吳曼莉，胡 堅(jiān)，張 楠，柯智健，柳志強(qiáng)，李曉宇

CgRGS7調(diào)控膠抱炭疽菌分生抱子產(chǎn)量、附著胞形成及致病性

吳曼莉，胡 堅(jiān)，張 楠，柯智健，柳志強(qiáng)*，李曉宇

(海南大學(xué)熱帶農(nóng)林學(xué)院，海南?？?570228)

【目的】G蛋白信號調(diào)控因子(regulators of G-protein signaling，RGS)是G蛋白信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的負(fù)調(diào)控因子，參與多個(gè)G蛋白信號通路介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)過程，目前對于膠抱炭疽菌相關(guān)RGS蛋白的生物學(xué)功能研究較少?！痉椒ā勘狙芯客ㄟ^同源重組獲得CgRGS7基因的敲除突變體，并對其生物學(xué)功能進(jìn)行初步分析。【結(jié)果】CgRGS7基因編碼620個(gè)氨基酸，具有7個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域和1個(gè)RGS功能域。CgRGS7敲除突變體與野生型菌株相比，表現(xiàn)為分生抱子產(chǎn)量降低且抱子呈多端萌發(fā)，附著胞形成率下降以及致病性減弱。【結(jié)論】CgRGS7參與調(diào)控膠抱炭疽菌分生抱子產(chǎn)量，同時(shí)影響芽管的形態(tài)發(fā)育、附著胞形成及致病性。

膠抱炭疽菌;G蛋白信號調(diào)控因子;分生抱子;致病性

【研究意義】膠孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)是絲狀病原真菌，能夠侵染多種木本植物，包括橡膠、香蕉、芒果等多種熱帶作物[1]。其中芒果炭疽病是由該病菌引起的侵染性病害，在芒果種植區(qū)常有發(fā)生，尤其在貯運(yùn)期易引起果實(shí)腐爛，影響芒果外觀質(zhì)量和品質(zhì)[2-3]。膠孢炭疽菌不但寄主范圍廣泛，而且侵染方式多樣，目前對于該病菌分子致病機(jī)制的研究還不夠深入，從而也限制了相關(guān)防治技術(shù)的發(fā)展[1，4]。因此，深入解析膠孢炭疽菌致病基因，對于該病菌的防治具有的意義。

植物病原菌在侵染過程中，信號的識別及傳導(dǎo)起著重要的作用，其中G蛋白信號途徑是其感應(yīng)外界信號并傳導(dǎo)到細(xì)胞內(nèi)部的重要機(jī)制之一[5]，當(dāng)感受到胞外信號或是受到外界刺激時(shí)，G蛋白偶聯(lián)感受器被激活，促使Gα亞基空間構(gòu)象做出改變，導(dǎo)致Gα與Gβγ分離，而游離的Gα和Gβγ能夠激活下游的靶蛋白，從而引起細(xì)胞內(nèi)的多種生理活動。綜上，G蛋白在生物信號轉(zhuǎn)導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)中有著重要的作用，其中的某個(gè)信號傳遞環(huán)節(jié)發(fā)生改變都可能影響到整個(gè)生物信號系統(tǒng)，進(jìn)而引起相關(guān)生物學(xué)特性的改變。RGS蛋白負(fù)調(diào)控G蛋白信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，其GAP作用能夠引起Gα-GTP的水解，導(dǎo)致G蛋白失去活性[6-7]?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】相關(guān)研究已證明，G蛋白信號途徑參與調(diào)控真菌的生長發(fā)育、生殖、致病等過程[8-9]，但是目前開展膠孢炭疽菌相關(guān)RGS蛋白功能研究還較少。【本研究切入點(diǎn)】在前期研究中，本實(shí)驗(yàn)室從膠孢炭疽菌中鑒定了10個(gè)含RGS結(jié)構(gòu)域的蛋白。本研究選取了其中一個(gè)RGS基因進(jìn)行克隆鑒定，比對結(jié)果顯示該基因與Magnaporthe oryzae中的MoRGS7基因同源，因此，將基因命名為CgRGS7。利用基因敲除的方法獲得該基因的敲除轉(zhuǎn)化子，通過一系列表型分析鑒定其所具有的生物學(xué)功能?！緮M解決的關(guān)鍵問題】本研究旨在明確RGS蛋白在膠孢炭疽菌生長和侵染過程中的作用，為深入解析膠孢炭疽菌致病的分子機(jī)理奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

1.1.1 菌株及試劑 膠孢炭疽菌野生型(WT)保存于海南大學(xué)熱帶農(nóng)林學(xué)院。MiniBEST Agarose Gel DNA Extraction Kit、MiniBEST Plasmid Purification Kit、限制性內(nèi)切酶(Kpn I，Eco R I，Bam H I)及PCR相關(guān)試劑等均購自TaKaRa公司;其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.1.2 培養(yǎng)基 PDA培養(yǎng)基:馬鈴薯200 g/L、葡萄糖20 g/L，瓊脂粉18 g/L。LB培養(yǎng)基:胰蛋白胨10 g、酵母粉5 g、NaCl 10 g，瓊脂粉18 g/L。CM培養(yǎng)基:胰化蛋白胨6 g、酵母提取物6 g、蔗糖10 g，瓊脂粉18 g/L。CZAPEK培養(yǎng)基:蔗糖30 g、NaNO33 g、MgSO40.5 g、K2HPO41 g、FeSO40.01 g、KCl0.5 g，瓊脂粉18 g/L。MM培養(yǎng)基:K2HPO47 g、KH2PO43 g、(NH4)2SO41 g、MgSO40.1 g、檸檬酸鈉0.5 g、葡萄糖5 g，瓊脂粉18 g/L。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 CgRGS7基因的克隆及序列分析 膠孢炭疽菌總RNA提取采用TaKaRa MiniBEST Plant RNA Extraction Kit(TaKaRa，中國)，利用PrimeScriptTMII 1st Strand cDNA Synthesis Kit(TaKaRa，中國)合成

cDNA。以膠孢炭疽菌野生型菌株的cDNA為模板，CgRGS7F和CgRGS7R(表1)為引物擴(kuò)增目的基因，PCR產(chǎn)物連接pMD18-T載體轉(zhuǎn)化后提取質(zhì)粒送公司進(jìn)行測序。利用SMART(http://smart.embl-heidelberg.de/)工具對CgRGS7進(jìn)行蛋白結(jié)構(gòu)域分析，通過NCBI中BLASTp工具對CgRGS7進(jìn)行蛋白同源性分析，用Clustal X(1.83)軟件進(jìn)行多序列比對，利用MEGA5.0軟件以鄰近相接法(Neighborjoining，NJ)構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹。

1.2.2 CgRGS7基因的敲除與驗(yàn)證 以圖1的原理進(jìn)行CgRGS7基因的敲除。膠孢炭疽菌基因組DNA提取方法參照文獻(xiàn)[10]，以提取的基因組作為模板，通過CgRGS7上下游片斷引物[CgRGS7upF/ CgRGS7upR、CgRGS7downF/CgRGS7downR(表1)]分別進(jìn)行CgRGS7基因的上下游序列擴(kuò)增。利用試劑盒對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行回收純化，再分次連接到質(zhì)粒pCB1532(含氯嘧磺隆抗性基因Sur)上，通過電泳驗(yàn)證無誤后即獲得敲除載體。將敲除載體經(jīng)Eco R I酶切成線性化后轉(zhuǎn)入到膠孢炭疽菌野生型原生質(zhì)體中，參照文獻(xiàn)的方法步驟進(jìn)行原生質(zhì)體制備及轉(zhuǎn)化[11]。敲除轉(zhuǎn)化子利用含有氯嘧磺隆的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，隨后提取抗性轉(zhuǎn)化子的基因組DNA，分別根據(jù)基因上游片段的前段序列和下游片段的后段序列設(shè)計(jì)驗(yàn)證引物CgRGS7UU和CgRGS7DD，并根據(jù)pCB1532的內(nèi)部序列設(shè)計(jì)引物PI和PI1，利用3對引物(CgRGS7F+CgRGS7R、CgRGS7UU+PI、CgRGS7DD+PI1)(表1)對轉(zhuǎn)化子進(jìn)行PCR鑒定，結(jié)果顯示，若利用引物CgRGS7F+CgRGS7R擴(kuò)增結(jié)果無條帶，但引物CgRGS7UU+PI、CgRGS7DD+PI1能擴(kuò)增出目的片段的轉(zhuǎn)化子即為目的基因敲除轉(zhuǎn)化子。

圖1 CgRGS7基因敲除原理Fig.1 Gene knockout principle of CgRGS7

1.2.3 敲除轉(zhuǎn)化子表型分析 ①營養(yǎng)生長及脅迫因子敏感性分析。無菌環(huán)境下，分別于PDA平板上接種膠孢炭疽菌野生型和敲除轉(zhuǎn)化子，7 d后用打孔器打取菌落邊緣、菌餅分別接種于PDA、CM、CZAPEK和MM培養(yǎng)基中。同時(shí)為了探究CgRGS7基因?qū)δz孢炭疽菌滲透壓及氧化應(yīng)激反應(yīng)的影響，打取5 mm的菌餅分別接種于含有NaCl(濃度分別為0、0.5、0.8和1.0 mol/L)、H2O2(濃度分別為0、5、10和20 mmol/L)及0.01%SDS的MM平板上，28℃培養(yǎng)7 d后，觀察菌絲生長情況并測量菌落直徑，每組設(shè)3個(gè)重復(fù)。②分生孢子產(chǎn)量及萌發(fā)。野生型和敲除轉(zhuǎn)化子在PDA平板上28℃培養(yǎng)約9 d，用滅過菌的涂布棒輕掃菌落表面氣生菌絲后28℃光照培養(yǎng)3 d誘導(dǎo)產(chǎn)孢，取含有0.4%吐溫80的無菌水涂布平板，菌液經(jīng)過濾制得孢子懸浮液，并用血球計(jì)數(shù)板進(jìn)行孢子濃度計(jì)數(shù)，每處理設(shè)3個(gè)重復(fù)。取孢子懸浮液滴加于載玻片上，28℃保濕培養(yǎng)，于8 h后觀察孢子萌發(fā)情況，18 h后觀察附著胞形成情況。③致病性分析。選取無創(chuàng)傷且無病斑的芒果，用滅菌的大頭針在芒果表面形成小創(chuàng)口，無菌條件下于活化好的PDA平板上打取菌餅，分別接種在芒果的無傷口及有傷口的位置，每處理3個(gè)重復(fù)，28℃保鮮盒內(nèi)保濕培養(yǎng)，5 d后觀察致病情況并記錄。

表1 引物名稱及序列Table 1 Primers and sequences

2 結(jié)果與分析

2.1 基因的克隆及序列分析

PCR擴(kuò)增與pMD18-T載體連接，轉(zhuǎn)化后提取質(zhì)粒送公司測序，結(jié)果表明CgRGS7基因開放閱讀框全長1860 bp，編碼620個(gè)氨基酸，在N末端含有7次跨膜結(jié)構(gòu)域，C末端第397～508位氨基酸含有1個(gè)RGS功能域(圖2-A)。將CgRGS7在NCBI中進(jìn)行BLASTp比對，通過MEGA5.0與不同真菌的RGS蛋白序列一起構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(圖2-B)。CgRGS7與C.gloeosporioides Nara gc5的RGS蛋白(XP-007278705)相似度達(dá)到95%，此外CgRGS7與C. salicis和C.sublineola同源蛋白相似性較高，分別為76%和69%。

圖2 CgRGS7蛋白結(jié)構(gòu)域和系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.2 Protein domain and phylogenetic tree of CgRGS7

圖3 CgRGS7敲除突變體的驗(yàn)證Fig.3 Verification of CgRGS7 gene knockoutmutant

2.2 CgRGS7基因的敲除與驗(yàn)證

將CgRGS7基因的敲除載體經(jīng)限制性內(nèi)切酶Eco R I酶切線性化后轉(zhuǎn)入膠孢炭疽菌野生型原生質(zhì)體中，共獲得156個(gè)轉(zhuǎn)化子，利用3對引物CgRGS7F+CgRGS7R、CgRGS7UU+PI、PI1+ CgRGS7DD(表1)進(jìn)行篩選，其中第44號轉(zhuǎn)化子利用CgRGS7F+CgRGS7R引物不能擴(kuò)增目的條帶，而通過CgRGS7UU+PI、PI1+CgRGS7DD引物能夠分別擴(kuò)增出目的條帶(圖3)，即確定第44號轉(zhuǎn)化子為陽性轉(zhuǎn)化子，將其命名為ΔCgRGS7-44。

2.3 突變體表型分析

2.3.1 營養(yǎng)生長及脅迫因子敏感性分析 為了探究CgRGS7基因?qū)δz孢炭疽菌營養(yǎng)生長的影響，將野生型和ΔCgRGS7-44分別接種于PDA、CM、CZAPEK和MM培養(yǎng)基中，28℃培養(yǎng)7 d，在前3種培養(yǎng)基中，ΔCgRGS7-44與野生型在菌落形態(tài)和生長速率方面無明顯不同，但在MM培養(yǎng)基上敲除轉(zhuǎn)化子較野生型生長速率稍顯緩慢(圖4)。在脅迫因子敏感性試驗(yàn)中，經(jīng)抑制率計(jì)算分析，ΔCgRGS7-44在含不同濃度NaCl、H2O2和SDS的MM培養(yǎng)基上，生長形

態(tài)及速率與野生型相比均無顯著性差異。由此可見，CgRGS7基因的敲除對膠孢炭疽菌的營養(yǎng)生長及相關(guān)脅迫因子敏感性的影響不大。

2.3.2 分生抱子產(chǎn)量及萌發(fā)情況 經(jīng)過血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，在產(chǎn)孢量方面ΔCgRGS7-44與野生型相比有明顯對比，野生型分生孢子濃度平均為(8.16± 0.2×106)個(gè)/mL，敲除轉(zhuǎn)化子ΔCgRGS7-44分生孢子濃度為(5.17±1.04×104)個(gè)/mL，兩者之間差異顯著。此外，在分生孢子形態(tài)方面，野生型孢子單端萌發(fā)及少部分雙端萌發(fā)，ΔCgRGS7-44則是多端萌發(fā)(圖5)，進(jìn)而統(tǒng)計(jì)了兩者的孢子萌發(fā)率及附著胞形成率(表2)，ΔCgRGS7-44孢子萌發(fā)率(8 h)約為85 %±4.3%，顯著大于野生型孢子萌發(fā)率。但是敲除轉(zhuǎn)化子的附著胞形成率較野生型有所延遲，18 h附著胞形成率為32.54%±3.75%，而野生型則達(dá)到68.07%±8.1%。由此可見，CgRGS7基因參與調(diào)控分生孢子的產(chǎn)量、芽管形態(tài)及附著胞的形成。

2.3.3 CgRGS7參與調(diào)控致病性 為了探究CgRGS7基因與膠孢炭疽菌致病力的關(guān)系，將野生型和ΔCgRGS7-44接種芒果果實(shí)，觀察其致病結(jié)果。如圖6所示，ΔCgRGS7-44在無傷口方式接種下幾乎無病斑形成;而以傷口方式接種時(shí)，與野生型相比，ΔCgRGS7-44所形成的病斑明顯減小，致病力減弱。由此說明，CgRGS7對膠胞炭疽菌的致病力有影響。

圖4 不同培養(yǎng)基對菌株生長的影響Fig.4 Effects of differentmedia on growth of strains

圖5 野生型與CgRGS7敲除突變體分生抱子萌發(fā)形態(tài)Fig.5 Conidium germination of wild type and CgRGS7 deletion mutant

表2 產(chǎn)抱量、萌發(fā)率和附著胞形成率Table 2 Conidium production，germination rate and appressorium formation rate

3 討 論

RGS蛋白是G蛋白信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的負(fù)調(diào)節(jié)子，相關(guān)研究表明其在眾多生理生化過程中發(fā)揮著重要作用。本試驗(yàn)利用同源重組的方法獲得了CgRGS7敲除轉(zhuǎn)化子，并對其在營養(yǎng)生長、滲透壓脅迫、氧化應(yīng)激反應(yīng)、分生孢子產(chǎn)生及萌發(fā)、及致病力等方面做了表型分析。結(jié)果表明，CgRGS7敲除轉(zhuǎn)化子在營養(yǎng)生長及NaCl、H2O2、SDS的壓力脅迫下，與野生型相比無顯著變化;但在分生孢子的產(chǎn)量、芽管生長、附著胞形成率以及致病力方面兩者存在顯著差異，敲除轉(zhuǎn)化子在產(chǎn)孢量及附著胞形成率方面均低于野生型菌株，致病力也減弱，這些結(jié)果與已報(bào)道的稻瘟病菌MoRGS7的功能有相似之處，張海峰等在M. oryzae中鑒定到8個(gè)RGS蛋白(MoRGS1～MoRGS8)，結(jié)果分析顯示這些基因參與調(diào)控該病菌的營養(yǎng)生長、細(xì)胞壁完整性、附著胞分化和侵入等生理過程[12-13]，其中MoRGS7不僅參與芽管的生長，影響附著胞形成率，還參與稻瘟病菌的侵染過程，造成ΔMoRGS7致病力減弱，進(jìn)一步試驗(yàn)顯示ΔMoRGS7致病性下降是因?yàn)楦街秩肼氏陆岛颓秩揪z不能擴(kuò)展造成的。CgRGS7與稻瘟病菌的MoRGS7相似，均在N端含有7個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域，在C端含有一個(gè)RGS功能域，推測CgRGS7敲除轉(zhuǎn)化子的分生孢子產(chǎn)量下降及附著胞形成率降低可能是造成其致病力減弱的主要原因，關(guān)于CgRGS7是否影響附著胞的侵入及侵染菌絲的擴(kuò)展，還有待于進(jìn)一步的試驗(yàn)驗(yàn)證。

圖6 野生型與ΔCgRGS7-44致病力試驗(yàn)Fig.6 Pathogenicity tests of wild type andΔCgRGS7-44

目前，在膠孢炭疽菌信號傳導(dǎo)途徑中鑒定的與致病相關(guān)的基因還較少，已報(bào)道的包括MAPK途徑中CgMEK1基因參與細(xì)胞分裂的極化及芽管的分化，其敲除突變體無附著胞形成，致病力喪失[14]; Cgl-slt2基因?qū)I養(yǎng)菌絲生長和附著胞的形成有影響，其中敲除突變體的附著胞形成率明顯降低[1]。cAMP-PKA途徑中CgPKAC基因的敲除突變體附著胞形成緩慢及致病力減弱[15]。在以前的研究中，還發(fā)現(xiàn)G蛋白信號途徑中CgRGS2蛋白參與了膠孢炭疽菌的營養(yǎng)生長，分生孢子產(chǎn)量及萌發(fā)，氧化應(yīng)激反應(yīng)及細(xì)胞壁完整性，其敲除突變體致病力減弱[16]，CgRGS4蛋白則影響該菌的營養(yǎng)生長，參與滲透壓響應(yīng)及氧化應(yīng)激反應(yīng)，同時(shí)對黑色素產(chǎn)量有影響[17]。

4 結(jié) 論

本研究從膠孢炭疽菌中鑒定了一個(gè)RGS基因CgRGS7，表型分析發(fā)現(xiàn)其參與調(diào)控膠孢炭疽菌的分生孢子產(chǎn)生、附著胞形成及致病力，是該病菌一個(gè)新的致病因子?？偟膩碚f，目前關(guān)于膠孢炭疽菌致病機(jī)制研究尚處于起步階段，本研究為該病菌分子致病機(jī)理的研究奠定了一定的基礎(chǔ)。

[1]Yong H Y，Bakar FD A，Illias RM，etal.Cgl-SLT2 is required for appressorium formation，sporulation and pathogenicity in Colletotrichum gloeosporioides[J].Brazilian Journal of Microbiology，2013，44(4):1241-1250.

[2]畢方鋮，戴宏芬，孟祥春.農(nóng)桿菌介導(dǎo)的芒果膠孢炭疽菌遺傳轉(zhuǎn)化及致病性缺陷突變體的篩選[J].熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，34 (8):47-51.

[3]賈 靜，蒲金基，張 賀，等.芒果炭疽病菌環(huán)境pH信號調(diào)控基因PalF的克隆與分析[J].熱帶作物學(xué)報(bào)，2014，35(4):753-757.

[4]Cai Z Y，LiGH，Lin CH，et al.Identifying pathogenicity genes in the rubber tree anthracnose fungus Colletotrichum gloeosporioides through random insertional mutagenesis[J].Microbiological Research，2013，168:340-350.

[5]Li L，Shen G，Zhang ZG，etal.Canonical heterotrimeric G proteins regulatingmating and virulence of Cryptococcus neoformans[J].Molecular Biology of the Cell，2007，18(11):4201-4209.

[6]Siderovski D P，Willard FS.The GAPs，GEFs and GDIs of heterotrimeric G-Protein alpha subunits[J].International Journal of Biological Sciences，2005，1(2):51-66.

[7]Park A R，Cho A R，Seo JA，et al.Functional analyses of regulators of G protein signaling in Gibberella zeae[J].Fungal Genetics and Biology，2012，49(7):511-520.

[8]Yu JH.Heterotrimeric G protein signaling and RGSs in Aspergillus nidulans[J].Journal of Microbiology，2006，44(2):145-154.

[9]Wang Y，Geng Z，Jiang D，et al.Characterizations and functions of regulator of G protein signaling(RGS)in fungi[J].Applied Microbiology and Biotechnology，2013，97(18):7977-7987.

[10]Fang W G，Scully L R，Zhang L，et al.Implication of a regulator of G protein signalling(Bb RGS1)in conidiation and conidial thermotolerance of the insect pathogenic fungus Beauveria bassiana[J]. FEMSMicrobiology Letters，2008，279(2):146-156.

[11]Vries D L，F(xiàn)arquhar M G.RGS protein:more than just GAPs for heterotrimeric G protein[J].Trends in Cell Biology，1999，9(4): 138-144.

[12]Liu H，Suresh A，Willard F S，et al.Rgs1 regulatesmultiple Gα subunits in Magnaporthe，pathogenesis，asexual growth and thigmotropism[J].Embo Journal，2007，26(3):690-700.

[13]Zhang H，TangW，Liu K，et al.Eight RGSand RGS-like proteins orchestrate growth，differentiation，and pathogenicity of Magnaporthe oryzae[J].PLoSPathogens，2011，7(12):446-459.

[14]Kim Y K，Kawano T，Li D X，et al.A mitogen-activated protein kinase kinase required for induction of cytokinesis and appressorium formation by host signals in the conidia of Colletotrichum gloeosporioides[J].The Plant Cell，2000，12:1331-1343.

[15]Priyatno T P，Bakar F D A，Kamaruddin N，et al.Inactivation of the catalytic subunit of cAMP-dependent protein kinase A causes delayed appressorium formation and reduced pathogenicity of Colletotrichum gloeosporioides[J].The Scientific World Journal，2012，2012 (2):545784-545784.

[16]吳曼莉，李曉宇，張 楠，等.膠孢炭疽菌CgRGS2基因的克隆及生物學(xué)功能[J].微生物學(xué)報(bào)，2017(1):66-76.

[17]徐 爽，吳曼莉，柯智健，等.膠孢炭疽菌CgRGS4調(diào)控營養(yǎng)生長、滲透壓響應(yīng)、氧化應(yīng)激反應(yīng)和致病性[J].浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2017(2):277-285.

(責(zé)任編輯 陳 虹)

CgRGS7 Regulation of Conidium Production，Appressorium Formation and Pathogenicity in Colletotrichum gloeosporioides

WU Man-li，HU Jian，ZHANG Nan，KE Zhi-jian，LIU Zhi-qiang*，LIXiao-yu
(Institute of Tropical Agriculture and Forestry，Hainan University，Hainan Haikou 570228，China)

【Objective】Regulators of G-protein signaling(RGS)were a kind of negative regulatory factor of G protein，which were involved in various G protein-mediated signaling pathways.At present，therewas little research on the biological functions of RGS in Colletotrichum gloeosporioides.【Method】In the present study，the gene-knockoutmutantof CgRGS7 wasobtained by homologous recombination，and itsbiological functionswere analyzed.【Result】The gene CgRGS7 encoded a 620-amino acids protein，containing seven membrane spaning domains and a RGS function domain.Comparing to thewild type，the knockoutmutantof CgRGS7 reduced conidium production withmulti-end germination and appressorium formation rate and pathogenicity.【Conclusion】CgRGS7 is involved in regulation of conidium production，germ tubemorphogenesis，appressorium formation rate and pathogenicity of C.gloeosporioides.

Colletotrichum gloeosporioides;Regulators of G-protein signaling;Conidium;Pathogenicity

S432.44

A

1001-4829(2017)8-1802-06

10.16213/j.cnki.scjas.2017.8.018

2016-09-10

國家自然科學(xué)基金(31560045);海南省重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃(ZDYF2016155)

吳曼莉(1992-)，女，海南萬寧人，碩士研究生，主要研究方向?yàn)橹参锊≡婢鷮W(xué)，E-mail:wumanli0331@163.com，*為通訊作者，E-mail:liuzhiqiang80@126.com。