賀海燕，張 淼，李 晶，梁沛芬，肖紅燕，王 婧，牛牧文，李 靜，王 平，樸文花,2

·論 著·

TRIM29、SKP2、MLH1在早期胃癌及癌前病變表達(dá)意義的臨床研究

賀海燕1，張 淼1，李 晶1，梁沛芬1，肖紅燕1，王 婧1，牛牧文1，李 靜1，王 平1，樸文花1,2

目的探討胃鏡活檢標(biāo)本中早期胃癌與高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變及胃炎TRIM29、SKP2、MLH1抗體表達(dá)的差異性，尋找早期胃癌與高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變的診斷鑒別方法。方法使用免疫組織化學(xué)方法對(duì)46例胃炎標(biāo)本、44例低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變組和42例高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變胃鏡活檢標(biāo)本進(jìn)行染色觀察，采用統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，比較其表達(dá)的差異性。結(jié)果40例胃炎組中TRIM29無(wú)表達(dá)，SKP2弱表達(dá)，MLH1有3例表達(dá)。44例低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變組中MLH1全部表達(dá)，TRIM29有18例表達(dá)，SKP2全部表達(dá)。42例早期高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變中TRIM29全部表達(dá)，SKP2有28例表達(dá)，MLH1全部表達(dá)。三種抗體在3組間的表達(dá)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且表達(dá)程度與胃癌惡性進(jìn)程有明顯相關(guān)性。結(jié)論TRIM29、SKP2、MLHI三種抗體可以作為胃鏡活檢標(biāo)本中胃炎與上皮內(nèi)瘤變及早期胃癌診斷的可靠標(biāo)記物。

TRIM29；SKP2；MLH1；早期胃癌

隨著現(xiàn)代內(nèi)鏡技術(shù)的進(jìn)步，早期胃癌的病理診斷尤為重要。但早期胃癌的病理診斷卻比較困難，目前病理醫(yī)師僅依靠組織形態(tài)對(duì)胃癌及癌前病變進(jìn)行診斷，個(gè)人主觀性很大，易產(chǎn)生過(guò)診斷和漏診斷情況，給患者及臨床帶來(lái)極大風(fēng)險(xiǎn)。篩選幾種抗體，用客觀指標(biāo)對(duì)可疑病例進(jìn)行分子、蛋白水平檢測(cè)，使病理醫(yī)師對(duì)不同病變的判讀獲得可靠的參考依據(jù)是我們研究的重點(diǎn)。本研究旨在了解TRIM29、SKP2和MLH1三種因子在胃炎、早期胃癌和胃高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變中的表達(dá)特點(diǎn)和差異性。

1 材料與方法

1.1 材料：選取本院2015年1月-2016年3月門(mén)診及住院胃鏡活檢患者132例作為研究對(duì)象，所有病歷臨床資料完整。所有病歷資料，均由兩名高年資醫(yī)師按照WHO2016年診斷標(biāo)準(zhǔn)重新復(fù)核。按病理診斷分為胃炎組46例，低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變組44例，高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變組42例。

1.2 方法：HE及免疫組化染色方法：對(duì)所有病理標(biāo)本均用10%中性甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，4 nm連續(xù)切片，切片后行HE染色。染色采用SP法，一抗、二抗及生物素卵白素及DNB顯色液均購(gòu)自北京中杉山生物試劑有限公司，即用型。使用DaKO Autostainer link 48型免疫組織化學(xué)自動(dòng)染色機(jī)染色，嚴(yán)格按標(biāo)準(zhǔn)程序操作，用試劑盒提供的陽(yáng)性切片進(jìn)行對(duì)照，用PBS代替一抗做陰性對(duì)照，DAB顯色。

1.3 HE診斷標(biāo)準(zhǔn)

1.3.1 胃炎：腺體呈管狀，大小形態(tài)較均勻一致，細(xì)胞核圓形、淡染，染色質(zhì)顆粒細(xì)，無(wú)核仁，核膜不明顯，無(wú)核分裂像。

1.3.2 癌前病變：腺體呈管狀，大小形態(tài)較不均勻，細(xì)胞核圓形、深染，染色質(zhì)顆粒粗，無(wú)核仁或有小核仁，核膜不明顯，無(wú)或可見(jiàn)分裂像。

1.3.3 早期胃癌：腺體呈管狀，大小形態(tài)不一致，細(xì)胞層次增多，核圓形、卵圓形、深染，染色質(zhì)顆粒粗，可見(jiàn)核仁，核膜明顯，可見(jiàn)分裂像，累及黏膜全層。

1.4 免疫組化結(jié)果判斷：切片背景清晰，腫瘤細(xì)胞根據(jù)抗體在胞漿、胞核和胞膜上特異性著色，呈棕黃色或棕褐色顆粒為陽(yáng)性。設(shè)陽(yáng)性及陰性對(duì)照。染色部位：TRIM2細(xì)胞漿陽(yáng)性，SKP2細(xì)胞核陽(yáng)性，MLH1細(xì)胞核陽(yáng)性。染色強(qiáng)度：<5%為弱陽(yáng)性，25%～50%為中等陽(yáng)性，>50為強(qiáng)陽(yáng)性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：應(yīng)用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料組間比較用χ2檢驗(yàn)，不同因子與胃癌惡變程度相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MLH1、TRIM29、SKP2在早期胃癌和癌前病變標(biāo)本中的表達(dá): 46例慢性淺表性胃炎組中6例TRIM29 陽(yáng)性，40例陰性；26例SKP2弱陽(yáng)性，2例中等陽(yáng)性，18例陰性；MLH1中3例陽(yáng)性，43例陰性。44例低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變組中，44例MLH1強(qiáng)陽(yáng)性，0例陰性；12例TRIM29弱陽(yáng)性，6例中等陽(yáng)性，26例陰性；4例SKP2強(qiáng)陽(yáng)性，28例中等陽(yáng)性，12例弱陽(yáng)性。42例高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變組中，40例MLH1強(qiáng)陽(yáng)性，2例弱陽(yáng)性，0例陰性；8例TRIM29強(qiáng)陽(yáng)性，26例中等陽(yáng)性，6例弱陽(yáng)性，2例陰性；4例SKP2強(qiáng)陽(yáng)性，34例中等陽(yáng)性，4例弱陽(yáng)性，0例陰性，見(jiàn)表1。

本研究結(jié)果顯示，三種因子在慢性淺表性胃炎組、低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變組、高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變組3組 間的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而且隨著病變逐漸加重，三個(gè)因子表達(dá)逐漸增強(qiáng)，陽(yáng)性率逐漸增高。

2.2 MLH1、TRIM29、SKP2與胃病變程度的相關(guān)性分析： Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示，MLH1(r=-0.832，P<0.05)、TRIM29(r=-0.666，P<0.05)、SKP2(r=-0.358，P<0.05)和胃惡性變程度具有明顯的相關(guān)性。三種抗體聯(lián)合應(yīng)用，可以用于鑒別診斷胃炎與上皮內(nèi)瘤變、低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變和高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變、上皮內(nèi)瘤變和早期癌變。

表1 早期胃癌和癌前病變標(biāo)本中MLH1、 TRIM29、SKP2的表達(dá)[n(%)]

3 討論

胃癌是我國(guó)也是我區(qū)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅著廣大患者的生命健康。目前我國(guó)發(fā)現(xiàn)的胃癌病例70%為晚期胃癌，手術(shù)后經(jīng)放療、化療及生物治療5年生存率只有30%左右，許多患者臨床及病理診斷后已發(fā)生廣泛轉(zhuǎn)移，失去了手術(shù)治療機(jī)會(huì)。因此，如何提高早期胃癌的確診率，做到早診斷、早治療成為廣大病理工作者的一項(xiàng)重要課題。國(guó)內(nèi)外研究資料表明，早期胃癌5年生存率可達(dá)90%以上，但早期胃癌的病理診斷仍比較困難，目前缺乏客觀的診斷依據(jù)。通常低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變被認(rèn)為是癌前病變，而高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變被是為早期胃癌，需要內(nèi)鏡下進(jìn)行治療，病理工作者的任務(wù)是能夠明確診斷早期胃癌。

SKP2是F-box蛋白家族成員，主要參與降解CKD抑制蛋白，是細(xì)胞由G1期進(jìn)入S期所必需，SKP2過(guò)表達(dá)與腫瘤的增殖分化及腫瘤形成密切相關(guān)[1-2]，具有癌基因的特性。國(guó)內(nèi)外有關(guān)SKP2研究表明[3-4]，SKP2可能成為一些抑制細(xì)胞周期的抗腫瘤藥物的新靶點(diǎn)。本研究顯示，SKP2在慢性淺表性胃炎組和低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，在低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變組間和高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說(shuō)明在胃癌發(fā)生過(guò)程中，尤其是由低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變向高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變演變的過(guò)程中，隨著其表達(dá)的升高趨勢(shì)，參與了胃癌的發(fā)生，并且促進(jìn)胃癌的發(fā)展。但本研究同時(shí)提示，在由胃炎向低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變轉(zhuǎn)化的過(guò)程中，SKP2的作用不明顯，國(guó)內(nèi)外尚無(wú)相關(guān)研究報(bào)道[5]。結(jié)果提示SKP2可以作為早期胃癌和癌前病變鑒別診斷的有意義的標(biāo)記物。

TRIM29蛋白屬于TRIM蛋白家族的成員[6]，是近年來(lái)逐漸受到關(guān)注的具有多種生物學(xué)功能的蛋白，其表達(dá)有明顯的組織和細(xì)胞特異性，推測(cè)是一種參與腫瘤的發(fā)生和分化的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，多種腫瘤細(xì)胞表達(dá)明顯增高[7]。在肺癌和胰腺癌中均有高表達(dá)的研究報(bào)道，與腫瘤的加速生長(zhǎng)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)[8]。國(guó)內(nèi)劉春曉[6]研究了TRIM2在肺非小細(xì)胞肺癌與癌旁組織中的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)TRIM29表達(dá)明顯高于癌旁組織，國(guó)內(nèi)尚無(wú)TRIM29用于早期胃癌的相關(guān)研究。本研究顯示，TRIM29在慢性淺表性胃炎組和低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變組間、低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變組間和高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變組間均存在明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，說(shuō)明TRIM29參與了胃癌發(fā)生的全過(guò)程。結(jié)果提示TRIM29可以作為胃炎與癌前病變、癌前病變與早期胃癌鑒別診斷的有意義的抗體。在今后的工作中，將進(jìn)一步驗(yàn)證該抗體的作用及臨床意義。

MLH1是人類錯(cuò)配修復(fù)基因家族中的一個(gè)重要基因，在保持遺傳信息的完整性，避免遺傳突變的產(chǎn)生具有重要的作用[9-10]，在多種腫瘤組織中均有表達(dá)。MLH1基因定位于3p21.3，是DNA錯(cuò)配修復(fù)的高密度分布區(qū)，啟動(dòng)區(qū)CPG島甲基化后，引起MLH1基因的沉默，導(dǎo)致了錯(cuò)配修復(fù)(MMR)的失活，進(jìn)而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。MLH1基因表達(dá)于細(xì)胞核，MLH1的功能位點(diǎn)缺陷被認(rèn)為是腫瘤發(fā)病的重要機(jī)制，成為今年來(lái)研究的熱點(diǎn)[11-12]。本研究顯示，MLH1在慢性淺表性胃炎組中僅3例表達(dá)，但在低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變組和高級(jí)別上皮瘤組中全部表達(dá)。說(shuō)明在MLH1正常胃黏膜中幾乎不表達(dá)，但從胃黏膜增生、更新到發(fā)生癌前病變甚至早期胃癌的過(guò)程中，卻不停地發(fā)揮錯(cuò)配修復(fù)的功能[13]，在惡性病變中持續(xù)高表達(dá)，MLH1無(wú)法區(qū)分早期胃癌和癌前病變，但可以作為胃黏膜炎癥性病變和上皮內(nèi)瘤變的有意義的抗體。

本研究結(jié)果表明，三種抗體在3組 間的表達(dá)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且表達(dá)程度與胃惡性進(jìn)程存在明顯相關(guān)性。但同時(shí)三種抗體各自又有其表達(dá)特點(diǎn)，可以區(qū)分胃炎及胃上皮內(nèi)瘤變，低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變和高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變。三種抗體聯(lián)合應(yīng)用，必將明顯提高早期胃癌及癌前病變的檢出率，對(duì)提高患者生存率和延長(zhǎng)壽命有十分重要的意義。

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Theclinical?significanceofRIM29，SKP2，MLH1inearlygastriccancerandprecancerouslesions

HEHaiyan1,ZHANGMiao1,LIJing1,LIANGPeifen1,XIAOHongyan1，WANGJing1,NIUMuwen1,LIJing1,WANGPing1,PIAOWenhua1,2.

1.DepartmentofAnatomyPathology,NingxiaPeople'sHospital,Yinchuan750002,China； 2.TheFirstAffiliatedHospitalofNorthwestUniversityforNationalities,Yinchuan750002,China

Correspondingauthor:PIAOWenhua,Email:wenhuapiao@163.com

ObjectiveTo explore the diversity of TRIM29,SKP2,MLH1 in gastroscope biopsy specimens of early gastric cancer,high-grade intraepithelial neoplasia and gastritis in order to look for the differential diagnosis methods.to the early gastric cancer and high level intraepithelial neoplasia.MethodsThe differences of the expression from Specimens in 40 cases of gastritis,44 cases of low level intraepithelial neoplasia and 42 cases of high level intraepithelial neoplasia gastroscope were performed by immunohistochemical methods.ResultsTRIM29 were no expressed,while SKP2 weak expressed,3cases had MLH1 in 40 cases with gastritis group; MLH1 were all expressed,while TRIM29 had 18 cases expression,SKP2 all expressed in 44 cases of low level intraepithelial neoplasia group; TRIM29 were all expressed in the group,SKP2 28 expressed,MLH1 all expressed in 42 cases of high level intraepithelial neoplasia.The expression level among three kinds of proteins was significantly difference,and the expression level was related with gastric malignant process.ConclusionTRIM29,SKP2,MLHI can be used as a reliable marker of early diagnosis in gastric cancer and intraepithelial neoplasia.

TRIM29;SKP2;MLH1;Earlygastriccancer

寧夏自然科學(xué)基金項(xiàng)目(NZ1502)

1.寧夏人民醫(yī)院病理科，寧夏 銀川 750002 2.西北民族大學(xué)第一附屬醫(yī)院，寧夏 銀川 750002

賀海燕(1963-)，男，河南籍，主任醫(yī)師，從事臨床病理診斷工作

樸文花，Email:wenhuapiao@163.com

http://kns.cnki.net/kcms/detail/64.1008.R.20170814.1453.010.html

10.13621/j.1001-5949.2017.08.0679

R735

A

2017-02-14 [責(zé)任編輯]王凱榮