盧沐，付文博，宋亞芹，劉洋，懷施濤，呂作利，杜雅彥，魏育濤 *

（1石河子大學(xué)第一附屬醫(yī)院心胸外二科，新疆 石河子 832002；2新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院心內(nèi)科，新疆 石河子 830001；3山東濟(jì)寧市第一人民醫(yī)院營(yíng)養(yǎng)科，山東 濟(jì)寧 272111；4石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院，新疆 石河子 832002）

miR-30a-3p對(duì)食管鱗癌ECA-109細(xì)胞侵襲和增殖能力的影響及生物信息學(xué)分析

盧沐1，付文博2，宋亞芹3，劉洋4，懷施濤4，呂作利4，杜雅彥4，魏育濤 *

（1石河子大學(xué)第一附屬醫(yī)院心胸外二科，新疆 石河子 832002；2新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院心內(nèi)科，新疆 石河子 830001；3山東濟(jì)寧市第一人民醫(yī)院營(yíng)養(yǎng)科，山東 濟(jì)寧 272111；4石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院，新疆 石河子 832002）

為探討miR-30a-3p對(duì)食管鱗癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及機(jī)制，miR-30a-3p轉(zhuǎn)染ECA-109細(xì)胞后，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)各組細(xì)胞miR-30a-3p表達(dá)水平，Transwell小室檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力，CCK-8檢測(cè)細(xì)胞增殖能力，通過(guò)生物信息學(xué)預(yù)測(cè)miR-30a-3p的靶基因，分析靶基因集合的基因功能及通路富集。結(jié)果顯示，miR-30a-3p抑制ECA-109細(xì)胞侵襲能力（P＜0.05），但對(duì)增殖能力的影響無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。利用系統(tǒng)的生物信息學(xué)預(yù)測(cè)得到與ESCC相關(guān)的靶基因77個(gè)，其中在食管癌中上調(diào)的差異基因42個(gè)，下調(diào)的差異基因35個(gè)。miR-30a-3p的靶基因多集中于遷移、黏附連接、外泌體及蛋白代謝等過(guò)程；靶基因顯著富集于Ras信號(hào)通路。由此可知：miR-30a-3p可抑制ESCC細(xì)胞的侵襲能力，分析得出的參與侵襲遷移及其他功能的靶基因?yàn)檫M(jìn)一步研究提供了方向。

食管癌；miR-30a-3p；侵襲；增殖；生物信息學(xué)

食管癌（Esophageal cancer，EC）主要分為食管鱗狀細(xì)胞癌（EsophagealSquamousCellCarcinoma，ESCC）和食管腺癌（Esophagealadenocarcinoma，EAC）。2012年全球癌癥統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，ESCC在許多國(guó)家發(fā)生率正在持續(xù)升高并成為一個(gè)嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題[1]。中國(guó)ESCC發(fā)生率較高，尤其是哈薩克族人群的ESCC發(fā)生率高于國(guó)內(nèi)平均水平，這可能是民族行為習(xí)慣、環(huán)境以及遺傳等因素導(dǎo)致的[2-3]，哈薩克族人群ESCC發(fā)生發(fā)展的機(jī)制對(duì)我們提高ESCC的認(rèn)識(shí)具有重要意義。

微小RNA（microRNA，miRNA，miR）與細(xì)胞的分化、凋亡、增殖、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[4]，可能在促癌及抑癌方面具有重要作用[5]。近年關(guān)于miRNA和EC的數(shù)據(jù)顯示，miRNA作為生物標(biāo)志物在腫瘤的診斷和分型中可能表現(xiàn)出較高的特異性。

本課題組前期收集哈薩克族ESCC及癌旁正常組織，運(yùn)用Agilent miRNA表達(dá)譜芯片技術(shù)，分析了哈薩克族ESCC患者差異表達(dá)的miRNA，經(jīng)過(guò)前期生物信息學(xué)及預(yù)實(shí)驗(yàn)提示，miR-30a-3p可能參與ESCC細(xì)胞微環(huán)境調(diào)控。本實(shí)驗(yàn)以ESCC細(xì)胞系EC-109細(xì)胞為材料，miR-30a-3p為研究對(duì)象，應(yīng)用生物信息學(xué)、qRT-PCR、miRNA轉(zhuǎn)染及侵襲、增殖等細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)研究miR-30a-3p對(duì)食管鱗癌細(xì)胞侵襲和增殖能力的作用。綜合細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)、文獻(xiàn)支持及高通量ESCC組織芯片數(shù)據(jù)對(duì)miR-30a-3p的靶基因進(jìn)行預(yù)測(cè)，增強(qiáng)ESCC組織特異性，以期降低預(yù)測(cè)的假陽(yáng)性率；GO及KEGG分析為下一步研究提供方向。

1 材料與方法

1.1 主要試劑及細(xì)胞系

人ESCC細(xì)胞株ECA109購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)院細(xì)胞資源中心；RPMI1640細(xì)胞培養(yǎng)液及OPTI-MEM無(wú)血清培養(yǎng)液（美國(guó)Gibco公司）；四季青胎牛血清（浙江天杭生物科技有限公司）；化學(xué)修飾miRNA序列的has-miR-30a-3p模擬物agomir、抑制物antagomir及對(duì)照NC由上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司設(shè)計(jì)合成；LipofectAMINETM 2000轉(zhuǎn)染試劑（美國(guó)Invitrogen公司）；Transwell小室及 Matrigel基質(zhì)膠（美國(guó)Corning公司）；CCK-8試劑盒（上海七海復(fù)泰有限公司）；miRcute系列細(xì)胞miRNA提取及檢測(cè)試劑盒（北京天根生化科技有限公司）。

1.2 資料來(lái)源參考數(shù)據(jù)庫(kù)

miRbase、GEO、DAVID、miRWalk 2.0；采 用 軟 件BRB-array tools version 4.5.0 Stable Release。

1.3 細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染

ECA109使用含10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基，在37℃、CO2濃度5%的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

轉(zhuǎn)染前一天，將細(xì)胞密度3.0×105～8.0×105的細(xì)胞接種至6孔板中，待細(xì)胞融合度為60%～80%時(shí)，使用LipofectAMINETM 2000轉(zhuǎn)染試劑和OPTI-MEM無(wú)血清培養(yǎng)液按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。細(xì)胞轉(zhuǎn)染分為3組：miR-30a-3p agomir轉(zhuǎn)染增強(qiáng)組、miR-30a-3p antagomir轉(zhuǎn)染抑制組、NC轉(zhuǎn)染對(duì)照組。轉(zhuǎn)染時(shí)，各組片段100 mol/L，LipofectAMINETM 2000 5 μL。轉(zhuǎn)染24 h后，更換為完全培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)24 h，然后用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)miR-30a-3p的表達(dá)水平

按miRNA提取試劑盒操作說(shuō)明書(shū)提取轉(zhuǎn)染48h后的3組ESCC細(xì)胞miRNA，NanoDrop 2000分光光度儀檢測(cè)濃度（D260nm/D280nm為 1.8～2.0）。按miRcute反轉(zhuǎn)錄試劑盒和實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒說(shuō)明書(shū)對(duì)20pg～2μg總RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄和miR-30a-3p（miR-30a-3p特異引物5'-GCTTTCAGTCGGATGTTTGCAGC-3'；內(nèi)參照 U6 引物，5'-TGCGGGTGCTCGCTTCGGCAGC-3'）表達(dá)量的檢測(cè)。CFX96擴(kuò)增儀檢測(cè)miR-30a-3p表達(dá)水平的PCR反應(yīng)條件：95 ℃ 15 min；94 ℃ 20 s、60 ℃ 34s 40個(gè)循環(huán)；熔解曲線(xiàn)分析。以2-ΔΔCt計(jì)算各組中miR-30a-3p的相對(duì)表達(dá)水平。

1.5 Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力

在冰上將Transwell小室的上室使用0.7 mg/mL Matrigel基質(zhì)膠包埋，37℃培養(yǎng)箱中水化40 min～60min。收集轉(zhuǎn)染 48h后的 3組（Agomir組、Antagomir組、NC組）ECA109細(xì)胞，胰蛋白酶消化重懸細(xì)胞后計(jì)數(shù)，將細(xì)胞接種于包埋基質(zhì)膠的Transwell小室中，上層為含有3.0×104個(gè)細(xì)胞的無(wú)血清DMEM培養(yǎng)液300 μL，下層為含血清的完全培養(yǎng)液600 μL。培養(yǎng)48 h后用4%多聚甲醛固定，結(jié)晶紫染色，在光學(xué)顯微鏡下觀(guān)察穿膜細(xì)胞，使用ImageJ進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

1.6 CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力

收集轉(zhuǎn)染48 h后的3組（Agomir組、Antagomir組、NC組）ECA109細(xì)胞，胰蛋白酶消化重懸細(xì)胞后計(jì)數(shù)，以2×103個(gè)/孔的密度接種細(xì)胞至96孔板，培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)。第0、24、48 h時(shí)，在各孔中加入CCK-8試劑10 μL，培養(yǎng)箱中孵育3 h。酶標(biāo)儀測(cè)定波長(zhǎng)為450 nm處各孔的吸光度（OD值）。各個(gè)時(shí)間點(diǎn)設(shè)5個(gè)復(fù)孔，計(jì)算平均值。以時(shí)間為橫軸，OD值為縱軸，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)。

1.7 靶基因預(yù)測(cè)及生物信息學(xué)分析

在英文文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫(kù)（Pubmed、Web of Science、Springer Link）及中文文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫(kù)（中國(guó)知網(wǎng)、維普、萬(wàn)方）檢索經(jīng)過(guò)雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)驗(yàn)證的miR-30a-3p靶基因有關(guān)的文獻(xiàn)，英文使用關(guān)鍵詞miR-30a-3p and Luciferace，中文使用 miR-30a-3p和雙熒光素酶報(bào)告基因；并用miRWalk2.0對(duì)miR-30a-3p靶基因進(jìn)行預(yù)測(cè)，選擇miRwalk軟件包含的四個(gè)靶基因預(yù)測(cè)數(shù)據(jù)庫(kù)（miRWalk、RNA22、miRanda、Targetscan）進(jìn)行預(yù)測(cè)。取四個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)的交集，并合并文獻(xiàn)證實(shí)的miR-30a-3p靶基因作為所有可能的靶基因的集合。另一方面，使用BRB-array tools對(duì)芯片數(shù)據(jù)GSE20347進(jìn)行生物信息學(xué)分析，得到差異基因。取靶基因集合與GEO數(shù)據(jù)得到的差異基因取交集，得到具有潛在調(diào)控作用并與食管癌相關(guān)的可能靶基因。靶基因使用DAVID進(jìn)行GO及KEGG分析。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以±S表示。兩組間比較采用t檢驗(yàn)；多組間比較采用方差分析。BRB-array tools分析GEO數(shù)據(jù)經(jīng)過(guò)軟件歸一化后，采用Fold-change（表達(dá)差異倍數(shù)）以及t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)差異基因進(jìn)行篩選。以上統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)靶基因集合進(jìn)行GO和KEGG富集分析采用Fisher精確檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 轉(zhuǎn)染后miR-30a-3p的表達(dá)

分別在ECA-109細(xì)胞中轉(zhuǎn)染miR-30a-3p agomir、antagomir和NC后，使用 qRT-PCR檢測(cè)3組細(xì)胞miR-30a-3p的表達(dá)情況。與對(duì)照組NC相比，agomir轉(zhuǎn)染組 miR-30a-3p明顯上調(diào)（P＜0.01），antagomir轉(zhuǎn)染組miR-30a-3p 表達(dá)下調(diào)（P＜0.01）（圖 1）。

圖1 qRT-PCR檢測(cè)miR-30a-3p過(guò)表達(dá)或抑制后在ECA-109細(xì)胞中的表達(dá)水平Fig.1 qRT-PCR was used to detect the expression of miR-30a-3p after transfected miR-30a-3p agomir and antagomir

2.2 miR-30a-3p抑制ECA-109細(xì)胞侵襲

Transwell小室染色后，每組均在顯微鏡下挑選5個(gè)隨機(jī)視野計(jì)數(shù)（圖2）。

結(jié)果如圖2所示，轉(zhuǎn)染miR-30a-3p agomir的ECA-109細(xì)胞穿膜細(xì)胞數(shù)比轉(zhuǎn)染對(duì)照NC組少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；轉(zhuǎn)染 miR-30a-3p antagomir的ECA-109細(xì)胞穿膜細(xì)胞數(shù)比轉(zhuǎn)染對(duì)照NC組多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。說(shuō)明miR-30a-3p可以抑制ECA-109細(xì)胞的侵襲能力。

圖2 Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miR-30a-3p過(guò)表達(dá)或抑制后對(duì)ECA-109細(xì)胞侵襲能力的影響Fig.2 Invasion of miR-30a-3p overexpression or inhibition in ECA-109 cells were detected by Transwell invasion assay(crystal violet staining，×100).

2.3 miR-30a-3p對(duì)細(xì)胞增殖的影響無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

CCK-8結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染 miR-30a-3pagomir、miR-30a-3p antagomir、NC后，3組吸光度隨時(shí)間增長(zhǎng)無(wú)明顯差異（P＞0.05）（圖 3）。

圖3 CCK-8檢測(cè)miR-30a-3p過(guò)表達(dá)或抑制后對(duì)ECA-109細(xì)胞增殖能力的影響（P＞0.05）Fig.3 Proliferation of miR-30a-3p overexpression or inhibition in ECA-109 cells were detected by CCK-8 assay

2.4 miR-30a-3p靶基因預(yù)測(cè)

使用miRWalk 2.0軟件進(jìn)行miR-30a-3p靶基因預(yù)測(cè)，取軟件包含的5個(gè)預(yù)測(cè)數(shù)據(jù)庫(kù)（miRWalk、RNA22、miRanda、Targetscan）的交集，得到可能靶基因1041個(gè)；經(jīng)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫(kù)檢索得到靶基因4個(gè)，兩者取并集后共1044個(gè)。使用BRB-array tools分析ESCC芯片數(shù)據(jù)GSE20347得到差異基因共1163個(gè)，其中上調(diào)差異基因640個(gè)，下調(diào)差異基因521個(gè)（圖4）；與軟件及文獻(xiàn)靶基因集合取交集，最終可能在ESCC中作為miR-30a-3p靶基因的有77個(gè)（表1），其中上調(diào)差異基因42個(gè)，下調(diào)差異基因35個(gè)。

圖4 BRB-array tools分析Fig.4 BRB-array tools analyzed

表1 ESCC中miR-30a-3p調(diào)控的靶基因集合Tab.1 Target genes of miR-30a-3p in ESCC

2.5 miR-30a-3p靶基因的GO及KEGG生物信息學(xué)分析

使用DAVID軟件對(duì)可能在ESCC中作為miR-30a-3p靶基因的基因集合進(jìn)行GO和KEGG分析。GO分析篩選條件（表2）：P＜0.05且基因數(shù)＞2個(gè)，顯示miR-30a-3p靶基因功能主要富集于細(xì)胞及分子水平蛋白代謝過(guò)程、遷移及胞外外泌體等過(guò)程；由于篩選后基因較少導(dǎo)致結(jié)果較少，KEGG通路分析篩選條件：P＜0.10且基因數(shù)＞2，顯示miR-30a-3p靶基因主要富集于Ras信號(hào)通路、腫瘤及黏附連接相關(guān)等通路上。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，選擇與侵襲相關(guān)GO與KEGG相關(guān)基因的交集（表3）。

表2 miR-30a-3p靶基因的GO分子功能分類(lèi)Tab.2 Molecular functional classification of miR-30a-3p target genes by GO analysis

表3 miR-30a-3p靶基因KEGG信號(hào)通路富集分析結(jié)果Tab.3 KEGG pathway enrichment analysis of miR-30a-3p target genes

3 討論

在前期的ESCC芯片結(jié)果顯示，相比于癌旁正常組織，miR-30a-3p在癌組織中低表達(dá)，提示其可能是一個(gè)抑癌基因。其在ESCC中對(duì)細(xì)胞侵襲和增殖功能及分子機(jī)制的研究尚無(wú)報(bào)道。

miR-30a-3p從miR-30a前體的3’端臂加工而成[7]，據(jù)miRBase的報(bào)道，其相比于miR-30a-5p表達(dá)量要少，但其同樣在腫瘤中可能參與重要作用[8]。孫曉孌等[9]在人滋養(yǎng)腫瘤細(xì)胞系JEG-3中轉(zhuǎn)染miR-30a-3p后可通過(guò)降低IGF-1的表達(dá)，從而降低JEG-3的侵襲能力。Wang等[10]發(fā)現(xiàn)在肝癌中miR-30a-3p下調(diào)并可抑制細(xì)胞侵襲和增殖能力。結(jié)合我們前期的ESCC組織芯片結(jié)果，miR-30a-3p可能在ESCC中具有調(diào)控侵襲和增殖的作用。

目前主流的miRNA靶基因預(yù)測(cè)軟件有miRWalk 2.0、miRanda、RNA22 和 李 武 等[11]， 通 過(guò) 將 候 選miRNA和靶基因的3′UTR區(qū)域配對(duì)擬合，根據(jù)二者結(jié)合成雙鏈的自由能大小、以及靶序列在物種間是否具有高度保守性等幾個(gè)條件進(jìn)行預(yù)測(cè)。MiRWalk 2.0的優(yōu)勢(shì)在于不僅有自己的預(yù)測(cè)系統(tǒng)外，還整合了各大主流預(yù)測(cè)軟件，可以將預(yù)測(cè)的靶基因在多個(gè)預(yù)測(cè)軟件的數(shù)據(jù)庫(kù)中的頻次進(jìn)行排序[12-13]。然而，miRNA靶基因預(yù)測(cè)軟件仍處在研究當(dāng)中，根據(jù)組織特異性的靶基因預(yù)測(cè)還處在開(kāi)發(fā)當(dāng)中，ESCC相關(guān)的測(cè)序數(shù)據(jù)還不夠充足，因此需要結(jié)合既往文獻(xiàn)和實(shí)驗(yàn)室證據(jù)降低預(yù)測(cè)的假陽(yáng)性率，提高預(yù)測(cè)的準(zhǔn)確性。本研究中轉(zhuǎn)染miR-30a-3p后ECA-109的增殖能力改變無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示miR-30a-3p對(duì)ESCC增殖能力的調(diào)控可能較弱，但仍需更多細(xì)胞系實(shí)驗(yàn)及臨床資料驗(yàn)證。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，在GO及KEGG分析過(guò)程中，我們根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加關(guān)注與細(xì)胞侵襲相關(guān)的生物學(xué)功能及通路參與的基因。

通過(guò)細(xì)胞分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，提示miR-30a-3p的調(diào)控與細(xì)胞侵襲具有重要作用。在生物信息學(xué)分子功能注釋分析當(dāng)中可以看到有多個(gè)GO及通路指向侵襲、遷移能力，為進(jìn)一步研究提供了方向，但是靶基因及其功能需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)室分析及篩選。值得注意的是，其GO分析中顯示miR-30a-3p的靶基因可能參與外泌體的構(gòu)成，外泌體作為新的研究熱點(diǎn)，后期需要將miR-30a-3p在ESCC外泌體中的表達(dá)及功能作為新的研究方向。而且根據(jù)預(yù)測(cè)，miR-30a-3p是通路相關(guān)的重要調(diào)控因子，有可能作為重要的生物標(biāo)志物及治療靶點(diǎn)，對(duì)其深入研究將為臨床診治提高幫助。

本研究通過(guò)綜合細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)、高通量ESCC組織芯片及生物信息學(xué)方法對(duì)miR-30a-3p的功能及對(duì)應(yīng)的靶基因分子機(jī)制進(jìn)行了分析。結(jié)果顯示，miR-30a-3p可能通過(guò)調(diào)控多個(gè)靶基因參與信號(hào)通路，影響細(xì)胞的侵襲。這提示miR-30a-3p的異常表達(dá)可能是一個(gè)與ESCC轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)的重要生物學(xué)標(biāo)志，聯(lián)合靶向miR-30a-3p及其侵襲相關(guān)靶標(biāo)可能是增強(qiáng)ESCC療效的重要手段。我們?cè)诖舜窝芯恐兄魂P(guān)注了侵襲與增殖能力的調(diào)控，需要注意的是，ESCC的發(fā)生發(fā)展與自噬、凋亡、代謝等許多生物功能相關(guān)，這需要后續(xù)更加完善的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)支持。

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Roles of miR-30a-3p in invasion and proliferation of ESCC cells ECA-109 and bioinformatics analysis

Lu Mu1，F(xiàn)u Wenbo2，Song Yaqin3，Liu Yang4，Huai Shitao4，Lv Zuoli4，Du Yayan4，Wei yutao1*
(1 Department of Thoracic and Cardiovascular Surgery,the First Affiliated Hospital,School of Medicine,Shihezi University,Shihezi，Xinjiang 832002,China;2 Department of Cardiology,People's Hospital of Xinjiang Uygur Autonomous Region,Urumqi,Xinjiang 830001,China;3 Department of Nutritional,Jining First People's Hospital,Jining,Shandong 272111,China;4 School of Medicine,Shihezi University,Shihezi，Xinjiang 832002,China)

To investigate the invasion and proliferation effects of miR-30a-3p in ESCC,to get target genes of miR-30a-3p in ESCC by bioinformatics approaches,and to analysis the molecular functions in effects.Transwell invasion assay and CCK-8 proliferation assay were used to detect the invasion and the proliferation after transfecting ECA-109 with miR-30a-3p.Target genes of miR-30a-3p were predicted by bioinformatics,combined with relevant literature,ESCC GEO database and prediction software.DAVID database was used to analyze the GO(Gene Ontology)annotation and KEGG(Kyoto encyclopedia of genes and genomes)signal pathway enrichment respectively.The results showed that overexpression of miR-30a-3p could inhibit the invasion (P＜0.05),but had no effect on the proliferation (P＞0.05).There were 77 target genes in ESCC got by bioinformatics approaches,with 42 up-regulated genes and 35 down-regulated genes.GO of these genes were significantly involved in migration,adherent junction,exosome and protein metabolism.These target genes were mainly enriched in Ras signaling pathway.It is concluded that Mir-30a-3p can inhibit the invasion of ESCC,its target genes and their ontology and pathway provide directions for further research.

esophageal carcinoma;miR-30a-3p;invasion;proliferation;bioinformatics

R735.1

A

10.13880/j.cnki.65-1174/n.2017.04.012

1007-7383(2017)04-0462-06

2017-02-24

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（81460059），新疆兵團(tuán)博士基金項(xiàng)目（2014BB019）

盧沐（1989-），男，碩士研究生，專(zhuān)業(yè)方向?yàn)樾男赝饪茖W(xué)。

*通信作者：魏育濤（1974-），男，副教授，從事心胸外科相關(guān)研究，e-mail:wytfwb@126.com。