周 瑤, 楊惠琴, 時(shí)逸吟, 陳佳嫻, 朱 堅(jiān), 鄧曉軍, 郭德華

(上海出入境檢驗(yàn)檢疫局, 上海 200135)

研究論文

超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)水果中6種甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑及其質(zhì)譜裂解規(guī)律

周 瑤*, 楊惠琴, 時(shí)逸吟, 陳佳嫻, 朱 堅(jiān), 鄧曉軍, 郭德華

(上海出入境檢驗(yàn)檢疫局, 上海 200135)

建立了超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-MS/MS)同時(shí)測(cè)定橙子、香蕉、蘋果、菠蘿中E-苯氧菌胺、嘧菌酯、醚菌酯、啶氧菌酯、吡唑醚菌酯和肟菌酯6種甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑殘留的方法。采用計(jì)算機(jī)輔助譜圖解析軟件ACD Lab/MS Fragmenter對(duì)質(zhì)譜裂解路徑進(jìn)行了分析。樣品經(jīng)乙腈提取,氨基固相萃取柱(SupelClean LC-NH2)凈化,采用ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱(50 mm×2.1 mm, 1.7 μm)進(jìn)行分離,以含0.1%(v/v)甲酸的10 mmol/L乙酸銨溶液和含0.1%(v/v)甲酸的乙腈溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫,在電噴霧正離子模式下,采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)模式監(jiān)測(cè),外標(biāo)法定量。結(jié)果顯示,6種甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑在5～100 μg/L(其中吡唑醚菌酯在1～20 μg/L)范圍內(nèi)的相關(guān)系數(shù)(r2)均大于0.999。6種殺菌劑的加標(biāo)回收率為60.4%～120%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為2.15%～15.1%(n=6)。該法能滿足橙子、香蕉、蘋果和菠蘿中6種甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑殘留量的檢測(cè)要求。

超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜;固相萃取;計(jì)算機(jī)輔助譜圖解析軟件;甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑;水果

殺菌劑是近年來發(fā)展最快,使用最多的一類農(nóng)藥,自2007年以來已經(jīng)超越殺蟲劑位居農(nóng)藥市場(chǎng)第二位,而甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑則在殺菌劑使用中占據(jù)主導(dǎo)地位。從近幾年全球甲氧基丙烯酸酯類農(nóng)藥的銷售額以及農(nóng)藥單位面積施用量來看,排在前三位的藥物分別為嘧菌酯(azoxystrobin)、吡唑醚菌酯(pyraclostrobin)以及肟菌酯(trifloxystrobin)[1]。為防止該類藥物的濫用,中國(guó)、美國(guó)和歐盟等多個(gè)國(guó)家和組織機(jī)構(gòu)都制定了農(nóng)產(chǎn)品中該類藥物的殘留限量[2-4],其中中國(guó)和美國(guó)對(duì)于吡唑醚菌酯的限量相對(duì)嚴(yán)苛,對(duì)香蕉中該物質(zhì)的限量分別為0.02 mg/kg和0.04 mg/kg;美國(guó)對(duì)于肟菌酯限量涉及的基質(zhì)種類最為廣泛,有10余種水果基質(zhì),并規(guī)定了其他水果最大限量不得超過5 mg/kg;中國(guó)、美國(guó)和歐盟對(duì)于多數(shù)水果中該類化合物的使用限量為0.2～20 mg/kg。

目前,對(duì)甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑的多殘留檢測(cè)方法主要有氣相色譜-質(zhì)譜法[5]、液相色譜-大氣壓化學(xué)電離(APCI)源-串聯(lián)質(zhì)譜法[6]、液相色譜-電噴霧電離(ESI)源-串聯(lián)質(zhì)譜法[7]。甲氧基丙烯酸酯的裂解機(jī)理較為復(fù)雜，采用不同的電離模式所選擇的監(jiān)控離子碎片也不相同,因此目前未見關(guān)于其裂解路徑的報(bào)道。本研究結(jié)合了計(jì)算機(jī)輔助圖譜解析軟件ACD Lab/MS Fragmenter驗(yàn)證了可能的分子碎片結(jié)構(gòu)，建立了超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-MS/MS)檢測(cè)橙子、香蕉、蘋果和菠蘿中E-苯氧菌胺(E-metominostrobin)、嘧菌酯、醚菌酯(kresoxim-methyl)、啶氧菌酯(picoxystrobin)、吡唑醚菌酯和肟菌酯6種甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑殘留的分析方法。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1儀器、試劑與材料

ACQUITYTM超高效液相色譜儀、Waters XevoTMTQ-S三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀(美國(guó)Waters公司); PT 2500E均質(zhì)器(瑞士Kinematica公司); 5810R臺(tái)式離心機(jī)(德國(guó)Eppendorf公司); RE800水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(日本Yamato公司); Elmasonic P超聲波清洗機(jī)(德國(guó)Elma公司); KMC-1300V渦旋混合器(韓國(guó)Vision公司); LP620P電子天平(德國(guó)Sartorius公司); GC-12A氮吹儀(美國(guó)Ameritech公司); Milli-Q超純水發(fā)生器(美國(guó)Millipore公司); SupelClean LC-NH2固相萃取柱(500 mg/3 mL,美國(guó)Supelco公司)。

氯化鈉(分析純,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);乙酸乙酯(HPLC級(jí),上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司);甲醇和乙腈(HPLC級(jí),上海星可高純?nèi)軇┯邢薰?;甲苯(HPLC級(jí),美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司)。其他試劑均為國(guó)產(chǎn)色譜純。

標(biāo)準(zhǔn)品:E-苯氧菌胺、嘧菌酯、醚菌酯、啶氧菌酯、吡唑醚菌酯和肟菌酯純度均大于99.0%(德國(guó)Dr. Ehrenstorfer公司)。分別稱取適量的6種甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑標(biāo)準(zhǔn)品10 mg,用乙腈溶解并定容至10 mL,配制質(zhì)量濃度為1 000 mg/L的單標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,于4 ℃冰箱內(nèi)避光儲(chǔ)存;分別吸取適量單標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,用乙腈逐級(jí)稀釋,配制所需濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

試樣:根據(jù)國(guó)家質(zhì)檢總局食品化妝品標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)發(fā)布的《食品化妝品專業(yè)化學(xué)分析方法驗(yàn)證程序》[8]對(duì)典型水果基質(zhì)的分類,從上?？诎度粘１O(jiān)控水果樣中挑選了4種水果典型基質(zhì):橙子(高酸、高含水量柑橘類)、香蕉(低水分、低脂肪、高淀粉或高蛋白類)、蘋果(高含水量仁果類)和菠蘿(高酸、高含水量其他類)。

1.2樣品前處理

1.2.1提取

稱取5.0 g經(jīng)均質(zhì)后的樣品于50 mL塑料離心管中,加入5 mL乙腈,用渦旋混勻器振蕩1 min,加入5.0 g氯化鈉,振蕩1 min,以4 000 r/min離心5 min,移取上層清液,用乙腈定容至10 mL。移取5 mL定容后的溶液至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中,于30 ℃水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干,用氮?dú)獯抵寥珊?用1.0 mL乙腈溶解,待凈化。

1.2.2凈化

將氨基固相萃取柱固定在固相萃取裝置上,用4 mL乙腈活化,準(zhǔn)確吸取400 μL待凈化液上樣,用6 mL乙腈-甲苯(7∶3, v/v)洗脫,洗脫液全部轉(zhuǎn)移至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中(溫度為30 ℃)蒸發(fā)至近干,再用氮?dú)獯蹈?用1 mL乙腈-水(1∶1, v/v)定容后,過0.22 μm有機(jī)濾膜,待UPLC-MS/MS分析。

1.3儀器條件

色譜柱:ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱(50 mm×2.1 mm, 1.7 μm,美國(guó)Waters公司);柱溫:室溫;流動(dòng)相A:含0.1%(v/v)甲酸的10 mmol/L乙酸銨溶液;流動(dòng)相B:含0.1%(v/v)甲酸的乙腈溶液。梯度洗脫程序:0～1.50 min, 10%B～40%B; 1.50～2.50 min, 40%B; 2.50～4.00 min, 40%B～90%B; 4.00～5.00 min, 90%B; 5.00～5.01 min, 90%B～10%B; 5.01～6.50 min, 10%B。流速:0.25 mL/min;進(jìn)樣量:1 μL。6種待測(cè)物的保留時(shí)間見表1。

離子源:ESI源,正離子模式;離子源溫度：150 ℃;毛細(xì)管電壓:0.5 kV;脫溶劑溫度:650 ℃;錐孔氣流速:150 L/h;監(jiān)測(cè)模式:多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)模式。6種待測(cè)物的監(jiān)測(cè)離子對(duì)、錐孔電壓、碰撞能量等參數(shù)見表1。

表 1 6種甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑的保留時(shí)間和質(zhì)譜參數(shù)Table 1 Retention times and MS parameters of the six strobilurin fungicides

CAS: chemical abstracts service; * quantitative ion.

2 結(jié)果與討論

2.1質(zhì)譜條件的優(yōu)化

取質(zhì)量濃度均為100 μg/L的甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,在ESI+模式下進(jìn)行母離子掃描,確定準(zhǔn)分子離子峰[M+H]+;調(diào)節(jié)錐孔電壓、毛細(xì)管電壓等參數(shù)后進(jìn)行子離子掃描,優(yōu)化碰撞能量;每個(gè)化合物選擇2個(gè)子離子,以響應(yīng)值較高的子離子作為定量離子,另一個(gè)作為輔助定性離子。優(yōu)化后的質(zhì)譜參數(shù)見表1。

2.2二級(jí)碎片裂解路徑

圖 1 6種目標(biāo)化合物的子離子掃描質(zhì)譜圖及其可能的裂解途徑Fig. 1 Product ion spectra and probable fragmentation routes of the six target compounds

圖 1 (續(xù))Fig. 1 (Continued)

圖 1 (續(xù))Fig. 1 (Continued)

圖 1 (續(xù))Fig. 1 (Continued)

甲氧基丙烯酸酯類化合物共同的結(jié)構(gòu)單元是E-β-甲氧基丙烯酸酯類單元,在α-位與分子的其余部分相連,通常其活性基團(tuán)有:甲氧基丙烯酸類、甲氧基氨基甲酸酯類、肟基乙酸酯類、肟基乙酰胺類、唑烷二酮類、咪唑啉酮類。甲氧基丙烯酸酯類化合物結(jié)構(gòu)中變化較多的是側(cè)鏈,且側(cè)鏈大多在活性基團(tuán)的鄰位。側(cè)鏈結(jié)構(gòu)中多含有芳氧基、雜芳氧基、芳氧烷基和雜芳氧烷基等,有的還在側(cè)鏈中引入氟原子、氯原子和三氟甲基等吸電子基團(tuán)以優(yōu)化活性。在電噴霧正離子模式下E-苯氧菌胺、嘧菌酯、醚菌酯、啶氧菌酯、吡唑醚菌酯和肟菌酯的一級(jí)質(zhì)譜均可獲得穩(wěn)定的[M+H]+峰。通過手動(dòng)調(diào)節(jié)碰撞能量,獲得6種化合物的子離子全掃描質(zhì)譜圖(見圖1)。由于甲氧基丙烯酸酯類化合物中活性位點(diǎn)較多,其二級(jí)裂解機(jī)理較為復(fù)雜,目前未見關(guān)于這6種甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑的裂解路徑及碎片結(jié)構(gòu)的報(bào)道,且現(xiàn)有的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法給出的選擇監(jiān)控離子也各不相同。本研究采用計(jì)算機(jī)輔助譜圖解析技術(shù)軟件(ACD/MS Fragmenter)進(jìn)行分析,在軟件的參數(shù)選項(xiàng)中選擇“正模式大氣壓電離(APCI, ESI電離模式)”以及常見反應(yīng)中的“芳烴鍵斷裂反應(yīng)”“成環(huán)反應(yīng)”“共振反應(yīng)”“氫原子轉(zhuǎn)移反應(yīng)”選項(xiàng),模擬解析得到6種化合物可能獲得的碎片離子,并通過與實(shí)際二級(jí)質(zhì)譜中優(yōu)化獲得的子離子進(jìn)行比較,選擇更為合理的監(jiān)控離子。6種化合物可能的碎片離子結(jié)構(gòu)及裂解路徑見圖1。對(duì)于E-苯氧菌胺,其中一個(gè)穩(wěn)定的碎片離子通過丟失自由基和中性小分子[M+H-CH3-C6H4]+獲得,另一個(gè)碎片離子則通過斷裂一側(cè)支鏈獲得。對(duì)于嘧菌酯(m/z404.1>372.0>329.1)、啶氧菌酯(m/z368.1>205.1>145.1)以及吡唑醚菌酯(m/z388.1>194.1>163.1),當(dāng)施加一定碰撞能量后,首先生成一個(gè)主要的穩(wěn)定碎片離子,隨著碰撞能量的增強(qiáng),該碎片離子繼續(xù)裂解成另一個(gè)穩(wěn)定的碎片離子。對(duì)于醚菌酯,存在由同一個(gè)活性中心點(diǎn)附近,通過丟失不同的碎片,生成相對(duì)分子質(zhì)量非常接近的碎片離子,比如對(duì)于m/z314.1>267.1來說,可能是[M+H-CH4-HNO]+或[M+H-CH3-CH4O]+,因此在二級(jí)質(zhì)譜圖上也可以看到m/z為267.1和267.3的兩個(gè)碎片離子。肟菌酯的裂解途徑則是通過一側(cè)與氮原子相連的α碳處發(fā)生斷裂(m/z409.1>145.0),一側(cè)由活性中心點(diǎn)氮原子處直接斷裂(m/z409.1>186.1)。通過計(jì)算機(jī)輔助譜圖解析軟件,可以更好地分析碎片離子的合理性。

2.3色譜條件的優(yōu)化

采用正離子模式進(jìn)行質(zhì)譜檢測(cè)時(shí),通常使用具有一定酸度的流動(dòng)相進(jìn)行分離,使被分析物更容易質(zhì)子化而帶正電荷,從而提高檢測(cè)的靈敏度。本研究以含0.1%(v/v)甲酸的10 mmol/L乙酸銨溶液和含0.1%(v/v)甲酸的乙腈溶液為流動(dòng)相,并對(duì)流動(dòng)相的比例和梯度洗脫程序進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明,采用1.3節(jié)所述的梯度洗脫程序時(shí)，6種甲氧基丙烯酸酯可得到較好的峰形和分離效果,目標(biāo)化合物附近無(wú)干擾峰。6種甲氧基丙烯酸酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液(5 μg/L)在MRM模式下的色譜圖見圖2。

圖 2 6種甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑混合標(biāo)準(zhǔn)溶液(5 μg/L)在MRM模式下的色譜圖Fig. 2 Chromatograms of the mixed standard solution (5 μg/L) of the six strobilurin fugicides in MRM mode

2.4前處理?xiàng)l件的優(yōu)化

2.4.1提取溶劑的選擇

本研究比較了針對(duì)農(nóng)藥殘留常用的提取溶劑乙腈和乙酸乙酯對(duì)水果基質(zhì)中目標(biāo)分析物的提取效率。采用添加法制備農(nóng)藥含量為0.1 mg/kg的加標(biāo)樣品,分別采用乙腈和乙酸乙酯提取。結(jié)果表明,采用乙腈作為提取溶劑時(shí),目標(biāo)化合物的回收率較采用乙酸乙酯提取時(shí)高,尤其對(duì)于香蕉基質(zhì)。因此本研究選擇乙腈作為提取溶劑。

2.4.2上樣體積和洗脫液體積的選擇

由于甲氧基丙烯酸酯類的分子結(jié)構(gòu)中含有具有N、O、F原子的吸電子基團(tuán),化合物極性較強(qiáng),根據(jù)文獻(xiàn)[6,7],本方法選擇氨基固相萃取柱對(duì)6種化合物進(jìn)行凈化和富集,并采用乙酸乙酯-甲苯(7∶3, v/v)溶液進(jìn)行洗脫。本方法對(duì)上樣體積和洗脫液體積進(jìn)行了優(yōu)化。

為了確定固相萃取凈化過程中的上樣體積,將質(zhì)量為100 ng的標(biāo)準(zhǔn)品分別溶解于1、2.5和5 mL的乙腈中,然后按1.2.2節(jié)的操作進(jìn)行活化和上樣,并對(duì)上樣后的流出液進(jìn)行收集和分析。結(jié)果表明,當(dāng)上樣體積為1 mL時(shí),收集的流出液中未測(cè)得任何目標(biāo)化合物,說明該體積條件下,目標(biāo)化合物均富集在固相萃取柱上;當(dāng)上樣體積為2.5 mL時(shí),流出液中有40%的目標(biāo)化合物;當(dāng)上樣體積為5 mL時(shí),流出液中有55%的目標(biāo)化合物。因此,本方法將上樣體積設(shè)為1 mL以下，以保證目標(biāo)化合物不會(huì)流出。

圖 3 洗脫液體積對(duì)6種甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑回收率的影響Fig. 3 Effects of elution volumes on the recoveries of the six strobilurin fugicides

以100 μg/L混合標(biāo)準(zhǔn)工作液為研究對(duì)象，按1.2.2節(jié)所述進(jìn)行凈化，洗脫液體積設(shè)為10 mL，每2 mL收集一次并分析(見圖3)。結(jié)果表明,6種甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑在氨基柱上的洗脫行為基本一致,所有化合物在6 mL洗脫體積下均已被洗脫完全,因此本方法將洗脫液體積設(shè)為6 mL。

圖 4 水浴溫度對(duì)香蕉中6種甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑回收率的影響Fig. 4 Effects of bath temperatures on the recoveries of the six strobilurin fugicides in banana

2.4.3水浴溫度的選擇

在提取和凈化步驟中,均需要用到水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)裝置對(duì)目標(biāo)化合物進(jìn)行濃縮,本研究比較了水浴溫度為30 ℃和50 ℃時(shí),空白香蕉基質(zhì)中目標(biāo)化合物的回收率(見圖4)?？梢钥闯?水浴溫度為30 ℃時(shí),6種目標(biāo)化合物的回收率均高于50 ℃下的回收率。因此本方法確定水浴溫度為30 ℃。

由于凈化過程中使用的洗脫液為乙酸乙酯-甲苯(7∶3, v/v)溶液,而最后定容溶劑為乙腈-水(1∶1, v/v)溶液,兩種溶劑的互溶性較差。6種甲氧基丙烯酸酯類化合物的結(jié)構(gòu)中均含有苯環(huán),更易溶于乙酸乙酯-甲苯(7∶3, v/v)溶液,因此,對(duì)洗脫液進(jìn)行濃縮時(shí)必須濃縮至全干后再用乙腈-水(1∶1, v/v)溶液復(fù)溶,否則會(huì)導(dǎo)致回收率顯著降低。

2.5標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的穩(wěn)定性考察

用乙腈配制質(zhì)量濃度為100 μg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液,分為6份,分別裝入2 mL進(jìn)樣瓶中,密封,置于4 ℃冰箱內(nèi)保存,每隔7 d分析其中的一份，并用當(dāng)日新配制的100 μg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行校準(zhǔn)(見表2)。結(jié)果表明,除E-苯氧菌胺、嘧菌酯外,其余4種化合物在15 d時(shí)均發(fā)生了不同程度的降解。因此,對(duì)于100 μg/L的甲氧基丙烯酸酯類混合標(biāo)準(zhǔn)工作液,4 ℃冷藏條件下的保存時(shí)間不應(yīng)超過7 d。

表 2 甲氧基丙烯酸酯類混合標(biāo)準(zhǔn)工作液(100 μg/L) 的穩(wěn)定性考察Table 2 Stability of strobilurin mixed standard working solutions (100 μg/L)

表 4 6種甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑的線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限Table 4 Linear ranges, linear equations, correlation coefficients (r2), limits of detection (LODs) and limits of quantification (LOQs) of the six strobilurin fungicides

Y: peak area;X: mass concentration, μg/L.

2.6方法學(xué)驗(yàn)證

2.6.1基質(zhì)效應(yīng)

采用液相色譜-質(zhì)譜進(jìn)行檢測(cè)時(shí),由于基質(zhì)效應(yīng)(ME)的影響,可導(dǎo)致目標(biāo)化合物發(fā)生離子增強(qiáng)或抑制作用[9]。本實(shí)驗(yàn)通過分析添加6種化合物的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液(10 μg/L)的不同空白基質(zhì)樣品溶液,考察了不同基質(zhì)中的基質(zhì)效應(yīng),通過3次平行進(jìn)樣,對(duì)其峰面積進(jìn)行歸一化處理,最終得到ME=(AMatrix/AS)×100%,其中AMatrix和AS分別為基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液和溶劑標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積。結(jié)果表明,6種化合物在橙子、香蕉、蘋果、菠蘿4種水果基質(zhì)中的基質(zhì)效應(yīng)為94.9%～111.4%(見表3)，說明基質(zhì)效應(yīng)作用不顯著，可忽略。

表 3 6種甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑在不同水果中的基質(zhì)效應(yīng)Table 3 Matrix effects of the six strobilurin fungicides in different fruits

2.6.2線性關(guān)系、檢出限和定量限

配制質(zhì)量濃度為5～100 μg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液(吡唑醚菌酯為1～20 μg/L),以定量離子的峰面積為縱坐標(biāo)(Y)、相應(yīng)的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(X, μg/L)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。在各自的線性范圍內(nèi),定量離子的峰面積和樣品質(zhì)量濃度間的線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)(r2)>0.999(見表4)。采用在空白基質(zhì)中添加目標(biāo)化合物的方法,以定性離子色譜峰的信噪比(S/N)=3計(jì)算方法的檢出限,以S/N=10計(jì)算方法的定量限。各類殺菌劑的線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限見表4。

2.6.3回收率和日內(nèi)精密度

分別稱取5.0 g橙子、香蕉、蘋果、菠蘿，將其作為基質(zhì)樣品,分別添加100.0、50.0和10.0 μg/kg的標(biāo)準(zhǔn)品,其中吡唑醚菌酯的添加水平為20.0、10.0和2.0 μg/kg,進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn),每個(gè)加標(biāo)水平平行測(cè)定6次。6種目標(biāo)化合物的加標(biāo)回收率為60.4%～120%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.15%～15.1%(見表5),滿足國(guó)家質(zhì)檢總局食品化妝品標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)發(fā)布的《食品化妝品專業(yè)化學(xué)分析方法驗(yàn)證程序》[8]中關(guān)于方法回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差的要求。

2.7實(shí)際樣品分析

采用本方法對(duì)市場(chǎng)上購(gòu)買的不同批次的橙子、蘋果、香蕉和菠蘿進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果表明，只在其中1個(gè)香蕉樣本中檢測(cè)出了189 μg/kg的醚菌酯,其他化合物的含量均在檢出限以下。

表 5 6種甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑在不同水果基質(zhì)中的加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=6)Table 5 Recoveries and RSDs of the six strobilurins fungicides spiked in different fruits (n=6)

3 結(jié)論

本方法通過計(jì)算機(jī)輔助譜圖解析軟件確定合理的監(jiān)測(cè)離子,建立了超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定水果中6種甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑的方法。樣品經(jīng)乙腈提取,氨基固相萃取柱凈化,UPLC-MS/MS電噴霧正離子多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)模式檢測(cè),外標(biāo)法定量。方法操作簡(jiǎn)單,測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠,重復(fù)性好。

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Determination of strobilurin fungicides in fruits and their mass fragmentation routes by ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry

ZHOU Yao*, YANG Huiqin, SHI Yiyin, CHEN Jiaxian, ZHU Jian, DENG Xiaojun, GUO Dehua

(Shanghai Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Shanghai 200135, China)

A method was developed for the simultaneous determination of six strobilurin fungicide (E-metominostrobin, azoxystrobin, kresoxim-methyl, picoxystrobin, pyraclostrobin and trifloxystrobin) residues in orange, banana, apple and pineapple samples by ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS). The fragmentation routes of all the compounds were explained by the aid of a fragment predicting software ACD Lab/MS Fragmenter. The samples were extracted by acetonitrile, then cleaned up by amino solid phase extraction cartridges (SupelClean LC-NH2). The extracts were separated on a ACQUITY UPLC BEH C18column (50 mm×2.1 mm, 1.7 μm) with gradient elution. Acetonitrile containing 0.1% (v/v) formic acid and 10 mmol/L ammonium acetate containing 0.1% (v/v) formic acid were used as mobile phases. The samples were detected by electrospray ionization (ESI)-MS/MS in positive ion and multiple reaction monitoring (MRM) mode, quantified by external standard method. Good linearities were obtained in the range of 5-100 μg/L (for pyraclostrobin, 1-20 μg/L) with correlation coefficients (r2) greater than 0.999. The recoveries ranged from 60.4% to 120% with the relative standard deviations between 2.15% and 15.1% (n=6). The developed method can meet the inspection of the six strobilurin residues in the orange, banana, apple and pineapple samples.

ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS); solid phase extraction (SPE); fragment predicting software; strobilurin fungicides; fruits

10.3724/SP.J.1123.2017.05009

2017-05-09

.Tel:(021)38620521,E-mail:zhouyao@shciq.gov.cn.

上海市科委科研項(xiàng)目(15142201700).

O658

A

1000-8713(2017)09-0970-10

Foundation item: Shanghai Science and Technology Committee Fund (No. 15142201700).

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