趙元壽，蘇小紅，杜喜梅，張生堂，高國強

(蘭州工業(yè)研究院，蘭州 730050)

西蘭花葉保健茶蘿卜硫素測定方法與含量分析

趙元壽，蘇小紅，杜喜梅，張生堂，高國強

(蘭州工業(yè)研究院，蘭州 730050)

用高效液相色譜法(HPLC)測定西蘭花葉保健茶中的蘿卜硫素含量，并通過測定發(fā)現(xiàn)，西蘭花葉保健茶中含蘿卜硫素20.848 mg/kg，達到了直接進行90 ℃干燥處理的西蘭花中蘿卜硫素含量的25%。

西蘭花葉保健茶；蘿卜硫素；高效液相色譜法

蘿卜硫素對乳腺癌、肝癌、肺癌、胃癌有明顯的阻斷作用，是自然界存在的誘導(dǎo)Ⅱ型解毒酶能力最強的誘導(dǎo)物[1-3]。西蘭花富含蘿卜硫素，其葉中也含有較大量蘿卜硫素[4-6]，在生產(chǎn)中往往廢棄，而將其制成茶有效利用其功效成分蘿卜硫素，大量減少廢棄物，既可節(jié)約資源，降低成本，保護環(huán)境，同時能更好地開發(fā)利用綠色蔬菜西蘭花。

作為西蘭花葉保健茶的主要保健因子，蘿卜硫素的測定方法較多，如熒光誘導(dǎo)毛細管電泳法、生物傳感法、定量酶解法、化學(xué)測定法、色譜法等[7]。目前檢測蘿卜硫素及其前體化合物葡萄糖萊菔子苷的色譜方法主要有氣相色譜(GC)法、高效液相色譜(HPLC)法和質(zhì)譜聯(lián)用法。由于HPLC法具有高分離度、高速度、高靈敏度的優(yōu)勢，被認定為測量蘿卜硫素的有效方法。H liang等[8]利用合適的梯度洗脫模式，研究了高效液相色譜法測定花椰菜和甘藍中的蘿卜硫素。顧穎娟等[9]研究高效液相色譜法測定西蘭花中蘿卜硫素。而蘿卜硫素本身性質(zhì)不是很穩(wěn)定[10]，擬采用HPLC法進行研究，旨在確定一種快速準確測定西蘭花葉保健茶蘿卜硫素含量的方法，為生產(chǎn)加工的質(zhì)量控制和綜合開發(fā)提供依據(jù)。

1 材料方法

1.1 材料、試劑與儀器

材料：在隴南梅園茶廠加工的西蘭花葉茶。試劑：蘿卜硫素標準品(CAS號4478-93-7，純度95.0%)，Sigma公司；甲醇(色譜純)，上海國藥集團；其余化學(xué)試劑，上海國藥集團；純凈水，研究中心自制。

儀器：液相色譜儀(Agilent 1260+UV)，美國安捷倫公司；超聲波清洗(SK8200H)，上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司；電子天平(AB204-S/FACT)，上海利陽儀器有限公司；電熱恒溫水浴鍋(HWS-12)，上海一恒；高速萬能粉碎機，杭州匯爾儀器有限公司；真空干燥箱(DZF-6020)，上海精宏儀器有限公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 標準溶液配制 取5mg蘿卜硫素標準品(精確至0.0002g)，移至10mL容量瓶，10%乙腈準確定容，得濃度為0.5mg/mL的蘿卜硫素標準品溶液。再分別配制濃度為0.00、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50mg/ml的蘿卜硫素標準液，待用。

1.2.2 蘿卜硫素提取 取樣本1g(精確至0.0002g)，研成粉末，用5mL正己烷脫脂3次，揮干，加入3mL去離子水，混勻后35℃水浴2h，加入1g氯化鈉，用等體積的乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液并35℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至黃油狀液體(或蒸干)，用10%乙腈溶解殘留液，移至10mL容量瓶，準確定容，過0.45μm濾膜，待用。

1.2.3 色譜條件 采用反相C18色譜柱分析，乙腈—水梯度洗脫，流速0.6mL/min，檢測波長254nm。乙腈—水梯度洗脫時，采用濃度為10%、60%、100%，洗脫時間為0、25、30min，溶劑為10%乙腈。

1.2.4 含量計算 蘿卜硫素含量(mg/g)=0.5(mg/mL)×95%×A樣×樣品體積(mL)/[A標×樣品質(zhì)量(g)]，式中：A樣為樣品峰面積、A標為標樣峰面積。

2 結(jié)果與分析

如圖1～3，采用1.2.3色譜條件，蘿卜硫素出峰時間為16.7min。蘿卜硫素標準品分離效果較為理想，對西蘭花葉保健茶中的蘿卜硫素和其他硫苷產(chǎn)物分離能有效分離，可用于其蘿卜硫素含量測定。以采后直接進行90℃干燥處理[4]的西蘭花為對照，按1.2.2中處理后上機測定其蘿卜硫素的含量，采用1.2.4方法計算，結(jié)果表明，西蘭花葉保健茶中含蘿卜硫素20.848mg/kg，達到了花的25%(附表)。

圖1 蘿卜硫素標準品液相色譜圖

圖2 西蘭花葉保健茶蘿卜硫素樣品液相色譜圖

圖3 西蘭花(90℃干燥)蘿卜硫素樣品液相色譜圖

附表 西蘭花葉保健茶蘿卜硫素含量

3 討論

采用HPLC法測定西蘭花葉保健茶中的蘿卜硫素含量，確定其具有較好的分離效果，可用于蘿卜硫素含量測定。但也存在色譜圖雜峰多、基線過高等缺陷，可能是因為提取液中色素、蛋白等物質(zhì)中存在其他硫苷水解物的干擾，預(yù)處理、洗脫方式等還有待于進一步的優(yōu)化篩選。通過測定發(fā)現(xiàn)，西蘭花葉保健茶中含蘿卜硫素20.848 mg/kg，達到了直接進行90℃干燥處理的西蘭花蘿卜硫素含量的25%?？紤]到蘿卜硫素的不穩(wěn)定性，以及西蘭花葉保健茶加工環(huán)節(jié)多、時間長等因素，西蘭花葉保健茶較好地保留了西蘭花葉中的蘿卜硫素?！?/p>

[1]賴百塘.萊菔硫烷在腫瘤防治中的作用及其機制研究進展[J].中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2007，41(1)：68-72.

[2]王舒然，夏薇，吳坤.萊菔硫烷與腫瘤[J].疾病控制雜志，2004，8(5)：452-455.

[3]呂靜，淘文沂，程景才，等.十字花科蔬菜提取物抗腫瘤作用的研究[J].食品與生物技術(shù)學(xué)報，2007，26(4)：105-109.

[4]謝淑瓊，等.不同干燥方法對西蘭花中蘿卜硫素的影響[J].食品研究與開發(fā)，2013，34(13)：67-69.

[5]喬勇進，等.一種從花椰菜葉片中提取蘿卜硫素的方法[P].中國專利：102102113，2011-06-22.

[6]萬志祥，等.西蘭花下腳料提取物及其制備方法[P].中國專利：103169749，2013-06-26.

[7]羅容珍，杜懷明，張利，等.蘿 卜硫素制備及檢測技術(shù)研究進展[J].廣州化工，2012，12(23)：11-13.

[8]H Liang，et a1.Dtetermination of sulforaphane in brccoli and cabbage by high-performance liquid chromatography[J].Food Compositon and Analysis，2006(19)：473-476.

[9]顧穎娟，張亮，等，高效液相色譜法測定西蘭花中蘿卜硫素的測定[J].食品工業(yè)科技，2012(4)：81-82.

[10]王見冬，袁其朋，錢忠明.蘿卜硫素研究進展[J].食品與發(fā)酵工業(yè)，2003，29(2)：76-80.

(責任編輯 李婷婷)

Determination Method of Sulforaphane in Broccoli Leaf Health Tea

ZHAO Yuan-shou，SU Xiao-hong，DU Xi-mei，ZHANG Sheng-tang，GAO Guo-qiang
(Lanzhou Industrial Research Institute，Lanzhou 730050，China)

The content of sulforaphane in broccoli leaf health tea was determined by high performance liquid chromatography(HPLC).The results indicated that the content of sulforaphane in broccoli leaf health tea was 20.848 mg/kg， accounting for 25%of the content of sulforaphane in directly dried broccoli at 90℃.

broccoli leaf health tea；sulforaphane；HPLC

蘭州市科技計劃項目(項目編號：2016-3-7)。

趙元壽(1977— )，男，碩士，工程師，研究方向：農(nóng)產(chǎn)品貯藏與加工。

高國強(1966— )，男，學(xué)士，正高級工程師，研究方向：農(nóng)產(chǎn)品加工。