梁斯雅++吳平++彭莎++黎琦

摘 要：目的：研究鴨腳木蜂蜜花粉形態(tài)特征，并為鴨腳木蜂蜜的真假鑒別建立方法。方法：通過采摘鴨腳木成熟花粉、成熟的鴨腳木蜂蜜，采用顯微鏡和掃描電鏡對花粉形態(tài)進行觀察；結果：從鴨腳木原蜜中提取花粉粒與花藥中的花粉特征圖比，其特征基本一致、重復性高，即鴨腳木花粉極面觀為近圓形，赤道面觀為橢圓形，三溝萌發(fā)孔，表面有顆粒狀紋飾。結論：本研究為采用花粉檢驗法判定梧州地區(qū)鴨腳木蜂蜜的種類、判斷真?zhèn)魏图兌忍峁┝艘罁?/p>

關鍵詞：鴨腳木；花粉粒；形態(tài)；掃描電鏡；顯微檢驗

中圖分類號： S896.4 文獻標識碼：A DOI：10.11974/nyyjs.20170832014

前言

鴨腳木蜂蜜（Schefflera octophylla （Lour.） honey），屬于嶺南地區(qū)特有的蜂蜜品種。梧州是廣西出口蜂蜜的主要口岸，對蜂蜜實施檢驗始于1970年，其品種原蜜分類為春蜜、冬蜜，主要產地是梧州、蒼梧、桂平[1]。梧州行政區(qū)域范圍內廣泛分布有鴨腳木（Schefflera octophylla Harms），而且形成規(guī)模，保證了鴨腳木花蜜在梧州地區(qū)的產量與品質。由于梧州鴨腳木為野生植物，花期為每年11月—次年1月，其中最冷月（1月）平均11.9℃溫度，而梧州本地的中蜂適宜于山區(qū)、半山區(qū)生態(tài)環(huán)境飼養(yǎng)，在氣溫9℃時仍能安全采集，另外由于中蜂長期在本地進化，對本地各類蜜源植物具有獨特的辨別能力，所以鴨腳木花蜜特別適合本地中蜂采花釀造[2]。因為該花蜜在其它季節(jié)不能釀造，所釀造的蜂蜜多年來民間稱為“梧州冬蜜”。釀蜜季節(jié)獨特，是梧州冬季獨有的蜜種。

1 鴨腳木蜂蜜的發(fā)展與研究進展

目前，我國雖然發(fā)布有GB/T 23194-2008《蜂蜜中植物花粉的測定方法》、GH/T 18796-2012《蜂蜜》、GB/T 30359-2013《蜂花粉》等標準，但是其中并沒有關于鴨腳木花粉細胞形態(tài)、鴨腳木蜂蜜中花粉的形態(tài)特征及其檢測方法的介紹 [4-6]。因此，有必要對鴨腳木花粉形態(tài)及其檢測方法進行探索和研究。

2 鴨腳木花粉細胞形態(tài)的顯微鏡和掃描電鏡觀測

2.1 顯微鏡觀察的材料與方法

2.1.1 實驗材料

2014年、2015年，分別于梧州地區(qū)鴨腳木花集中成熟地區(qū)，在12月份盛花期采集成熟花藥作為觀察的材料。

2.1.2 實驗方法

按GB/T 30359-2013標準中單一品種蜂花粉定性鑒別方法進行?；ǚ蹚拇唐频某墒旎ㄋ幹嗅尫诺玫?。

2.1.3 計算方法

將采集的花粉分成3份，每份隨機取10?；ǚ圻M行大小的測量和統(tǒng)計，取其平均值和變異系數表示變化幅度。

2.1.4 觀察與分析

梧州地區(qū)采集的在顯微鏡下觀察到的花粉形態(tài)無明顯區(qū)別（如圖1所示），鴨腳木花粉為白色，花粉細胞呈近似球形，赤道面觀為橢圓形，平均直徑為 19.43um，變異系數為3.02%，極面觀為近圓形，平均直徑為21.40um，變異系數為3.17%，表面有顆粒狀。

2.2 掃描電鏡下觀察的材料與方法

2.2.1 材料與方法

實驗材料與4.1.1相同，將樣品先用鑷子將花藥取出后，放入到PE小管中，干燥48h后，收集管內自然散出的花粉作為掃描電鏡觀察的材料，為了保證其紋飾的真實性，表面未經任何試劑處理。將待觀察的樣品用導電膠布固定在載物臺上，使用TM3000臺式掃描電子顯微鏡進行真空圖像掃描，調節(jié)5kv，15kv不同的高壓狀態(tài)來觀察樣品，主要在×500、×2000、×10000倍數的視野下拍攝其花粉的形態(tài)、赤道面觀、極道面觀以及外壁紋飾等形態(tài)，并測量其極軸長（P），赤道軸長（E），計算花粉粒大小，以極軸長乘以赤道軸長（P×E）表示，計算極軸長和赤道軸長的比值（P/E），表示其形狀。P/E在0.4～0.8為扁圓形，P/E在1.0～2.0為橢圓形，P/E在0.8～1.0為長橢圓形[7]。觀察花粉的赤道面觀，極面觀形狀，萌發(fā)器官和外壁紋飾特點， 用專業(yè)術語來描述。

2.2.2 觀察與分析

研究中鴨腳木花粉形態(tài)上表現(xiàn)了遺傳的穩(wěn)定性，見圖2（a），主要表現(xiàn)為：

極軸長（P）平均長度為21.489um，赤道軸長（E）平均長度為18.851um，如圖2（a）中所示。由此可計算P/E平均比值為1.14，所以，根據上文所述，鴨腳木花粉應為橢圓形。

據研究表明花粉形態(tài)的演化主要反映在萌發(fā)器官和孢粉壁2個方面，而被子植物花粉萌發(fā)孔可大致分為2個基本的類型，具有單槽衍生和三溝衍生型[8]（王開發(fā)和王憲曾，1983）。結合圖2（b）的觀測結果，鴨腳木花粉的類型應為三溝衍生型。

從圖2（b）中觀察可知，鴨腳木花粉的三孔萌發(fā)溝并延伸達兩級，從圖2（c）中可觀察到表面為顆粒狀紋飾，較為明顯，且顆粒大小不一。

3 鴨腳木蜂蜜中花粉的形態(tài)特征觀察

3.1 實驗材料與方法

3.1.1 實驗材料準備

采集三個鴨腳木花集中成熟地區(qū)的蜂蜜，分成三個實驗樣品，根據GB/T 23194-2008《蜂蜜中植物花粉的測定方法》中的測定步驟進行花粉粒提取。

3.1.2 方法

將3個樣品攪拌均勻→置于不超過60℃的水浴中溫熱→樣品融化后攪勻冷卻至室溫→取蜜樣25g→加入約40℃的50mL蒸餾水→溶解和稀釋→倒入離心管中→離心10min后棄去4/5上清液→加入5mL乙酸浸泡2h→棄去上清液→加入乙酸酐和硫酸混合液（9：1）→放入80～90℃水浴加熱7min→離心10min，棄去上清液→再離心水洗3次→留下5mL的樣液進行制片→吸取1滴放在載玻片→蓋上蓋玻片→用濾紙吸干多余液體→放在蔡司顯微鏡下從低倍鏡到高倍鏡下觀察→用共聚焦顯微系統(tǒng)進行拍攝其形態(tài)。endprint

3.1.3 鴨腳木蜂蜜的花粉形態(tài)鑒定

對所采集的3個集中地區(qū)蜜樣分別編號為1～3，對其形態(tài)進行鏡檢和顯微鏡攝像。結果顯示（見圖3），這3個地區(qū)所采集的蜂蜜中的花粉形態(tài)單一，鏡檢下3個樣品都只發(fā)現(xiàn)形態(tài)一致的同一種花粉形態(tài)，極面觀為近圓形，表面有明顯的顆粒紋飾。

4 結論與分析

本文以梧州地區(qū)的鴨腳木花粉作為研究對象，對3個花期集中地區(qū)的花粉形態(tài)以及蜂蜜中的花粉形態(tài)進行提取和鑒別，發(fā)現(xiàn)了鴨腳木花粉的形態(tài)特征，電子顯微鏡下花粉的紋飾和輪廓，主要討論有以下幾點。

3個蜂蜜樣品中提取出的花粉圖譜與文中2.1.4自然采集，刺破花藥中獲取的花粉圖譜，在400倍數的顯微鏡下觀察，其形態(tài)、輪廓、包括表面有明顯顆粒紋飾等特征一致，并且3個樣品都具有重復性高的特點。依據其圖譜中形態(tài)特征，這些樣品提取出來的花粉圖譜與鴨腳木花粉是同一種花粉的形態(tài)，即為梧州地區(qū)鴨腳木花粉形態(tài)特征圖譜。

3個蜂蜜樣品中提取出的花粉圖譜具有重復性高的特點，從圖譜中鑒別可得知，3個樣品的形態(tài)、大小、輪廓、表面紋飾一致，且在顯微鏡觀察下未能提取和發(fā)現(xiàn)其他蜂蜜的蜂花粉。這與在梧州地區(qū)，被子植物門，雙子葉植物綱，五加科的鴨腳木是梧州地區(qū)（指嶺南一帶）冬季的主要蜜源之一[9]。同時，在文獻中亦記載了鴨腳木是梧州地區(qū)冬季原蜜的主要品種[1]。所以，3個蜂蜜樣品純度高、重復性好主要與采集在花蜜集中成熟區(qū)，冬季花種單一等原因密不可分，樣品的結果具有代表性好，重復性高的特點，保證了試驗結果的準確性。也為將來制定鴨腳木花粉檢測方法提供參考依據。

花粉檢驗法可以作為生產實踐中鑒定真?zhèn)蚊鄣目茖W有效方法[10]。天然蜂蜜的花粉粒濃度的確定，還需要做更多的實驗來確定。文中從鴨腳木蜂蜜中提取的花粉粒在圖譜中含量較少，與試樣消化適宜時間，消化液使用的劑量相關，還需做進一步的實驗數據確定最適宜的消化條件，得到更好的天然蜂蜜中花粉粒濃度的確定。

本研究為采用花粉檢驗法判定梧州地區(qū)鴨腳木蜂蜜的種類、判斷真?zhèn)魏图兌忍峁┝藢嶒炓罁瑢Ρ鎰e鴨腳木蜜源的真?zhèn)?，增加經濟效益，產品質量提升具有很大的意義。

參考文獻

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[2]梧州市長洲區(qū)地方志編纂委員會編.梧州市郊區(qū)志[M].南寧：廣西人民出版社，2008年版：190.

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[4]中華人民共和國國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局.中國國家標準化管理委員會.GB/T 23194-2008 蜂蜜中植物花粉的測定方法[S].北京：中國標準出版社，2008：1-9.

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[9]張德輝.鴨腳木的花粉是什么顏色[J].中國蜂業(yè)，2016（1）：42.

[10]史琦云，贠建民.蜂蜜品質的花粉檢驗法研究.中國養(yǎng)蜂[J]，2005（2）：9-10.

作者簡介：梁斯雅（1985-），廣西梧州人，主要從事進出口食品檢驗與食品安全監(jiān)督管理工作，研究方向為食品安全管理。endprint