荊 鳴 朱春璐 袁子民 李學(xué)濤 林彥馨 馬雨晨 孔 亮

遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧 大連 116600

人參皂苷Rg3聚合物膠束的工藝優(yōu)化研究

荊 鳴 朱春璐 袁子民*李學(xué)濤 林彥馨 馬雨晨 孔 亮

遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧 大連 116600

目的：對(duì)人參皂苷Rg3聚合物膠束的制備工藝進(jìn)行優(yōu)化。方法: 采用薄膜水化法，以DSPE-PEG2000為膠束的載體材料，通過正交試驗(yàn)及包封率的測(cè)定，對(duì)人參皂苷Rg3與DSPE-PEG2000的質(zhì)量比、水化時(shí)間、水化溫度及水化體積的四個(gè)因素進(jìn)行考察優(yōu)化。結(jié)果：藥物與載體的比為1∶10，水化體積為5mL，水化溫度50℃，水化時(shí)間為20min，平均包封率為77.9%。結(jié)論：該工藝重復(fù)性良好，可用于人參皂苷Rg3聚合物膠束的制備。

人參皂苷Rg3；薄膜水化法；聚合物膠束

人參含有40余種人參皂苷類成分，其中人參皂苷Rg3(20(R)-人參皂苷Rg3)是人參中具有抗腫瘤作用的活性成分之一[1]，對(duì)肺癌、胃癌、肝癌、腦膠質(zhì)瘤等腫瘤細(xì)胞具有較好的抑制效果[2]，其對(duì)大鼠C6膠質(zhì)瘤腫瘤干細(xì)胞的增殖有顯著影響，可能是人參皂苷Rg3 抗膠質(zhì)瘤的作用機(jī)理之一[3]。目前，人參皂苷Rg3已開發(fā)成參一膠囊，但Rg3油水分配數(shù)較大，口服生物利用度較低，為提高其體內(nèi)生物利用度及靶向性，目前采用固體分散技術(shù)、脂質(zhì)體制備技術(shù)的報(bào)道較多[4-6]，筆者采用聚合物膠束制備技術(shù)，以二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000(DSPE-PEG2000)為膠束載體材料，將其制成人參皂苷Rg3聚合物膠束，旨在提高其體內(nèi)生物利用度及抗腦膠質(zhì)瘤作用的靶向性，為人參皂苷Rg3制劑的深入研究與開發(fā)奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠)；Agilent 1100 高效液相色譜儀；HC-2062 高速離心機(jī)(安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司)。

1.2 材料 20(R)-人參皂苷Rg3原料藥(自制，含量>90%)；20(R)-人參皂苷Rg3對(duì)照品(批號(hào):YAO417YA14，上海源葉生物科技有限公司，含量>98%)；DSPE-PEG2000(批號(hào)：20150922，上海艾韋特醫(yī)藥科技有限公司)；乙腈、甲醇為色譜純，水為娃哈哈純凈水，其余均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 人參皂苷Rg3原料藥聚合物膠束的制備 分別取人參皂苷Rg3原料藥及二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000(DSPE-PEG2000)，精密稱定，共置燒瓶中，加甲醇20 mL使其溶解，搖勻，40℃旋蒸除去甲醇，于燒瓶?jī)?nèi)形成一層薄膜，加入適量的pH值為7.4的PBS緩沖液，在一定溫度的水浴中水化一定時(shí)間，冷卻至室溫，經(jīng)0.2μm的聚碳酸酯膜濾過，即得人參皂苷Rg3原料藥聚合物膠束[7-8]。同法制備不加人參皂苷Rg3原料藥的空白聚合物膠束溶液。

2.2 包封率的測(cè)定

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil TMC18(250mm×4.6mm，5μm)；流動(dòng)相：乙腈-水(50∶50)；流速1.0mL/min；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：203nm。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 取人參皂苷Rg3對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成0.75mg/mL的對(duì)照品溶液，即得。

2.2.3 線性關(guān)系考察 分別精密量取“2.2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液0.1、0.25、0.5、1.0、1.5、2.5mL于10mL量瓶中，分別加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取10μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積。以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=3.3802X+0.9931，r=0.9996。結(jié)果人參皂苷Rg3濃度在7.5～187.5μg·mL-1范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.2.4 供試品溶液的制備及包封率的測(cè)定 精密量取人參皂苷Rg3原料藥聚合物膠束0.5mL置10mL量瓶中，加入適量甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，過0.45μm微孔濾膜，測(cè)定膠束中總的藥物量(W1)，并同法制備空白膠束對(duì)照液。另精密量取人參皂苷Rg3原料藥聚合物膠束2.0mL于5mL離心管中，離心(5000r/min)5min，精密量取上清液0.5mL置10mL量瓶中，按上述載藥膠束供試品溶液的制備方法，同法測(cè)定離心后膠束中包封的藥物量(W2)，計(jì)算包封率(EE):EE%=W2/W1×100%[8]。

2.2.5 空白干擾試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液、載藥膠束供試品溶液、空白膠束對(duì)照液各10 μL，按“2.2.1”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，結(jié)果空白膠束對(duì)本品含量測(cè)定無(wú)干擾。色圖譜見圖1。

2.2.6 精密度試驗(yàn) 分別精密吸取同一供試品溶液10μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，計(jì)算RSD為2.02%，表明精密度良好。

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一載藥膠束樣品，按“2.2.4”項(xiàng)下的載藥膠束供試品溶液的制備方法，分別制備6份，依法測(cè)定含量。結(jié)果膠束中人參皂苷Rg3的平均含量為0.934mg/mL，RSD為2.36%，表明重復(fù)性良好。

2.2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、10 h進(jìn)樣10μL，記錄峰面積，結(jié)果RSD為1.88%，表明人參皂苷Rg3在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.9 回收率試驗(yàn) 分別精密量取6份已知含量的載藥膠束0.5mL(0.934mg·mL-1)，分別置10mL容量瓶中，各精密加入0.6mL人參皂苷Rg3對(duì)照品溶液(0.75mg/mL)，其余按膠束供試品溶液制備方法及上述色譜條件依法測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果平均加樣回收率為98.2%，RSD為1.36%，符合規(guī)定。

2.3 載藥聚合物膠束處方及工藝優(yōu)化 經(jīng)單因素考察，本實(shí)驗(yàn)以包封率為指標(biāo)，選取人參皂苷Rg3與DSPE-PEG2000的質(zhì)量比(A)、水化體積(B)、水化溫度(C)、水化時(shí)間(D)作為考察因素，因素水平見表1；實(shí)驗(yàn)中人參皂苷Rg3量為5 mg，正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果見表2，方差分析結(jié)果見表3。

表1 因素水平表

表2 L9(34)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果 (n=3)

表3 方差分析表(F0.05(2,2)=19.00)

由表2、表3可知，各因素的影響順序?yàn)镃>D>B>A，其中C、D因素對(duì)工藝的影響具有顯著性，確定的最佳工藝條件為A3B2C2D1，即人參皂苷Rg3與DSPE-PEG2000的質(zhì)量比為1∶10，水化體積為5mL，水化溫度為50℃，水化時(shí)間為20min。

2.4 制備工藝的驗(yàn)證 按上述的最佳工藝條件，精密稱取人參皂苷Rg3原料藥 5mg，制備三批載藥聚合物膠束，并計(jì)算包封率，結(jié)果三批載藥膠束的包封率分別為76.4%、78%、79.3%，平均包封率為77.9%，表明優(yōu)化的處方及制備工藝合理、可行、重復(fù)性好，且包封率在75%以上，因此，本實(shí)驗(yàn)所確定的薄膜水化法的工藝條件，可用于人參皂苷Rg3聚合物膠束的制備。

3 討論

3.1 介質(zhì)pH值的選擇 實(shí)驗(yàn)中曾使用pH值為6.8PBS緩沖液作為水化介質(zhì)，該介質(zhì)與pH值為7.4PBS緩沖液介質(zhì)相比，對(duì)包封率影響不大，但含量測(cè)定時(shí)在203nm波長(zhǎng)下基線波動(dòng)較大，色譜圖峰形不佳，故選擇pH值為7.4PBS緩沖液作為本實(shí)驗(yàn)的水化介質(zhì)。

3.2 包封率測(cè)定方法的選擇 由于人參皂苷Rg3在pH值為7.4PBS緩沖液中溶解度較低，因此，本實(shí)驗(yàn)采用高速離心法，將未包封的藥物離心除去，測(cè)定包封率，方法快速、重復(fù)性好。

[1]薛麗莉，周海彤，李龍華，等.酶轉(zhuǎn)化人參皂苷中間產(chǎn)品Rg3皂苷的分析[J].大連輕工業(yè)學(xué)報(bào),2007,26(1):1-4.

[2]譚世強(qiáng)，許永華，王麗芝.人參皂苷Rg3抗腫瘤作用的研究新進(jìn)展[J].人參研究,2016(3):46-48.

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Preparation of Gensenoside Rg3 Nano Polymeric Micelles

JING Ming ZHU Chunlu YUAN Zimin*LI Xuetao LIN Yanxin MA Yuchen KONG liang

Liaoning University of TCM,Dalian 116600,China

Objective To optimize the preparation technology of Gensenoside Rg3 Nano Polymeric Micelles. Methods With poly(ethylene glycol-2000)-grafted distearoy lphosphosphatidylethanolamine(DSPE-PEG2000) as the carrier materials, thin film hydration method was used to prepare ginsenoside Rg3 Nano Polymeric Micelles;through orthogonal design and entrapment efficiency of ginsenoside Rg3 determination, it was adopted to optimize four factors of the mass ration ginsenoside Rg3 and DSPE-PEG2000, hydration time,hydration temperature and hydration volume.Results the mass ration ginsenoside Rg3 and DSPE-PEG2000 of 1∶10,hydration volume of 5 mL,hydration temperature of 50℃,hydration time of 20min,entrapment efficiency of 77.9% on average. Conclusion The repeatability of preparation established in this optimization method is good, and it could be used for the preparation of ginsenoside Rg3 Nano Polymeric Micelles .

Ginsenoside Rg3;Thin Film Hydration Method;Nano Polymeric Micelles

遼寧中醫(yī)藥大學(xué)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(201610162036)。

荊鳴(1996-)，女，漢族，本科在讀，研究方向?yàn)樗幬镄驴萍?。E-mail：1761541292@qq.com

袁子民(1975-)，男，漢族，副教授，研究方向?yàn)橹兴幮录夹g(shù)與新劑型。E-mail:yuanzmin@163.com

R283.6

A

1007-8517(2017)15-0021-03

2017-05-23 編輯：程鵬飛)