丙烯酸鹽粘合膠與貝殼的粘合速度快（1～3 min），其中氰基丙烯酸鹽粘合膠因操作簡(jiǎn)單，對(duì)扇貝生長(zhǎng)存活影響小，被認(rèn)為是扇貝的最佳粘貼劑。VASCONCELOS et al[15]利用Dymo標(biāo)牌標(biāo)志骨螺Hexaplex trunculus，去除表面海水后，使用氰基丙烯酸鹽粘合劑粘貼標(biāo)牌，再在標(biāo)簽表面覆蓋一層環(huán)氧基樹脂。貼牌標(biāo)志應(yīng)注意選擇合適的標(biāo)志牌黏貼部位，殼邊緣有放射肋凹槽的部位與平滑的殼頂部位相比，其標(biāo)簽粘合更牢固[13-14]。國(guó)內(nèi)學(xué)者發(fā)明了粘結(jié)粉和粘結(jié)液相混合的新型粘結(jié)方法、無(wú)毒透明環(huán)氧樹脂膠液直接涂覆于貝殼表面的標(biāo)志方法[16-17]。掛牌標(biāo)志方法具有以下優(yōu)點(diǎn)：（1）無(wú)毒；（2）標(biāo)志易辨別；（3）對(duì)被標(biāo)志個(gè)體的生長(zhǎng)發(fā)育無(wú)顯著影響；（4）攜帶詳細(xì)標(biāo)志信息。缺點(diǎn)主要為：（1）操作繁瑣，需要化學(xué)腐蝕在貝殼表面形成凹陷來(lái)黏貼標(biāo)簽；（2）貝類與底質(zhì)的機(jī)械作用下標(biāo)牌易脫落或標(biāo)志信息易磨損；（3）不適用于小型貝類及幼貝的標(biāo)志；（4）部分掛牌方法僅適用于特定貝類而難以推廣；（5）標(biāo)牌過(guò)于明顯而導(dǎo)致標(biāo)志個(gè)體易被敵害生物捕食。

標(biāo)簽標(biāo)志通常利用具有抗腐蝕耐磨特性的金屬標(biāo)簽，將標(biāo)簽卡入貝殼邊緣，標(biāo)簽?zāi)茈S著殼的生長(zhǎng)逐漸被外套膜分泌的珍珠質(zhì)包裹，從而與貝殼融為一體。MENKE[18]發(fā)明了“一種螺旋狀CLIP標(biāo)簽”的標(biāo)志方法，可應(yīng)用于皺紋盤鮑、扇貝等貝類的標(biāo)志放流。國(guó)內(nèi)已利用不銹鋼簽在山東等地開展了鮑魚的標(biāo)志工作，但尚未見相關(guān)的文獻(xiàn)報(bào)道。周珊珊[19]利用倒刺型不銹鋼標(biāo)簽標(biāo)志魁蚶幼貝，標(biāo)簽保持率為64.25%（160 d），標(biāo)簽對(duì)魁蚶幼貝的生長(zhǎng)存活存在一定的負(fù)面影響。標(biāo)簽標(biāo)志方法具有以下優(yōu)點(diǎn)：（1）無(wú)毒；（2）標(biāo)志易辨別；（3）攜帶詳細(xì)標(biāo)志信息。（4）標(biāo)簽不易腐蝕、磨損。缺點(diǎn)主要為：（1）操作繁瑣，雙殼貝類麻醉開殼后才能進(jìn)行卡簽操作；（2）標(biāo)志初期，標(biāo)簽易脫落；（3）對(duì)小型貝類及幼貝進(jìn)行卡簽操作，易造成貝殼的破損；（4）損傷貝類軟體部，影響被標(biāo)志個(gè)體的生長(zhǎng)發(fā)育。

刻劃標(biāo)志法是指利用電動(dòng)砂輪、電刻筆等工具，刻劃貝殼表面或貝殼邊緣，從而形成缺刻、凹陷等標(biāo)志信息，可以避免標(biāo)志過(guò)于明顯而造成的標(biāo)志個(gè)體被捕食的現(xiàn)象[20-21]。1970年ROPES et al[22]最早開展浪蛤Spisula solidissima的刻畫標(biāo)志，ROSS et al[14]利用刻畫標(biāo)志扇貝，KIM et al[10]開展了鮑魚的鉆孔標(biāo)志。我國(guó)學(xué)者游奎等[4]利用電動(dòng)砂輪對(duì)貝類殼邊緣進(jìn)行缺刻標(biāo)志，付龍龍等[23]利用電刻筆對(duì)三角帆蚌進(jìn)行刻劃標(biāo)志，顧炎斌[5]利用電刻筆對(duì)文蛤進(jìn)行標(biāo)志，刻畫標(biāo)志通常在短期內(nèi)標(biāo)志清晰可見，標(biāo)志保持率為100%。刻劃標(biāo)志具有以下優(yōu)點(diǎn)：（1）操作簡(jiǎn)單，成本低廉；（2）應(yīng)用廣泛，可用于多種貝類的標(biāo)志；（3）無(wú)毒，不影響標(biāo)志生物的生長(zhǎng)存活。缺點(diǎn)主要為：（1）缺乏全面的標(biāo)志信息；（2）易造成貝殼破碎等物理?yè)p傷。（3）破壞貝殼的角質(zhì)層，碳酸鈣層易腐蝕造成標(biāo)志模糊。

激光標(biāo)志是一種新興的刻劃標(biāo)志技術(shù)，利用激光發(fā)射器發(fā)射的高能激光束照射標(biāo)志生物表面，將光能快速轉(zhuǎn)化為熱能，激光照射位置在高溫作用下瞬間熔融或氣化而形成標(biāo)志，已廣泛應(yīng)用于海洋捕撈、水產(chǎn)品加工、水產(chǎn)養(yǎng)殖、魚類激光標(biāo)志等領(lǐng)域[24-25]。2012年，付龍龍等[26-27]首次利用四種強(qiáng)度的激光標(biāo)志了三角帆蚌Hyriopsis cumingii，研究發(fā)現(xiàn)標(biāo)志的位置和大小、激光強(qiáng)度會(huì)影響帆蚌的生長(zhǎng)存活，標(biāo)志大小0.65 cm，激光強(qiáng)度0.30 A，標(biāo)志幼貝85日齡以上為三角帆蚌的最佳標(biāo)志方法。2013年，顧炎斌利用激光雕刻機(jī)對(duì)文蛤進(jìn)行激光標(biāo)志，實(shí)現(xiàn)了計(jì)算機(jī)控制的自動(dòng)化激光標(biāo)志，激光標(biāo)志速度可達(dá)30只/min，標(biāo)志后60 d的標(biāo)志保持率為100%，對(duì)文蛤生長(zhǎng)存活無(wú)顯著影響[5]。目前激光標(biāo)志貝類的研究仍較少，與傳統(tǒng)的刻劃標(biāo)志相比，激光標(biāo)志具有以下優(yōu)點(diǎn)：（1）非接觸性標(biāo)志，不產(chǎn)生機(jī)械損傷；（2）自動(dòng)化程度高，標(biāo)志速度快，成本低廉，可自定義標(biāo)志信息。其缺點(diǎn)是：（1）標(biāo)志操作人員素質(zhì)要求高，需具備計(jì)算機(jī)操作能力；（2）不適于表面不光滑、具放射肋的種類；（3）對(duì)標(biāo)志貝類造成一定程度的熱損傷。

1.2 內(nèi)部標(biāo)志法

新興的內(nèi)部標(biāo)志技術(shù)利用注射器、標(biāo)志槍等標(biāo)志設(shè)備將標(biāo)志物植入貝類體內(nèi)，再利用接收器進(jìn)行標(biāo)志識(shí)別。內(nèi)部標(biāo)志可以有效避免傳統(tǒng)外部標(biāo)志法存在的標(biāo)簽易脫落、磨損等缺點(diǎn)，而逐漸應(yīng)用于貝類的標(biāo)志放流活動(dòng)，其主要包括微編碼線標(biāo)志技術(shù)（CWT）、被動(dòng)整合雷達(dá)標(biāo)志技術(shù)（PIT）等。CWT為攜帶編碼的不銹鋼金屬絲，通過(guò)金屬探測(cè)器進(jìn)行標(biāo)志的識(shí)別，選擇適當(dāng)?shù)臉?biāo)志部位，掌握正確的操作技術(shù)可有效提高標(biāo)志保持率[28-29]。貝類CWT標(biāo)志的報(bào)道最早見于日本河蜆Corbicula japonica，CWT標(biāo)志注入河蜆鉸合部肌肉后對(duì)其生存、軟體重、殼長(zhǎng)、肥滿度無(wú)顯著影響，標(biāo)簽保持率高達(dá)93%[28]。LAYZER et al[29]利用注射器將CWT標(biāo)志注射到黑檀貝Fusconaia ebena鉸合部肌肉中，標(biāo)志2 a后其存活率和標(biāo)志保持率均為100%。鉸合部肌肉是雙殼貝類較常見的CWT標(biāo)志注射位置，而利用黏貼劑粘貼金屬片至螺類殼頂部位具有較好的標(biāo)志效果[30]。CWT具有以下優(yōu)點(diǎn)：（1）金屬絲規(guī)格小，對(duì)貝類損傷較??；（2）標(biāo)簽保持時(shí)間長(zhǎng)；（3）無(wú)需捕撈標(biāo)志個(gè)體，即可得到標(biāo)志信息。缺點(diǎn)為：（1）金屬絲材質(zhì)要求高，忌生銹；（2）植入過(guò)程繁瑣；（3）檢測(cè)距離限制，對(duì)穴居、底棲貝類的探測(cè)效果不佳。（4）檢測(cè)設(shè)備較貴。

PIT利用注射器將芯片植入貝類外套膜、組織中，通過(guò)固定或手持的無(wú)線電探測(cè)裝置激活芯片，激活后的芯片發(fā)射出編碼信息，再利用PIT探測(cè)裝置檢測(cè)水深2 m以內(nèi)的芯片信號(hào)。LAYZER et al[31]將芯片植入北美珍珠蚌Lampsilis cariosa外套膜組織，標(biāo)志保持率為93%，死亡率小于2%，回捕率高達(dá)95%。HALE et al[32]研究了3種芯片植入方式（殼背部粘貼、殼腹部粘貼、足部注射）對(duì)平托鮑魚Haliotis kamtschatkana標(biāo)志效果的影響，發(fā)現(xiàn)不同植入方式對(duì)鮑魚的生長(zhǎng)存活均無(wú)影響，而注射芯片法的標(biāo)志保持率顯著低于粘貼法的標(biāo)志保持率；殼腹部粘貼芯片的標(biāo)志效果較好，主要是由于腹部的PIT逐漸被外套膜分泌的珍珠質(zhì)層包裹，且包裹后不影響標(biāo)志的識(shí)別，獲得了較高的標(biāo)志保持率。PIT標(biāo)志的主要優(yōu)勢(shì)包括：（1）可以有效提高放流個(gè)體的回捕率；（2）標(biāo)簽保持時(shí)間長(zhǎng)；（3）無(wú)需捕撈標(biāo)志個(gè)體，即可得到標(biāo)志信息，可實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)標(biāo)志貝類的活動(dòng)情況。缺點(diǎn)為：（1）芯片、探測(cè)設(shè)備價(jià)格昂貴；（2）芯片植入過(guò)程繁瑣；（3）植入芯片對(duì)貝類造成生理?yè)p傷；（4）芯片規(guī)格較大，僅適用于大個(gè)體貝類，應(yīng)用具有局限性；（5）有檢測(cè)距離限制2～150 cm），對(duì)穴居、底棲貝類的探測(cè)效果不佳。

2 化學(xué)標(biāo)志法

2.1 熒光染料標(biāo)志

化學(xué)標(biāo)志法通常利用染料涂抹或浸泡貝殼，從而在貝殼上形成顏色標(biāo)志，目前主要利用的化學(xué)染料包括油漆涂抹、鐵銹覆蓋、熒光染料等。其中，熒光標(biāo)志法是大規(guī)模標(biāo)志活動(dòng)中應(yīng)用最廣泛的標(biāo)志方法，通常選用無(wú)毒或毒性甚微的熒光染料，通過(guò)浸泡、注射等方式使熒光染料與鈣離子發(fā)生絡(luò)合反應(yīng)，可在貝殼表面形成長(zhǎng)久的顏色標(biāo)志，顏色標(biāo)志在一定波長(zhǎng)光源照射下激發(fā)出熒光[33]。常用的熒光染料包括茜素紅S（alizarin red S）、鈣黃綠素（calein）、茜素絡(luò)合指示劑（alizarin complexone）等，而氧四環(huán)素（oxytetracycline）、四環(huán)素（tetracycline）等抗生素藥物因不利于水產(chǎn)品安全而逐漸被淘汰[34-36]。國(guó)外學(xué)者利用熒光標(biāo)志后標(biāo)志殼與新生組織、新生殼顏色的差異，開展了貝類幼體器官、貝殼的分化生長(zhǎng)過(guò)程的研究[34-35,37]。熒光染料對(duì)貝類不同生長(zhǎng)階段的標(biāo)志效果不同，如中性紅染色標(biāo)志斧蛤D型幼蟲的標(biāo)志效果較好，而斧蛤、布氏蚶稚貝則以茜素紅S標(biāo)志效果最佳[34]。鈣黃綠素是標(biāo)志浪蛤最好的生長(zhǎng)標(biāo)志物，不影響浪蛤的存活生長(zhǎng)，生長(zhǎng)速度為20 d生長(zhǎng)23 mm，SrCl2、茜素紅的標(biāo)志效果則無(wú)法觀察或較不清晰[35]。此外，國(guó)內(nèi)外學(xué)者利用鈣黃綠素成功標(biāo)志了扇貝幼貝[37]、小型貝類滿月蛤Loripes lacteus[38]、貽貝Mytilus trossulus幼蟲[39]、澳大利亞河蚌Westralunio carteri[40]、青口貝Perna canaliculus幼蟲[41]，利用鈣黃綠素和考馬斯亮藍(lán)成功標(biāo)志珠母貝Pinctada mazatlanica[42-43]。

目前國(guó)內(nèi)外將熒光標(biāo)志應(yīng)用于貝類增殖放流的研究較少，可能與貝類增殖放流活動(dòng)興起時(shí)間較晚有關(guān)。相比于生長(zhǎng)速度的相關(guān)研究，應(yīng)用于增殖放流活動(dòng)的熒光標(biāo)志方法應(yīng)具有標(biāo)志色保持時(shí)間更持久的特性，因此相關(guān)研究中熒光染料的濃度、浸泡時(shí)間、標(biāo)志色保持時(shí)間等均有相應(yīng)的增加或提高。LUCAS et al[44]首次將熒光標(biāo)志應(yīng)用于增殖放流工作，利用氧四環(huán)素（500 mg/L）、茜素紅S（10～20 mg/L）、鈣黃綠素（10～50 mg/L）三種熒光染料標(biāo)志碟扇貝Amusium balloti幼蟲（2～15 mm），研究表明氧四環(huán)素可以有效標(biāo)志碟扇貝，且熒光標(biāo)志可保持10個(gè)月；鈣黃綠素標(biāo)志的熒光標(biāo)志幾個(gè)月后衰減消失，使用高濃度的鈣黃綠素標(biāo)志可能增加鈣黃綠素?zé)晒鈽?biāo)志的保持時(shí)間；茜素紅S標(biāo)志造成了扇貝幼蟲的大量死亡，未能有效標(biāo)志扇貝幼蟲。此外，國(guó)內(nèi)外學(xué)者成功利用鈣黃綠素（250 mg/L）標(biāo)志了河蚌，茜素紅S（200、300 mg/L）和鈣黃綠素（200、300 mg/L）成功標(biāo)志了魁蚶幼貝，獲得了較長(zhǎng)的標(biāo)志保持時(shí)間，可以用于后續(xù)增殖放流的標(biāo)志活動(dòng)。

熒光標(biāo)志的標(biāo)志效果，與染料種類、貝類種類、貝類大小等因素決定。鈣黃綠素標(biāo)志鮑魚幼貝[33]、浪蛤[35]、碟扇貝[45]等貝類的標(biāo)志效果優(yōu)于四環(huán)素類染料、茜素紅S等，主要與四環(huán)素類染料、茜素紅S等染料產(chǎn)生的熒光與這些貝類貝殼的自身熒光波長(zhǎng)接近，無(wú)法準(zhǔn)確區(qū)分有關(guān)；鈣黃綠素可以成功標(biāo)志含有黑色角質(zhì)層的貝類，如澳大利亞河蚌、綠唇貝Perna canaliculus等[40-41]，但尚沒(méi)有茜素紅S成功標(biāo)志黑色角質(zhì)層貝類的相關(guān)報(bào)道；鈣黃綠素標(biāo)志對(duì)魁蚶幼貝、鮑魚幼貝、貽貝幼蟲、扇貝幼蟲、青邊貽貝Perna perna等多數(shù)貝類的生長(zhǎng)存活無(wú)顯著影響，茜素紅S標(biāo)志對(duì)魁蚶幼貝、鮑魚幼貝的生長(zhǎng)存活無(wú)顯著影響，而茜素紅S標(biāo)志青邊貽貝則具有較高的死亡率[33,39,44-47]。因此，針對(duì)目標(biāo)貝類進(jìn)行熒光標(biāo)志時(shí)，應(yīng)選擇適宜的染料和貝類規(guī)格，并開展染料毒性試驗(yàn)以獲得好的標(biāo)志效果。熒光標(biāo)志主要具有以下優(yōu)點(diǎn)：（1）具有操作方法簡(jiǎn)單快速，價(jià)格低廉；（2）毒性?。唬?）標(biāo)志保持率高、保留時(shí)間長(zhǎng)，適用于進(jìn)行貝類增殖放流大規(guī)模標(biāo)志。其缺點(diǎn)是：（1）攜帶信息量低，只能標(biāo)志放流群體，無(wú)法區(qū)分放流個(gè)體；（2）其標(biāo)志色影響其食用和經(jīng)濟(jì)價(jià)值；（3）標(biāo)志初期鮮明的標(biāo)志色導(dǎo)致標(biāo)志貝類易被敵害生物捕食。

2.2 其它染料標(biāo)志

油漆、染料、鐵銹等染料涂抹于貝類表面，形成顏色標(biāo)記也是目前應(yīng)用較廣泛的標(biāo)志方法。HANCOCK et al[3]最早利用油漆涂于海螺Buccinum undatum殼面進(jìn)行標(biāo)記；ITO[48]利用貼牌-油漆標(biāo)記、掛牌-油漆標(biāo)記進(jìn)行日本浪蛤Pseudocardium sybillae的標(biāo)志，發(fā)現(xiàn)兩種標(biāo)志方法結(jié)合的標(biāo)志效果優(yōu)于單一標(biāo)志方法，貼牌-油漆標(biāo)記法為浪蛤的最佳標(biāo)志方法；KESLE et al[49]利用krylon染料（白底漆和熒光橙）成功標(biāo)志淡水貝類（Elliptio complanata、Lampsilis radiata）。染料覆蓋標(biāo)志具有以下優(yōu)點(diǎn)：（1）成本低廉，應(yīng)用廣泛，可用于多種貝類的標(biāo)志；（2）對(duì)貝類生長(zhǎng)存活影響?。唬?）標(biāo)志易辨認(rèn)。其缺點(diǎn)是：（1）操作繁瑣，攜帶標(biāo)識(shí)信息少；（2）染料易受海水腐蝕或貝類移動(dòng)而磨損脫落。KOSHIKAWA et al[50]利用鐵銹附著法標(biāo)志雜色蛤Ruditapes philippinarum，標(biāo)志蛤附著的鐵銹厚度約16 μm，可以肉眼識(shí)別標(biāo)志貝，且鐵銹標(biāo)志法對(duì)雜色蛤的生長(zhǎng)存活無(wú)顯著差異，標(biāo)志雜色蛤底播于潮間帶270 d后的標(biāo)志保持率為83.7%，獲得了較好的標(biāo)志效果和較高的回捕率。鐵銹標(biāo)志法具有無(wú)毒、易肉眼辨認(rèn)、操作方便快速等顯著優(yōu)勢(shì)，但國(guó)內(nèi)尚無(wú)鐵銹法應(yīng)用于增殖放流標(biāo)志、貝類生長(zhǎng)的相關(guān)研究報(bào)道，應(yīng)加強(qiáng)鐵銹法在我國(guó)增殖放流標(biāo)志活動(dòng)中的應(yīng)用。

3 生物標(biāo)志和分子標(biāo)志法

生物標(biāo)志利用生物的形態(tài)學(xué)、生態(tài)分布等特征差異來(lái)區(qū)分不同生物群體，其對(duì)標(biāo)志生物的生長(zhǎng)存活無(wú)影響、標(biāo)志成本低或無(wú)成本，具有一定的標(biāo)志優(yōu)勢(shì)，但目前報(bào)道的生物標(biāo)志的方法較少。國(guó)內(nèi)外學(xué)者利用文蛤不同種群殼色花紋的差異進(jìn)行文蛤的生物標(biāo)志，利用餌料造成的貝殼顏色差異標(biāo)志蠑螺屬Turbo spp.、鮑螺屬Haliotis spp.貝類，利用光照造成的貝殼顏色差異標(biāo)志紫貽貝Mytilus edulis[51-54]。生物標(biāo)志方法的優(yōu)點(diǎn)是：（1）標(biāo)志成本低廉，不影響標(biāo)志個(gè)體的生長(zhǎng)發(fā)育；（2）無(wú)毒，不影響標(biāo)志貝類經(jīng)濟(jì)價(jià)值；（3）標(biāo)志色永久保持。缺點(diǎn)是：（1）只能標(biāo)志特定種類的貝類，應(yīng)用局限；（2）缺乏全面的標(biāo)志信息；（3）標(biāo)志所需時(shí)間長(zhǎng)。

分子標(biāo)志技術(shù)伴隨分子生物技術(shù)的產(chǎn)生而迅速發(fā)展，利用生物的DNA水平多態(tài)性特征，可以用于追蹤放流生物、區(qū)分不同放流群體及分析回捕群體與放流群體間親緣關(guān)系等研究，可以準(zhǔn)確評(píng)估增殖放流效果[55-57]。目前應(yīng)用較多的兩種分子標(biāo)志技術(shù)為線粒體DNA標(biāo)志（mtDNA）和微衛(wèi)星標(biāo)志（SSR），主要應(yīng)用于長(zhǎng)牡蠣Crassostrea gigas[58]、海灣扇貝Argopecten irradians[59]、皺紋盤鮑[60]、蝦夷扇貝Patinopecten yessoensis[61]、魁蚶[62]等貝類的標(biāo)志。分子標(biāo)志具有受環(huán)境影響小，穩(wěn)定性高，比形態(tài)標(biāo)志更準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)，但存在需要進(jìn)行微衛(wèi)星、線粒體DNA標(biāo)志位點(diǎn)篩選且檢測(cè)成本高等缺點(diǎn)，這就制約了分子標(biāo)志技術(shù)在增殖放流活動(dòng)中的廣泛應(yīng)用。

4 貝類常用標(biāo)志方法圖示

由于貝類增殖放流成活率高，近年來(lái)貝類的增殖放流均取得了較好的經(jīng)濟(jì)和生態(tài)效益，在浙江省各種海珍品與貝螺類底播增殖中，以厚殼貽貝比重較大，成為新增主流放流品種，其放流數(shù)量在“十一五”期間得到了快速增長(zhǎng)[63]。此外，從東海區(qū)的情況出發(fā)，應(yīng)根據(jù)海域環(huán)境條件選擇適宜的貝類增殖品種，目前浙江沿岸放流較多的品種還包括荔枝螺、縊蟶等沿岸灘涂底播增殖貝類[64]。山東省的貝類增殖品種則較為豐富，主要增殖品種包括文蛤、菲律賓蛤仔Ruditapes philippinarum、青蛤Cyclina sinensis、毛蚶Scapharca subcrenata、牡蠣 Ostrea gigas thunberg、魁蚶、竹蟶 Solen strictus、縊蟶等沿海護(hù)養(yǎng)的灘涂貝類，櫛孔扇貝Chlamys farreri、蝦夷扇貝、皺紋盤鮑、刺參Stichopus japonicus、海膽、紫石房蛤Saxidomus purpuratus等底播增殖的海珍品。然而國(guó)內(nèi)對(duì)貝類標(biāo)志技術(shù)的研究仍然停留在簡(jiǎn)單的物理標(biāo)志技術(shù)，主要應(yīng)用的包括打孔掛牌標(biāo)志、黏貼掛牌標(biāo)志、缺刻標(biāo)志等，通常具有標(biāo)志簡(jiǎn)單、成本低的特點(diǎn)，但又存在標(biāo)志易脫落、攜帶的標(biāo)志信息少等缺陷，而科技含量高的物理標(biāo)志如微編碼線標(biāo)志技術(shù)（CWT）、被動(dòng)整合雷達(dá)標(biāo)志技術(shù)（PIT）、激光標(biāo)志等方法較大程度提高了標(biāo)志的保持效果，并具備了一定的標(biāo)志追蹤功能，但存在費(fèi)用較高等應(yīng)用瓶頸。國(guó)內(nèi)在化學(xué)標(biāo)志、生物標(biāo)志及分子標(biāo)志的應(yīng)用更加欠缺。作為理想的貝類標(biāo)志方法應(yīng)該有如下的特點(diǎn)：（1）標(biāo)志保持時(shí)間長(zhǎng)，不易脫落、褪色；（2）標(biāo)志易識(shí)別；（3）對(duì)標(biāo)志貝類生理行為等損傷小；（4）標(biāo)志過(guò)程易操作；（5）標(biāo)志成本低；（6）標(biāo)志攜帶信息量大；（7）可以在不殺死貝類的情況下跟蹤標(biāo)志信息。目前所采用的貝類標(biāo)志方法大多只能滿足部分研究的要求，迄今為止還未發(fā)現(xiàn)一種可以適用于貝類各方面研究的理想標(biāo)志方法，仍有待于科技工作者進(jìn)一步探索。

圖1 幾種標(biāo)志方法示意圖Fig.1 Shells with different marking method

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A Review of the Marking Methods Used in the Study of Shellfish

ZHOU Shan-shan,WANG Wei-ding,FENG Mei-ping,et al
(Marine and Fishery Institute of Zhejiang Ocean University,Marine Fisheries Research Institute of Zhejiang Province,Scientific Observing and Experimental Station of Fishery Resources for Key Fishing Grounds,MOA,Key Laboratory of Sustainable Utilization of Technology Research for Fishery Resources of Zhejiang Province,Zhoushan 316021,China)

Shellfish marking technology was widely used in shellfish population density,and resource recruitment,growth and genetic researches,and has become a shellfish population estimates,resource assessment,as well as an important means of migration and distribution.Nowadays,the studies in shellfish marking methods was relatively few,and still have difficult in shellfish marking because of the different shell type and complex habitat.This review briefly summarized the progress of research on shellfish marking methods,and the advantages and disadvanlages of using each marking method was discussed.We hope this review will support the application and research of shellfish marking method.

shellfish;marking methods;physical marking;chemical marking;biological marking;molecular marking

S932.6

A

1008－830X(2017)02－0172－08

2017-01-10

農(nóng)業(yè)部公益性行業(yè)（農(nóng)業(yè)）科研專項(xiàng)經(jīng)費(fèi)（201303047）

周珊珊（1988-），女，青海西寧人，博士，研究方向：海洋生態(tài)修復(fù).E-mail:muxihuashan@126.com

王偉定.E-mail:wdwang@sohu.com